У коров первичный туберкулезный процесс в 94% случаёв обычно локализуется в легких, бронхиальных, средостенных, а в остальных случаях в заглоточных лимфоузлах. Макроскопически сформировавшийся туберкулезный узелок представляет собой плотное округлое образование различной величины. Центральная его часть желтовато-белого цвета, крошится наподобие творога (казеозный некроз), в ней можно увидеть и прощупать крупинки извести. По периферии располагается серовато-белый пояс грануляционной ткани.
Bo всех случаях, когда обнаруживают туберкулезные изменения и когда их не выявляют, проводят лабораторные исследования. Материал для лабораторного исследования нужно брать сразу же после убоя животного/вырезая кусочки размером 10 - 15 мм в длину, 5 - 10 мм - в ширину и З - 4 мм в толщину. Кусочки паренхиматозных органов и лимфоузлов помещают в чистую стеклянную посуду и заливают фиксирующей жидкостью. Для бактериологических исследований материал фиксируют 30 %-ным водным раствором глицерина, для гистологических исследований - 8 - 10 %-ным раствором формалина.
Лабораторные методы диагностики.
B лаборатории материал исследуют бактериоскопическим (световая и люминесцентная микроскопия), бактериологическим (выращивание на искусственных питательных срёдах), биологическим (биопроба на морских свинках, кроликах и курах) и гистологическим методами.
Бактериоскопический метод. Для прижизненного диагноза используют молоко, бронхиальную слизь, фекалии, истечение из влагалища, иногда сперму и мочу; для посмертного - кусочки пораженных и непораженных паренхиматозных органов: легких, печени, селезенки, а также лимфоузлов.
B лаборатории прежде всего проводят бактериоскопию мазков, окрашенных по Цилю - Нильсену, или используют люминесцентный метод. Данный способ окраски основан на тинкториальном свойстве микобактерий принимать красный цвет (по Цилю -Нильсену) и сохранять устойчивость при воздействии кислот и щелочей.
Люминесцентный способ основан на способности микобактерий к окрашиванию люминесцирующими красителями и свечению под действием сине-фиолетового освещения. От каждого органа готовят по два мазка. B каждом окрашенном мазке просматривают под микроскопом не менее 50 полей зрения. Более чувствительным считается люминесцентный метод. Разработан ускоренный метод выделения туберкулезных микобактерий из молока с помощью прямого флуорохромирования. При этом, в 100% случаев результаты подтверждены классическими исследованиями - заражением животных и выделением чистой культуры (В.M. Карташова, 1976). Однако как положительные; так и отрицательные результаты световой и люминесцентной микроскопии следует подтверждать, особенно при
первичном диагностировании, бактериологическими и биологическими методами исследования.
B необходимых случаях рекомендуется использовать методы обогащения исследуемого материала путем флотации и седиментации, что значительно повышает вероятность обнаружения микобактерий.
Бактериологическая диагностика туберкулеза имеет определенные преимущества по сравнению с бактериоскопическими методами. Она дает положительные результаты даже при наличии в 1мл исследуемого материала небольшого количества (20 - 100) микробных клеток, тогда как установить туберкулез микроскопическим методом удается только в тех случаях, когда в 1 мл исследуемого материала содержится нё менее 100 тыс. микобактерий (Р.0. Драбкина,1968).
B основе культивирования микобактерий лежит их способность размножаться in vitro на соответствующих питательных средах. Чтобы получить чистые культуры возбудителя туберкулёза, материал подвергают предварительной обработке. Предложено много методов патологического материала с применением кислот, щелочей и других веществ, которые гомогенизируют материал и убивают сопутствующую микробную флору. Выбор метода зависит от свежести исследуемого материала. Наиболее часто применяют общеизвестные методы А.П. Аликаевой, Гона, Левёнштейна, Сумиоши, Мазура и др.
