В случае, если все линии на тестовой полоске присутствуют и чётко просматриваются, и при этом окраска контрольной линии темнее линии с антибиотиками, то результат визуального анализа считается действительным и указывает на присутствие антибиотиков в испытуемой пробе (рис. 16).

Пределы обнаружения антибиотиков в молоке: левомицетин (хлорамфеникол) - 0,00015 млн^-1 (мг/кг); тетрациклиновая группа - 0,01 млн^-1 (мг/кг); стрептомицин - 0,1 млн^-1 (мг/кг); пенициллины - 0,002 млн^-1 (мг/кг); сульфаниламиды - 0,1 млн^-1 (мг/кг).

Инструментальный экспресс-метод определения наличия антибиотиков позволяет тестировать с достоверностью не менее 95%, т.е. вероятность того, что молоко свободное от антибиотиков даст положительный результат, составляет 5% [29].

4.6. Иммунологические методы исследования молока (секрета)

Иммунологические факторы молока определяют локальную резистентность молочной железы, её сопротивляемость к развитию воспалительных процессов, коррелируют с факторами защиты всего организма и имеют особенности в зависимости от функционального состояния органа.

Определение лизоцимов молока по В.И. Мутовину В основу выявления лизоцимов положен метод диффузии в агар и образование зоны задержки роста тест-культуры микроба.

На агаровую пластинку в чашке Петри наносят по 0,2 мл суточной бульонной тест-культуры и равномерно распределяют по всей поверхности. Выдерживают 20-30 мин при комнатной температуре для пропитывания агара, а затем с помощью пробойника диаметром 0,8-1 см делают 4 луночки, в которые вносят по 0,01 мл (2 капли) исследуемого молока. Чашки выдерживают при комнатной температуре (18-20°С) 30-40 мин, а затем - в термостате при температуре 36-38°С 16-18 ч, после чего измеряют зоны задержки роста.

� Лизоцим молока - ЛМ

В качестве тест-культуры используют золотистый стафилококк штамма ВМ 57, выделенный из молока здоровой коровы. Максимальный уровень ЛМ (25 мм и более) у здоровых коров на 2-6 месяцах лактации, у больных - понижен (менее 18 мм) или отсутствует (0 мм). Термостабилен, разрушается при температуре 70°С, в сыром молоке при температуре 4-6°С сохраняется до 10 дней.

� Лизоцим вымени - ЛВ

В качестве тест-культуры используют слёзный микрококк Флеминга. Его концентрация не коррелирует с ЛМ. Уровень в молоке повышается в конце лактации и у больных маститом коров. В сыром молоке при температуре 4-6°С сохраняется до 10 дней.

• Лизоцим колостральный - ЛК

В качестве тест-культуры используют белый стрептококк штамма 22. Максимальные концентрации ЛК обнаруживаются в молозиве, через 10 дней после отёла регистрируется ниже уровня ЛМ.

� Лизоцим термостабильный - ЛТ

В качестве тест-культуры используют золотистый стафилококк штамма ВМ-57. Выявляется в молоке стародойных коров после прогревания при температуре 70°С в течение 30 мин и сохраняется до 1,5-2,0 мес., в сыром молоке сохраняется 5-7 дней.

� Лизоцим инверсионный - ЛИ

В качестве тест-культуры используют розовый стафилококк штамма 56. Отсутствует в молоке здоровых коров, обнаруживается в секрете поражённых маститом долей вымени.

� Лизоцим основной - ЛО

В качестве тест-культуры используют ацидофильную палочку штамма 17т. Определяют методом серийных разведений. В разведения молока (молозива) вносят 10% суточную бульонную тест-культуру, выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение суток, затем учитывают рост. В молозиве ЛО проявляет бактерицидное действие в разведении 1:10000, на 10-й день после отёла в молоке его антибактериальная активность проявляется в разведении 1:2-1:4, а у больных маститом коров несколько повышается.

Определение истинного лизоцима (мурамидазы) Метод К. Шахани

Подготовка к анализу

1) Приготовление молочной сыворотки. 5 мл молока разводят равным объёмом 0,5% раствора натрия хлорида и центрифугируют 10 мин при 2000 об/мин. Снимают слой жира, молоко подогревают до 37°С и доводят рН до 4,6 1н раствором соляной кислоты. Выпавший в осадок казеин отделяют центрифугированием в течение 10 мин при 2000 об/мин, а сыворотку фильтруют через бумажный фильтр.

2) Построение калибровочных кривых. Для построения калибровочных кривых используют кипячёное молоко, в котором таким способом подавляется лизоцимная активность, а