наше понимание Pasteurella multocida, и предоставили исследователям много молекулярных инструментов для изучения патогенеза и эпизоотологии данного возбудителя на молекулярном уровне [194]. Учеными многих стран проводятся исследования по разработке различных методов ПЦР для идентификации штаммов Pasteurella multocida. Biswas A, Shivachandra SB, Saxena MK, Kumar AA, Singh VP, Srivastava SK. отмечают, что молекулярные методы выявления и типирования превосходят обычные методы исследований геморрагической септицемии [195].
Miflin JK, Blackall PJ., с целью разработки быстрого диагностического теста для идентификации Pasteurella multocida, разработали ПЦР анализ, используя праймеры полученные на последовательность гена 23 rRNA Pasteurella multocida. ПЦР исследование правильно идентифицировало все 144 исследованных изолята Pasteurella multocida, включая штаммы трех подвидов и референтные штаммы для типирования по схеме Heddleston и Carter. Из 20 проверенных близкородственных бактерий из семейства Pasteurellaceae только штаммы типа Pasteurella canis biovar 2 и Pasteurella avium biovar 2 были положительны. Эти две бактерии, прежде известные как Bisgaard Таксон 13, являются самыми близкими филогенетическими родственниками Pasteurella multocida, основанными на 16S рибосомальной рРНК. Все проверенные филогенетически несвязанные штаммы других возбудителей, выделенные от птиц и свиней, были отрицательны. Данный метод на основе ПЦР позволяет быстро идентифицировать колонии Pasteurella multocida птичьего или свиного происхождения. Авторы рекомендуют использовать данную модификацию ПЦР для быстрой и точной диагностики холеры домашней птицы и пастереллеза свиней [196].
Sellyei B, Varga Z, Ivanics E, Magyar T охарактеризовали и сравнили биохимическими тестами, методами капсульного типирования ПЦР и ERIC-ПЦР 61 штамм Pasteurella multocida, выделенные от различных видов птиц, представляющих различные географические области Венгрии. По результатам исследований, основанным на анализе группы штаммов, были выделены четыре большие и четыре минигруппы, которые показали значительную корреляцию с географическим происхождением и видом хозяина. Результаты их исследований показали, что ERIC-ПЦР может быть подходящей методикой для изучения адаптации Pasteurella multocida к хозяину и эпизоотологии возбудителя пастереллезов домашней птицы [197].
Saxena MK, Kumar AA, Chaudhari P, Shivachandra SB, Singh VP, Sharma B. оценивали применимость риботипирования основанного на 16S рРНК и 23S рРНК. Были риботипированы 48 изолятов Pasteurella multocida изолированных от различных хозяев и географических мест
Индии и один референтный изолят. Исследователями выявлено только четыре риботипа. Все изоляты, включая референтный от диких плотоядных животных, имели один и тот же риботип, хотя у них были различные серотипы. Один изолят от тигра имел дополнительную группу к представленным в главном риботипе группам. Изоляты от львов представляли два риботипа; из этих риботипов один (r2) имел дополнительную группу 3.6 kbp, которая отсутствовала во всех других риботипах. У второго риботипа (r4) от льва отсутствовала одна группа (6 kbp), которая присутствовала в другом риботипе. Изоляты были далее типированы, используя методы ERIC-ПЦР и REP –ПЦР, в результате чего были получены индексы дискриминации (D) 0.83 - 0.89. Данное исследование показало, что риботипирование не очень эффективный инструмент молекулярной эпизоотологии для видовой дифференциации изолятов [198].
Liu D, Lawrence ML, Austin FW. идентифицировали два гена - Pm0762 и Pm1231 - уникальных для P. multocida. Используя разработанные для этих генов олигонуклеотидные праймеры (Pm0762F/R и Pm1231F/R), получили специфичные продукты ДНК ожидаемых размеров только от геномной ДНК P. multocida. Результаты их исследований показали, что предполагаемые гены регуляторы транскрипции - Pm0762 и Pm1231 - являются специфичными для видов P. multocida и методы ПЦР, предназначающиеся для этих генов, обеспечивают быструю и точную идентификацию P. multocida от других бактерий; способствуют объяснению ролей и функций этих генов и их белковых продуктов, а также являются ценными для понимания молекулярного механизма вирулентности P. multocida [199].
