Вслед за анализирующей абсорбцией сыворотку подвергают конфронтации с панелью эритроцитов известных по антигенным свойствам. Для контроля чистоты абсорбции в панель включают эритроциты, которыми проводили абсорбцию, а также эритроциты животного, от которого взята сыворотка.
На основании конфронтации делается анализ состава сыворотки. В случае, если анализирующая абсорбция всеми, без исключения, реагирующими эритроцитами приводит к полному удалению антител, то можно сделать заключение, что данная сыворотка моноспецифична. Если же конфронтация после первых абсорбций указывает на сложность поливалентных сывороток, то продолжают абсорбции по вышеизложенной схеме до расщепления сыворотки на моноспецифические реагенты.
Принцип абсорбции заключается в том, что одноименные антигены и антитела взаимодействуют друг с другом и тем самым «истощают» сыворотку от соответствующих антител. В эритроцитах не должно быть антигенов, против которых изготовляется антисыворотка.
Кроме того, необходимо подобрать такой спектр эритроцитов, с помощью которых можно было бы добиться максимального удаления нежелательных антител, так как многократные абсорбции усложняют работу и ухудшают качество изготовляемой сыворотки. Нами установлено, что для получения хорошего качества моноспецифической сыворотки достаточно крови от 3-4 животных и трех последовательных абсорбций.
Техника абсорбции для получения моноспецифических сывороток в больших количествах, для пополнения банка реагентов, почти не отличается от техники абсорбции для анализа сыворотки. Подготовленные эритроциты разделяют
на 3 или 4 равные по объему части (в зависимости от количества абсорбций). Одну часть смешивают с равным или лучше несколько меньшим количеством сыворотки и оставляют на 45 минут при комнатной температуре, через каждые 10 мин осторожно перемешивая смесь, затем центрифугируют ее до полного отделения от эритроцитов. Смешивают с сывороткой вторую порцию подготовленных эритроцитов и проводят второй этап абсорбции, затем заключительный, который отличается только тем, что после инкубации сыворотку переносят на 30 мин в холодильник для абсорбции при +4°C.
Если «сырую» сыворотку абсорбируют смесью эритроцитов двух животных (для одновременного удаления нескольких антител), то необходимо брать эритроциты от каждого животного в отношении к объему сыворотки не менее 1:1. Полученный реагент тщательно проверяют на чистоту путем контрольной конфронтации с большой панелью — 80-100 животных, с хорошо известным антигенным составом эритроцитов. Полученные результаты должны подтвердить специфичность антисыворотки в отношении к определенному кровяному фактору. Только таким образом проверенную антисыворотку готовят в большом объеме, включают в набор антисывороток и используют для определения групп крови.
Рабочий титр реагентов должен быть не ниже 1:4, каждый реагент проверяется на специфичность по параллельным реакциям с ранее испытанными эталонными образцами, прошедшими международные, региональные сверки. Периодически (1 раз в 2 года) иммуноспецифичность всего набора реагентов должна подтверждаться сверками различного уровня.
На флаконы с изготовленными сыворотками наклеиваются этикетки, с указанием места изготовления реагента, его
наименование (анти-Вв, анти-Ра и т.д.), титр, номер серии, время изготовления, условия хранения.
Решением международной конференции в Жуи-анЖозасе (Франция, 1973) установлены требования к сывороткам. Реагенты для овец должны быть:
а) изоиммунными (за исключением реагентов В системы);
6) специфичными (реагировать только с определенным антигеном);
в) авидными (способностью быстрее или медленнее соединяться с антигеном);
г) реагировать при температурном оптимуме своего действия;
д) высокотитражными (титр, который представляет собой наибольшее разведение сыворотки, содержащей антитела, при котором проявляется их действие);
Сыворотка — реагент должна храниться в не разведенном виде, в холодильнике при — 18-20°C, в количестве необходимом для тестирования не менее 3000 образцов крови.
2. Наследственно обусловленные полиморфные системы белков и ферментов крови овец
Открытие новых высокоэффективных методов электрофоретического разделения белков и ферментов способствовало бурному росту молекулярной генетики.
Если до недавнего времени основные закономерности изменчивости и наследуемости изучались практически только на основе морфологических признаков, с помощью которых и были открыты законы Менделя и закон гомологических рядов Н.И. Вавилова, то в настоящее время стало оче-
