gis
у Результаты исследований _. rae Sh з В таблице 2 представлены результаты исследований. Полученн данные позволили сделать вывод о том, что наиболее близки к ON— тимальному составу варианты сред № 5,6,7,8 и 9, то есть среды, | содержащие 40-60`% желтка, 0-40 % молока и 0-40 % солевого раст-= всра. Из таблицы видно также, что наиболее важным компонентом B ЕЕазрабатываемой етсреде являетсяс желткомжелток. ceiДва их natorингредиента crt рост бластоцист (варианты 6,7). В то же время помещенные в чистый желток или солевой раствор зародыши ен Один эмбрион, | помещенный в кобылье молоко, за 12 часов культивирования незначительно увеличил свои размеры, однако оболочка aeбыла слегка, отслоена, что является признаком начинающейся дегенерации.
| № | Интенсивность | роста | бластоцист Е | в средах | разного Зебянца | состава fe | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Ee | Соотношение сре-!тов в | среде желток! | ингредиен-!1 (%) | | Гчасов серия | культивиро- опытов (121П вания) | серия !вирования) 1(24 часа | опытов культи- ; |
| | | i молоко | | Pe солевой leis | м puCDHOT | |—————— | J (4) | iP | мбри-1.74%) | |
| ae | о | вез | 4 | 1 | 5_1 6_1 | 2 | 118 |
| I | 100 | - | = | I | - | a>) | = |
| 2 | 80 | 20 | = | 2 | 490,9 | 23 | 232,80 |
| 3 | 80 | - | 20 | 3 | 429,6 | 24 | - s |
| 4 | 60 | 40 | - | : 4 | 344,8 | 25 | 370,3 |
| 5 | 60 | 20 | 20 | 5 | 166,7%) | 26 | 767,8 |
| 6 | 60 | - | 40 | 6 | "425,9 | ^ 27 | 1005,0 |
| 7 | 40 | 60 | Е | 7 | 304;9 | 28 | 773,9 р |
| 8 | 40 | 40 | 20 | 8 | 413,9 | 29 | 844,5 7 |
| 9 | 40 | 20 | 20 | 9 | 133,2) | 30 | 8649 = |
| то | 40 | - | 60 | 10 | 306,7 | 31 | 324,3%) |
| п | 20 | 80 | - | II | 340,4%) | 32 | 368, 1*) 1 |
| 12 | 20 | 60 | 20 | 12 | 398,9 | 33 | дар, 2х) |
| I3 | 20 | 40 | 40 | 13 | 273,0 | 34 | 709,7 |
| 14 | 0 | 2 | 60 | 14 | 123,8) | 35 | 626,7 |
| 15 | 20 | - | 80 | 15 | 366,7 | 36 | 610,4 |
| 16 | = | 100 | - | 16 | 176,1*) нени | 37 | a } |
- 207 -
| ios 18 19 20 21 | Ев - - . _ | ae 60 40 40 60 20 80 ГВ 100 | ee a OeИЯ 166,0% 18. Rf 19 239,6 20 С } al = | = 39 40 АТ 42 | meta 214,6 19,0 7 ~ | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Примечание: | знаком "-" бриона х) - оболочка в культуре; слоена; хх) - эмбрион развивался. | а обозначено бластолемма погиб, | полное хотя | отсутствие после какое-то | культивирования время, | роста ONE эм OT _ видимо, | |
Обсуждение результатов.
B оценке вариантов сред, наиболее близких к оптимальному составу, руководствовались прежде всего результатами 24-часоче выявляет стабильность вого культивирования, поскольку оно яр р ды.в развитииТак, в несколькихэмбрионов ислучаяхуказывает(средына степень№№2,4,10,11,17,16,19)полноценности ср обнаруживается явное замедление роста эмбрионов. Это MORE быть связано, вероятно, с двумя факторами: Г) недостаточное количество питательных веществ в среде или 2) недоступность sux дия эмбриона в той форме, в которой данные вещества. присутствуют в культуре. Опираясь на сведения из биохимии аа, яйца (2), можно предположить, что желток, содержащий весь на бор питательных Веществ, необходимых для полного развития о риного эмбриона, обеспечивает этими веществами нашу р ную cpefy B достаточном количестве. Отсюда становится me a р некоторое снижение инте“сивности роста бластоцист в ряду ыы и с #5 no№ 15 и почти noxnoe отсутствие роста в безжелточ ых средах (№ 16-21). Здесь же следует отметить, что кобылье м - локо все же имеет небольшой запас питательных веществ и pod поддерживать развитие эмбрионов лошади в течение короткого в b риода времени (среды № 16-20), в отличие от OBC о т: нако, как видно из таблицы, желток в количестве более ae среде начинает через некоторое время (после 12 часов культ ия |
у - 28 - рования) губительно действовать на эмбрионы. По-видимому, здесь вступает в действие второй из указанных факторов. Из = | эмбриологии птиц известно, что зародыш птицы аккумулирует пи=. тательные вещества только из разжиженного желтка. Механизм п рехода воды с солями из белка в желток обусловлен разностью › осмотического давления между ними в яйце и предусматривает, — помимо всего прочего, перевод питательных веществ желтка в доступное для эмбриона состояние. Похоже, что’и лошадиные эм= брионы предъявляют к желтку такие же требования. де с Возможносодержаниеми другоежелткаобъяснениесвыше 60 %.фактаНамигибелиотмечено,эмбрионовчто жизне=в сре’ способный зародыш лошади из-за своего удельного веса тонет в ФБС Дюльбекко, в молоке всплывает к поверхности, а в желтоксодержащих средах с повышением вязкости сверх определенной величины совпадающей с 80 4-ной концентрацией желтка в культу.| pe) начинеет опускаться с поверхности в толщу среды. Учитывая» что в условиях матки эмбрион постоянно мигрирует из одного рога в другой (3), обеспечивая себе таким образом интенсивное питание и активный газообмен, логично предположить, что в куль ральной среде интенсивность "дыхания" неподвижного зародыша, и, определяется степенью его погруженности в среду. Возможно or=" сюда исходит причина гибели эмбрионов в средах № 1-З и № 20-21, не позволяющих зародышам подняться к поверхности; Не случайно и то, что жизнеспособные эмбрионы всплывают к поверхности с ды,'а погибшие опускаются на дно флакона. : | у вах Я ae у .
В результате проведенных экспериментов выделен ряд KyJb— туральных сред (№ 5,6,7,8,9), включающих в свой состав. 40-60% желтка куриного яйца, 0-40 % кобыльего молока и 0-40 % фосфатно солевого буферного раствора Дюльбекко, которые позволяют:не витиетолько8,5-дневныхсохранять жизнеспособность,эмбрионов лошадейноinи w/troобеспечиватьв течениерост 24и ча сов культивирования.К достоинствам среды следует отнести возможность культи-i . вирования в ней экспандированных (со сброшенной блестящей обо= лочкой) бластоцист лошади, а также простоту в изготовлении,. OM
