БИ =
Е где i" — уровень люминесценции опытной пробы на п-минуте; i — уровень люминесценции опытной пробы на 0-минуте; om — уровень люминесценции контрольной пробы на п-минуте; 1°" — уровень люминесценции контрольной пробы на 0-минуте. были использованыВ качестве базового«Искусственныйоборудованиярубец»дляКРГ.-01 проведения[175],исследованийлюминометр намиLMОТТ (immunotech, Чехия), рН-метр-иономер Эксперт-001 (Эоникс-Эксперт. Россия), центрифуга лабораторная CM-6M (Элми, Россия). у Полученные результаты обработаны методами вариационной статистики с использованием пакета компьютерных программ «Statisticay V9 («StatSoft Inc.», США). При оценке соответствия параметров биотоксичности. полученных с использованием различных сенсорных микроорганизмов, 1 использован модуль «Корреляционный анализ».
=171Изучениенормальногокомпонентного состава рубцовой жидкости и установление его влияния на уровень свечения биосенсора
Рассматривая вопрос об уровне токсичности рубцовой a входящих в ее состав отдельных компонентов, в первую оче им fs и оценена степень их интегральной токсичности = Ню г ыла и Е сенсорногополученная штаммаиз рубцаE.coliкрупного«Эколюм-9». АТ: aie eaeбцовая жидкость, О aaa a,ee ны о. характеризующееся резким тушением свечения уже в первые минуты = x (рисунок 24). Эффект объясняется наличием высокой конце aнтрации ионовакта овызывающих опротонирование молекуло naИwekohensАКGackи —— a. транспорт веществ и активность дыхательных ферментов. В can: нарушает была создаца Моделеная рУбщовая жидкость we> щаяд собойA Hemкомплекс нами aaных источников азота и углерода.
та
7
1,4 ig
12 : i
|
д be
— al ee |
Е
0,6 ‘ Е яA | 4
В р Г. р ]
nee 9 hee ne = - wey a
02]р № р я г р р i ie
— В й ‘ i : [a a Ls S|
МЕ: Е а = ще. Е
8 8 23 ЗЕ g 8 Е 8 В Е 3 Е
БЕ ge Е g ee ЗЕ ae . <
Я &
Рисунок 24 — Оценка интегральной биотоксичности рубцовой жидкости и ее
отдельных компонентов с использованием сенсорного штамма E.coli
Действие полученной смеси носило аналогичный характер при
сопоставлении с рубцовой жидкостью, однако проявляла меньшую степень
токсичности в отношении бактериальных клеток, что связано, по всей
видимости, с отсутствием в ее составе полного спектра веществ, включая
ферменты и антимикробные пептиды.
Последующие эксперименты были проведены с целью
дифференцировать компоненты рубцовой жидкости, ‚оказывающих наиболее
Oe pa НЕ ee ae
органическиене оказываюткислотывлиянияв физиологическихна интенсивность концентрацияхсвечения бактериальныхв большинствеклеток,своем
однакоруксусная ae senda aepe ome CIES Gua
тушения люминесценции бактерий, что обусловлено протонированием
мембраныстороны, глюкозаи нарушениемоказывалаобменастимулирующийаминокислот,эффектсоответственно.ввиду использованияС другой
данного вещества как типичного субстрата для метаболизма клетки.
Дальнейший анализ действия компонентов рубцовой жидкости был направлен
на изучение механизма их влияния на бактериальные клетки, что возможно
благодаря репортерным штаммам, у которых специфичные к различным стресс-
факторам промоторы клонированы перед /ихСРАВЕ генами, таким образом, об
их активации можно судить по степени увеличения люминесценции.
Использование штамма E.coli fabA::/ux, в котором использованный промотор
отвечает за синтез З-гидроксидеканоил-КоА дегидразы, представляющего
собой ключевой фермент реакций биосинтеза жирных кислот мембраны,
позволило идентифицировать уксусную кислоту как наиболее сильный
135
легергеит в отношении фосфолинидных группировок (рис. 25), а также аммиак, для которых уровни индукции свечения составляли 4,2 и 2,7 относительных единиц.
0
©
87 =г3
Я
=. Е _
С р | = Ey
3 = Е | >
Я В fl Е SS Fe
ЗЕ 5 5 Be 5 Se g Е
ВЕ 48 68 gf 88 88 Я Е
Е
Рисунок 25 — Оценка дифференциальнойOfabA МЪРА биотоксичности GrecA (4 сда рубцовой жидкости и
ее отдельных компонентов с использованием панели репортерных штаммов
С другой стороны, использование штамма E.coli ibpA::lux, в которой специфический промотор отвечает за синтез шаперона теплового штока, связывающего белки и облегчающего их последующий рефолдинг АТФзависимыми шаперонами, не позволило зарегистрировать каких либо значительных эффектов.ФФ И,Конаконец, изучениEy с эффектов поврежденияе ДНК, основанное на активации белков системы репарации RecA/LexA с использованием штамма E.coli. recA::lux выявило значительные эффекты НОиндукциия свечениячеOo ть itaданныхer anбактериальных5 eineм ees aeклеток‘al приаммиаком. pyом aay'РЯСНЕНИЕМ уксусной, —_изменять ipaродасGana aninnДНК asс na аллельным cno6o о ры закислением2х Weорг:aWe циткихeenкислот Що SEE EET Ee ie =Енi,. к ве ие oro) м Ta ea ee (HOHHO a =е! CIEE ABIOETIO, Е стороны, для штамма E.coli cda::lux подобных эффектов
