Диагностика пастереллеза крупного рогатого скота методом ПЦР

Как видно из рисунка, в мазках пастереллы располагаются изолированно иногда парами, реже в виде цепочек

Культуральные свойства изучали при посеве на плотные и жидкие питательные среды при температуре 37⁰ , рН 7,2-7,4. По характеру роста на плотных питательных средах (МПА) обогащенной 5%-ой сывороткой крови лошади выявили три типа колоний: гладкую S-форму, которые представляют собой мелкие, гладкие, округлые, прозрачные с голубоватым оттенком ровными краями (рисунок 7).

На необогащенном МПА пастереллы растут в виде нежных мелких росинчатых колоний, слегка опалесцирующих в проходящем свете (рисунок 8). Для выделения чистых культур пастерелл производили дробный посев исследуемого патологического материала на чашки Петри с обогащенными средами МПА (по две-три чашки на каждое исследование).

Как видно из рисунка в косопроходящем свете колонии имеют радужное свечение, что связано с капсулообразованием. При длительном хранении культур происходила диссоциация, в результате чего S-форма колоний переходила в R и М - формы. R-форма представляет собой непрозрачные с шероховатыми краями колонии, а М-форма (мукоидная) слизистые, с неровными краями колонии. Также, при изучении культуральных свойств, производили посевы пастерелл в бульон Хоттингера и МПБ (рисунок 9).

Как видно из рисунка при культивировании пастерелл в бульоне Хоттингера и МПБ штамм Pasteurella multocida 90 давал типичный рост, вызывая равномерное помутнение среды с образованием незначительного осадка на дне культивируемого сосуда, при встряхивании отмечаются муаровые волны, по мере старения культуры происходит просветление среды с образованием слизистого осадка на дне пробирки, поднимающегося при встряхивании в виде косички. Штамм Pasteurella multocida 90 обладает специфическим запахом, не образуют пленку и пристеночного кольца

Данные результатов изучения биохимических свойств Pasteurella multocida 90 отражены в таблице 3.

Таблица 5 – Биохимические свойства штамма Pm 90

Как видно из данных таблицы 5, штамм ферментирует без образования газа: глюкозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, сорбит, показал вариабельность в отношении маннита, не ферментирует лактозу, ксилозу, арабинозу, восстанавливает нитраты в нитриты, обладает каталазной активностью, образовывает индол, сероводород, не вызывает гемолиз эритроцитов. Согласно определителю бактерии Bergey^| s (1984) тесты на индол и гемолиз эритроцитов являются основными показателями для определения вида у представителей рода Pasterella, то есть служат для дифференциации P.multocida от P.haemolitica. P.multocida - 90 также не разжижает желатин, не свертывает молоко.

Далее нами были изучены вирулентные свойства эталонного штамма P.multocida 90 на белых мышах с массой 18-20 г. (таблица 6) с определением ЛД50 путем внутрибрюшинного введения вирулентной культуры пастерелл 50 КОЕ, 100 КОЕ и 150 КОЕ.

Таблица 6 - Вирулентные свойства эталонного штамма P.multocida 90 на белых мышах

Из таблицы видно, что вирулентность эталонного штамма P.multocida 90 для белых мышей составило 50-150 КОЕ. Таким образом, для эпизоотических и музейного штаммов пастерелл характерными являются: полиморфизм, отрицательная окраска по Граму, выраженная биполярность при окрашивании по Романовскому-Гимзе, наличие капсулы при окраске по Михину, рост в аэробных условиях на обычных питательных средах, но лучше с добавлением сыворотки лошади, образование на плотных питательных средах гладких S-форм колоний с радужным свечением в косопроходящем свете, рост на МПБ, бульоне Хоттингера сопровождающиеся помутнением среды с последующим просветлением с образованием слизистого осадка, при встряхивании поднимающегося в виде косички, способность образовывать индол и сероводород, не способность гемолизировать эритроциты, вариабельность биохимических свойств. Все исследованные штаммы пастерелл обладают вирулентными свойствами.