Современные методы диагностики и меры борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота

(Л.А. Митинская, 1966, и др.). Таким образом, сроки выведения из организма микобактерий вакцинного штамма БЦЖ и длительность иммунитета не совпадали, к тому же не было известно о судьбе микобактерий БЦЖ в организме вакцинированных. В последующем Н.Л. Шмелев, И.Р. Дорохова и 3.С. Земскова обнаружили у микобактерий БЦЖ способность образовывать Л-формы, т.е. персистироваться в привитом организме в Л-форме длительное время, поддерживая противотуберкулезный иммунитет.

Исследованиями И.Р. Дорожковой (1974) установлено, что уже через 2 недели после вакцинации из лимфоузлов выделяются наряду с бактериальными формами и Л-формы. По мере увеличения срока с момента вакцинации процесс Л-трансформации постепенно углублялся: до 5 мес. выделялась смесь Л-формы и БЦЖ, после 5 мес. бактериальные формы обнаруживались лишь в единичных случаях, к 11 месяцам имелись только Л- формы. Все эти факты свидетельствуют о том, что специфический иммунитет противотуберкулезной инфекции существует довольно длительно в результате индуцирования микобактериями или их антигенами.

Для изучения напряженности поствакцинального иммунитета у крупного рогатого скота, привитого вакциной БЦЖ, использовали клеточную реакцию бласттрансформации лимфоцитов (М.А. Сафин, 1976). У животных, исследованных РБТЛ после иммунизации, отмечалось активное бластообразование (табл. 6). В мазках, окрашенных азур-эозином, лимфоциты имели характерные круглой формы ядра. Последние были плотными, располагались чаще эксцентрически, в узком поясе цитоплазмы. Наблюдались весьма значительные колебания в размерах лимфоцитов

Лимфобласты в отличие от лимфоцитов имели большое ядро, неравномерно распределенный хроматин, выраженную перинуклеарную зону; они отличались также размером и конфигурацией цитоплазмы. Ядра чаще имели вид «формы Ридера». В мазках лимфобласты обычно располагались группами, по 2 – 3 и более. Таблица 6. Результаты реакции бласттрансформации лимфоцитов у крупного рогатого скота.

Примечание: доза туберкулина 60 мкг/мл.

В группах животных, вакцинированных БЦЖ, отмечалось бластообразование до 12 - 17% лимфоцитов.

У животных, клинически здоровых и не привитых БЦЖ, реакция бласттрансформации лимфоцитов со специфическим антигеном ППД чаще была отрицательной или же не превышала 3%.

У животных, зараженных, возбудителем туберкулеза, отмечалось резкое угнетение бластообразования. В культурах лимфоцитов под влиянием ППД образовалось в среднем 1,5% бластов, при контроле - 0,5%. Большая часть бластов у данных животных, под действием антигена ППД подвергалась разрушению.

Таким образом, результаты исследований показали, что у животных, иммунизированных вакциной БЦЖ, продолжительность аллергической реакции на внутрикожное введение туберкулина не превышает обычно 10 - 12 мес. Но реакция стимуляции бласттрансформации в культуре лимфоцитов периферической крови у этих животных под влиянием туберкулина сохраняется годами.

Следовательно, РБТ лимфоцитов in vitro позволяет судить о наличии и напряженности клеточного иммунитета у крупного рогатого скота против туберкулезной инфекции.

При изучении напряженности и продолжительности иммунитета у вакцинированных БЦЖ животных мы также определяли формы персистирования микобактерии БЦЖ в организме (М.А. Сафин, 1980). Исследования проводили по методу Дорожковой (1974), а также бактериологически и с помощью биологической пробы на морских свинках (табл. 7). Материалом для исследования служили лимфоузлы и паренхиматозные органы вакцинированных БЦЖ животных, взятые асептически сразу после убоя в различные сроки после проведения вакцинации (от 1 лет).

Таблица 7. Результаты микробиологического исследования материала, полученного от телят, вакцинированных БЦЖ.

У всех культур изучали морфологические и культуральные особенности, а также вирулентность для лабораторных животных. Культуры, представляющие собой смесь бактериальных и нестабильных Л-форм микобактерий БЦЖ, на плотных питательных средах дали рост в виде сухих

морщинистых колоний светло-кремового цвета, а на среде Школьниковой - типичные «косы», состоящие из микобактерий БЦЖ.

В мазках обнаруживались скопления однородной зернистости, среди которых, выявлялись и отдельные микобактерий БЦЖ. При двух-трех последовательных пассажах на морских свинках получали чистую культуру БЦЖ. 16 культур при пересевах на плотных и жидких средах, а также при пяти последовательных пассажах на морских свинках оказались условно стабильными. Они давали рост подобных себе культур, состоящих из скоплений темных и. светлых шаровидных тел различной величины или же в виде различных типов зернистости, где микобактерий БЦЖ в бактериальной форме отсутствовали.

Эти культуры при дальнейших пересевах утратили рост. Принадлежность их к БЦЖ была доказана косвенным методом на основании вызванных ими в лимфоузлах у морских свинок специфических изменений, характерных для морфологических реакций при нормальном вакцинном процессе.

Из выделенных нами культур 6 оказались нестабильными вариантами Л-форм и при последовательных двух пассажах - одна культура, трех пассажах - 3, четырех пассажах - 2 культуры дали реверсию в бактериальные формы БЦЖ, что явилось прямым доказательством их принадлежности к микобактериям вакцинного штамма БЦЖ. Они росли на плотных питательных средах в виде сухих морщинистых выпуклых колоний светлокремового цвета. Колонии были нежными и росли менее интенсивно, чем обычная культура БЦЖ.

На жидких средах они росли в виде обрывков «кос». В мазках, окрашенных Циль-Нильсену, обнаруживались красные полиморфные зернистые палочки. Ниациновая проба дала у всех культур отрицательный результат, что подтверждает их принадлежность к микобактериям бычьего вида (БЦЖ). Все они оказались устойчивыми к циклосерину, что является одной из биологических особенностей вакцинного штамма БЦЖ, и чувствительными к стрептомицину и ПАСК.

В основе феномена Л трансформации лежит нарушение координации роста и размножения микробной клетки. Л-формы образуются при воздействии факторов, вызывающих дисфункцию их роста и размножения, разрушающих поверхностную структуру клеточной стенки, блокирующих отдельные - звенья ее синтеза и повреждающих глубоко локализованные элементы цитоплазматической мембраны или цитоплазмы, связанные с синтезом клеточной стенки. В специальной литературе имеется много данных об Л-трансформирующем воздействии противотуберкулезных препаратов - изониазина, рифамицина, циклосерина и других, а также некоторых антибиотиков. Наилучшие результаты получены при совместном воздействии пенициллина и дигидрострептомицина. Однако в вакцинированном организме животных Л-индуцирующим фактором является макроорганизм со всеми его защитными механизмами. Животные,