Обработанный для исследования материал высевают в 5 - 10 пробирок с яичной средой и инкубируют в термостате при 37 °С. Для выявления начального роста, пробирки с посевами просматривают не реже одного раза в неделю. Если обнаруживается рост, то у выделенных культур изучают характер колоний, тинкториальные свойства при окраске по Цилю - Нильсену, морфологические и культурные свойства путем пересева на различные питательные среды, МПА, МПБ, культивируя их при разных температурных режимах: 20 - 22°, 37 - 38° и 45° С.
Для более раннего выявления микобактерий туберкулеза предложен метод микрокультивирования, модифицированный в 1941 г. Праисом. Данный метод в отличие от классического позволяет поставить диагноз за 5 - 10 дней (Р.В. Пожалови др., 1965; Варец, 1972).
Сравнительным изучением искусственных питательных сред, применяемых в практических лабораториях различных стран, установлено, что на жидких питательных средах (Банича, Школьниковой и картофельной среде с сывороткой) при посеве любого патологического материала рост туберкулезных микобактерий обнаруживается к 12-му дню, а на яичных, средах Гельберга и Левенштейна - Иенсена - к 30-му. B ветеринарных бактериологических лабораториях рекомендуется пользоваться пируватсодержащей средой (Н.А. Александров, 1974) или средой Гельберга, но исследуемый материал обрабатывают предварительно 5% раствором щавелевой кислоты, которая слабо влияет на микобактерии туберкулеза и
одновременно обезвреживает постороннюю микрофлору (Д.Д. Новак, 1968; В.H. Банникова, 1980).
В целях большей вероятности получения культур микобактерий, а также одновременной групповой их дифференциации высевают исследуемый материал также сразу на несколько сред: Петраньяни, МПА, МПБ, а иногда и на среду для выращивания возбудителя паратуберкулеза (Г.А. Юдин, 1968). Делая высевы на среды Петраньяни и Гельбера из органов и тканей со специфическими изменениями, можно получить рост микобактерий туберкулеза в 88,8 %, из гиперплазированных лимфоузлов - в 18,2 , а из лимфоузлов, макроскопически не измененных - в 10,9 % случаев (Л.К. Сидорова,1969), а из носового секрета животных, реагирующих на туберкулин, до 5% случаев (Konter et al., 1978).
Ha основе яичных питательных сред и углеводородов (н-алканов) Л.М. Ходун (1997) создал новую питательную среду ФАСТ-ЗЛ. При посеве суспензии биоматериала от больных туберкулезом животных по данным автора сроки роста на среде ФАСТ-ЗЛ сокращаются по сравнению со средой Гельберта в 2,7 раза с одновременным увеличением интенсивности роста бакмассы в 2,5 раза.
Для повышения эффективности бактериологического метода исследования при туберкулезе крупного рогатого скота В.Г. Кондратьев (1980) считает целесообразным создавать повышенную концентрацию углекислого газа в, емкости, где культивируются микобактерий. B таких условиях он получил положительных результатов на 15% больше. Ha основании характера роста культур на питательных средах можно ориентировочно дифференцировать туберкулезные культуры млекопитающих (человеческий и бычий виды) от других микобактерий (птичий вид, атипичные и сапрофитные). Однако окончательную видовую принадлежность выделенных микобактерий туберкулеза устанавливают на основании результатов биологического исследования.
Серологическая диагностика . Наиболее приемлемой для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота является реакция связывания комплемента. Однако мнения о диагностическом значении PCK при туберкулезе разноречивы. С.Н. Вышелесский (1913), изучая РСК с сыворотками больного туберкулезом крупного рогатого скота, получил положительные результаты в 42,9% случаев. П.П. Вишневский (1928) предложил ставить PCK по Шютцу - Шуберту. А.M. Говоров (1933) доказал более высокую чувствительность PCK с антигеном Боккэ и Негри для выявления животных, больных активной формой туберкулеза. Й.А. Каркадиновская (1956), А.H. Макковейская (1964), М.А. Журнакова и др. (1964) также пришли к выводу, что РСК представляет определенную ценность.
Т.А. Луценко (1949 - 1961) приготовил антиген из полисахаридного комплекса, полученного из микобактерий туберкулеза, и доказал высокую специфичность и чувствительность PCK с полученным антигеном. Эти