Nagai S, Someno S, Yagihashi T. разработали ПЦР анализ для дифференцирования вирулентных штаммов Pasteurella multocida subsp. multocida от авирулентных штаммов на основе toxA гена. Был амплифицирован toxA ген, кодирующий 143-kDa дермонекротического токсина, который, как полагают, является центральным этиологическим фактором прогрессирующего атрофического ринита свиней. Полученные результаты ПЦР 187 областей ДНК изолятов P. multocida, были совместимы с результатами тестов на коже морских свинок и анализа иммуноблотинга [200].
Fisher MA, Weiser GC, Hunter DL, Ward AC. провели исследования методом ПЦР для определения леукотоксина lktA - структурного гена Pasteurella - в изолятах Pasteurella haemolytica и P trehalosi и коррелляции их бета – гемолитической деятельности с обнаружением lktA гена. Производство и секреция леукотоксина - главный фактор вирулентности, когда другие условия благоприятны для развития болезни. Было исследовано147 изолятов Pasteurella haemolytica от 21 биовариантных групп, и 101изолят Pasteurella trehalosi от 7
биовариантных групп. LktA ген был обнаружен в 108 (44 %) изолятах, включая 15 связанных с болезнями дыхательных путей. Все кроме 2 (98 %) изолятов, у которых был lktA ген, были бета-гемолитиками когда выращивались на кровяном агаре овец [201].
Boucher DJ, Adler B, Boyce JD. использовали множество методов, чтобы идентифицировать факторы вирулентности Pasteurella multocida, включая технологию экспрессии in vivo (IVET). Ими был сконструирован изогенный штамм P. multocida , который не был способен редуцировать нитриты при аэробных и анаэробных условиях, таким образом, демонстрируя, что nrfE ген P. multocida является существенным для редукции нитритов. Однако, nrfE мутант оставался вирулентным для мышей. Анализ ОТ-ПЦР в реальном времени показал, что nrfE был отрегулирован независимым от nrfABCD покровителем, который, вероятно, является сорегулятором в естественных условиях [202].
С целью получения больших данных о молекулярной биологии Pasteurella multocida Ewers C, Lübke-Becker A, Bethe A, Kiebling S, Filter M, Wieler LH. исследовали методом ПЦР и ДНК-ДНК гибридизации гены капсульного биосинтеза (capA, B, D, E, и F) и 14 вирулентно ассоциативных генов 289 штаммов, изолированных от различных клинически здоровых и больных животных. Как ожидалось, штаммы капсульного типа были чрезвычайно адаптированы к крупному рогатому скоту (92.3 %) и домашней птице (85.7 %), в то время как, capA (34.9 %) и capD (58.1 %) - позитивные штаммы выделены от свиней. Значимое количество capD-положительных штаммов выделены от мелкого рогатого скота (34.9 %) и capF - в штаммах дикого типа от больного крупного рогатого скота (2.2 %) и кошек (7.4). Гены toxA, tbpA и pfhA предположительно так же, как гены капсульного биосинтеза, являются важными эпидемиологическими генами маркерами для того, чтобы характеризовать штаммы Pasteurella multocida [203].
Orth J.H., Aktories K., Kubatzky K.F. методами ПЦР выяснили, что токсин Pasteurella multocida (PMT) вызывает активацию STAT белков, и идентифицировали STAT1, STAT3, и STAT5 белки как новые цели PMT индуцированных Galpha (q) сигналов. Поскольку конститутивная активация STAT белков была найдена во многих раковых образованиях, результаты данных исследований предлагают новый механизм канцерогенной роли PMT [204].
Tang X, Zhao Z, Hu J, Wu B, Cai X, He Q, Chen H. в 2009 году исследовали в общей сложности 233 изолята Pasteurella multocida на чувствительность к 20 антибиотикам и присутствие 19 генов факторов вирулентности (VFs), полученные от 2 912 случаев клинического пастереллеза свиней в Китае. Частота антибактериальной резистентности среди изолятов P. multocida, выделенных от свиней в
