пастереллезом птиц на 0,6%. Возможно, это объясняется тем, что бактериологических исследований материалов от птиц стало меньше

2.2.2 Выделение эпизоотических штаммов Pasteurella multocida и изучение их биологических свойств

Нами проведены исследования по выделению эпизоотических штаммов пастерелл, сравнительному изучению основных биологических свойств выделенных культур с эталонным штаммом Pasteurella multocidа 90 с целью дальнейшего использования для молекулярно - биологических исследований.

Нами были изучены морфологические, культуральные, биохимические, вирулентные свойства выделенных культур.

Пастереллы – короткие овоидные палочки, грамотрицательные, неподвижные (рисунок 5).

Отмечается биполярность при окраске по Романовскому-Гимзе, при окрашивании по Михину обнаруживали капсулу.

Культуральные свойства изучали при посеве на плотные и жидкие питательные среды при температуре 37⁰ , рН 7,2-7,4. При культивировании на плотных питательных средах (МПА) в обогащенной 5%-ой сывороткой крови лошади пастереллы представляют собой мелкие, гладкие, округлые ровными краями колонии.

На МПБ пастереллы образуют равномерное помутнение среды, при встряхивании пробирки отмечаются муаровые волны. Культуры пастерелл обладают специфическим запахом, не образуют пленку и пристеночного кольца.

При изучении биохимических свойств эпизоотических штаммов пастерелл установили, что все они ферментируют без образования газа: глюкозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, сорбит, маннит, не ферментируют лактозу, ксилозу, арабинозу, восстанавливают нитраты в

50

нитриты, обладают каталазной активностью, образовывают индол, сероводород, не вызывают гемолиз эритроцитов, не разжижает желатин, не свертывает молоко.

Данные биохимических свойств пастерелл отражены в таблице 3.

Таблица 3- Биохимические свойства производственных штаммов P.multocida

При изучении вирулентных свойств эпизоотических штаммов пастерелл А1, К1,К2 на белых мышах с массой 18-20 г. (таблица 4) с определением ЛД50 путем внутрибрюшинного введения вирулентной культуры пастерелл 15 КОЕ, 50 КОЕ и 100 КОЕ.

Таблица 4 - Вирулентные свойства эпизоотических штаммов пастерелл на белых мышах

Как видно из таблицы 4 вирулентность эпизоотических штаммов пастерелл для белых мышей составило 15 - 100 КОЕ.

2.2.3 Изучение биологических свойств штамма Pasteurella multocida 90

Из коллекции музея лаборатории противобактериозной биотехнологии получаем лиофильно высушенные штамм P.multocida 90. Ампулу с аморфным веществом растворяем физиологическим раствором [рН 7,2-7,4] получаем 20 млрд. КОЕ, затем проводим серийное разведение и из 5, 6 пробирки производим посевы по 0,1 см³ в чашки Петри для подсчета количества колоний. Через 24 часа после инкубации при визуальном просмотре роста колоний в чашки Петри должно быть не менее 100-200 КОЕ.

На питательных средах культуры P.multocida 90 сохраняют исходные свойства не более 10 пассажей. Поэтому в период использования данного штамма пастерелл проводили пассажи культур на белых мышах, что обеспечивало повышение их вирулентности. Так как иммуногенные свойства возбудителя обусловлены наличием капсулы, не менее важным условием является сохранение музейных штаммов пастерелл в фазе, образования капсулы, а этим условием является животный организм, из которого выделен данный штамм.

Нами были изучены морфологические, культуральные, биохимичесике, вирулентные свойства музейного штамма P.multocida 90.

Штаммы P.multocida 90 – короткие овоидные палочки (длиной 0,31,5 мкм и шириной 0,15-0,25 мкм), грамотрицательные, неподвижные (рисунок 4). Отмечается биполярность при окраске по РомановскомуГимзе, при окрашивании по Михину обнаруживали капсулу, ее наличие связано со степенью вирулентности штаммов.