Современные методы диагностики и меры борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота

положительно реагировали на туберкулин. Такие же микобактерии были выделены от собак, кошек и птиц.

Источники сапрофитных микобактерий почти не выяснены. Большинство исследователей считают, что микобактерии попадают в организм из внешней среды. M.А. Сафин (1976) изучил 26 культур выделенных от животных; из них 17 были не фотохромогенные и 9 фотохромогенные, быстрорастущие. По культуральным, биохимическим и тинкториальным свойствам все они были отнесены к 3 и 4 группам по классификации Раниона. Выделенные культуры оказались устойчивыми к пенициллину, биомицину, левомицетину, тетрациклину, эритромицину и препаратам ГИНК и ПАСК. B то же время они были чувствительны к мономицину, стрептомицину. Определение каталазной активности показало у 14 культур высокую, у 8 среднюю, у 4 слабую активность этого фермента. При внутрикожном и подкожном введении патогенность культур для кроликов и морских свинок была резко ослабленной, чувствительность к туберкулину сохранялась. У кур при заражении внутривенно этими штаммами появлялась положительная реакция на туберкулин, а на вскрытии специфические для туберкулеза изменения не наблюдались.

B целях проверки иммунизирующих свойств одного из выделенных штаммов мы провели опыты на 25 морских свинках, из которых 15 иммунизировали путем двукратного введения им внутрикожно по 0,5 мг атипичных микобактерий. 10 морских свинок служили контролем. Через месяц после иммунизации у всех подопытных животных отмечали хорошо выраженную аллергическую реакцию на туберкулин. Через 2месяца 5 свинок были убиты и подвергнуты тщательным патоморфологическим исследованиям. При этом не было отмечено свойственных для туберкулеза изменений, за исключением гиперплазии лимфоидной ткани в регионарных лимфоузлах. В дальнейшем все подопытные и контрольные морские свинки были заражены вирулентным штаммом микобактерий бычьего вида (подкожно по 1 мг в 0,5 мл физраствора), При одинаковых условиях кормления и содержания все 10 контрольных морских свинок пали в течение 3 мес. после заражения, с признаками генерализованной формы туберкулеза. Подопытные животные остались живыми. У них отмечалось увеличение регионарных лимфоузлов и были единичные туберкулезные узелки (величиной с конопляное зерно) в печени. Вероятно, у животных, пораженных атипичными микобактериями, инфекция протекает в такой форме, при которой взаимодействие между микро- и макроорганизмом не вызывает болезни, но сопровождается субиммунизацией организма. O подобных наблюдениях сообщают и другие авторы. Например, по данным E.А. Суворова (1980), в зонах, где распространены не патогенные кислотоустойчивые микобактерии, заболеваемость туберкулезом значительно ниже.

Количество исследований и выделение атипичных и сапрофитных микобактерий от различных видов животных и птиц из года в год

увеличивается. Большое внимание к ним уделяется в связи с аллергизирующей их способностью, так как по результатам туберкулиновой пробы решается вопрос: подлежит животное убою, или нет. Все это обусловило поиски различных методов дифференциации кислотоустойчивых микобактерий от возбудителей туберкулеза.

Кислотоустойчивые сапрофиты сравнительно нетрудно отличить от микобактерий туберкулеза, так как, кроме отсутствия патогенности для морских свинок и белых мышей, они на питательных средах растут при комнатной температуре в течение 4 - 5 дней.

Атипичные микобактерии, с одной стороны, имеют черты сходные с микобактериями туберкулеза - морфологию, кислото- и спиртоустойчивость, а с другой - по ряду свойств близки сапрофитам: вид колоний, скорость роста, ферментативная активность и лекарственная устойчивость. Все это обусловило поиски многочисленных методов для дифференциации микобактерий.

Для дифференциации атипичных и сапрофитных микобактерий от микобактерий туберкулеза ВОЗ дает рекомендации, разработанные на симпозиуме в г. Праге в июне 1964 г., по использовании двух групп тестов: основных и дополнительных. К основным относятся тесты: спиртоустойчивость, окраска по Граму, рост при температуре 22 - 37⁰ C (таблица 1), скорость роста, морфология колоний, их пигментированность. Сюда же включены биохимические тесты: ниациновый, амидазные, восстановление нитритов и нитратов, некоторые ферментативные реакции (с липазой, фосфатазой), а также биологические тесты на подопытных животных (морские свинки, кролики, белые мыши, птицы).

Таблица 1. Культуральные свойства атипичных и туберкулезных микобактерий.

К дополнительным тестам относятся: действие на глициды, чувствительность к туберкулостатикам; каталазная и пероксидазная активность (табл. 2).

Патогенность атипичных и кислотоустойчивых микобактерий изучают на морских свинках, кроликах и белых мышах. Как правило, атипичные

микобактерии не приводят к гибели животных, за исключением M. intracellularae. Оптимальная доза для подкожного заражения обычно 1 мг.

Атипичные микобактерии первой и второй групп вызывают на месте введения незначительные изменения, которые обнаруживаются в легких и пёчени и через 2 - 3 месяца полностью рассасываются.

Доза для внутрикожного заражения 0,1 мг в 0,2 мл дистиллированной воды. Место введения - кожа брюшной стенки. Вирулентные культуры вызывают на коже незаживающие язвы, при введении атипичной культуры язвы заживают через месяц, caпрофиты каких-либо изменений не вызывают. Для внутри тестикулярного заражения морских свинок используют 1 мг микобактерий в виде взвеси в 0,25 мл дистиллированной воды. При введении туберкулезной культуры на 15-й день тестикул уплотняется и увеличивается в размере, к 30 - 45-му дню в нем образуются казеозные очаги, через 2 мес. морские свинки погибают от генерализованной формы туберкулеза. Атипичные микобактерии первой и второй групп по классификации Раниона к 30 - 45-му дню вызывают появление очажков в тестикуле, которые через 3 месяца полностью исчезают. При введении микобактерий, относящихся ко второй группе, отмечается лишь уменьшение тестикула, а при использовании микобактерий четвертой группы изменений не бывает.

Таблица 2. Наиболее простые тесты, используемые при идентификации микобактерий.

Каждым приведенным методом исследования в отдельности не всегда удается определить принадлежность культуры к типичным или атипичным микобактериям. Только комплексное применение ряда бактериологических, биохимических и биологических исследований позволяет правильно идентифицировать культуры микобактерий.

Л-формы микобактерий.

Микобактерии туберкулеза обладают способностью персистировать в организме в Л-формы (З.С. Земская, И.А. Дорожкова, 1978; Ю.Л. Шевченко, 2000). В период снижения резистентности организма, или под действием каких либо других факторов, например применение антибактериальных средств, Л-формы микобактерий туберкулеза дают реверсию, то есть переходят в классическую форму.

Р.А. Хамзиным (2006) было проведено 5 последовательных пассажей 28 Л-форм микобактерий туберкулеза выделенных из патологического