ские клетки выпадают в осадок, какая-то часть их остается в слое сливок. Поэтому при нагревании молока перед центрифугированием до температуры 60-70°С объем осадка увеличивается.
Проба Уайтсайда — довольно распространенный диагностический тест. Для постановки пробы используют 4 %- ный раствор едкого натра, который смешивают с молоком в соотношении 1:5. При наличии воспалительных процессов в вымени (положительная реакция) образуется густая тягучая масса с хлопьями. В молоке здоровых животных такой массы не образовывается. Для упрощения реакции и ускорения исследований обычно берут 0,1 мл щелочи и 0,5 мл молока.
Некоторые исследователи признают пробу Уайтсайда достаточно чувствительной и пригодной для выявления различных состояний вымени, при помощи которой можно обнаружить до 80 % и более коров, подозреваемых в заболевании маститом. При изучении механизма действия пробы Уайтсайда оказалось, что степень реакции ее зависит не только от количества лейкоцитов, но и содержания молочного жира и солей кальция в молоке.
В настоящее время широко применяют также и быстрые маститные тесты из поверхностно-активных веществ, которые, по многочисленным данным, дают хорошие результаты при диагностике мастита, отражая количество соматических клеток в молоке. Одним из таких тестов является калифорнийская маститная проба (КМТ).
Действующим началом в ней являются поверхностноактивные вещества типа алкиларилсульфатов и алкиларилсульфонатов. Данная проба заключается в смешивании равных объемов молока и раствора реактива (3—5 %-ного). Ставят ее на специальных пластмассовых пластинках с четырьмя цилиндрическими углублениями. В углубления надаивают из каждой четверти вымени по 2 мл молока и добавляют такое же количество реактива из пластмассовой шприц-бутылки. Молоко с реактивом перемешивают круговыми движениями пластинки. При повышенном содержании клеток в молоке через 5—10 с образуется желеобразная масса (густота по-
следней зависит от количества клеток). Реактив включает индикатор бромкрезоловый пурпурный, который одновременно показывает изменения рН молока. Положительная реакция по КМТ разграничивается на три степени: слабо положительная, четко положительная и сильно положительная.
По данным авторов калифорнийской маститной пробы и других исследователей, которые предлагают данный тест, результаты пробы соответствуют содержанию клеток в молоке.
Суть и механизм действия калифорнийской маститной пробы заключается в том, что в реакцию с поверхностноактивным веществом вступают ядра клеток. При этом оболочка ядер разрушается, дезоксирибонуклеиновая кислота, содержащаяся в них, освобождается и придает молоку, смешанному с реактивом, вязкую консистенцию.
Определение щелочности молока с помощью индикаторов. Щелочность молока устанавливают путем добавления в него индикаторов, изменяющих окраску при рН 6,0—7,0. Нормальное молоко имеет рН близкую 6,5— 6,7, с отклонениями в пределах 6,3—6,9. Реакция молока при клинических формах воспаления вымени, в том числе и скрытых маститах, почти всегда щелочная и очень редко кислая.
Проба с индикаторными бромтимоловыми карточками. На карточке имеется четыре кружка, пропитанные обычно бромтимоловым синим. Для диагностики маститов на пятно индикаторной карточки выдаивают из каждого соска 1—2 капли молока и наблюдают за изменением их окраски в течение 10—15 секунд. Если кружок окрашивается в желтый или желто-зеленый цвет, молоко считается нормальным, если в сине-зеленый, зеленый или желто-зеленый, то это свидетельствует о наличии мастита.
Каталазная проба. В градуированную центрифужную пробирку наливают 9 мл молока и 1 мл 3%-ного раствора перекиси водорода, закрывают резиновой пробкой со вставленной в нее изогнутой стеклянной трубочкой, переворачивают вверх дном и оставляют на три часа при комнатной температуре. После этого отмечают количество выделившегося кислорода. При выделении 4 см3 и более кислорода реакцию
считают положительной, от 3 до 4 — сомнительной, менее 3 см3 — отрицательной.
Следует отметить, что количество каталазы в молоке увеличивается не только при воспалении вымени, но и в молоке здоровых коров (в первые 5 дней после отела, в период запуска и даже в середине лактационного периода). Каталазная проба становится резко положительной при наличии в молоке эритроцитов, что в большинстве случаев не является признаком мастита. Иногда каталазная проба дает положительную реакцию без заметного увеличения количества клеток в молоке.
Таким образом, по объему выделившегося кислорода трудно судить о количестве клеток в 1 мл молока и наличии лейкоцитов или эритроцитов. Методика каталазной пробы сложна, требует много времени, а поэтому неприменима в практических условиях.
Фёльген-проба на ДНК.
В пробирку к 2 мл молока добавляют 2 мл 2н HCl и ставят в водяную баню при температуре 60° на 24 минуты. Затем добавляют 4 мл реактива Шиффа и оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Появление интенсивно сиреневого цвета указывает на наличие ДНК (положительная реакция).
Титрация лизоцима М. Отсутствие лизоцима М не является прямым признаком воспаления молочной железы, но при наличии мастита лизоцим М в основном отсутствует. Поэтому титрация лизоцима М в молоке отдельных долей вымени служит дополнительным методом диагностики маститов.
Молоко исследуют на наличие и концентрацию лизоцима М путем чашечной титрации на агаре с луночками (по В. И. Мутовину).
В качестве питательной среды берут мясопептонный агар (МПА), рН которого 7,2. Наливают его в чашки Петри слоем 2,5—-3 мм. Затем среду подсушивают, выдерживая при температуре 2—6° в течение 18—24 часов, после чего
