где X — количество каротина корма, мке/г или мг/ке корма; K — количествовочиой кривой;каротинаУ —в объем1 мл раствора,испытуемогонайдениоераствора,по калибро-мл; С -- навеска корма, г; 1000 — коэффициент пересчета на | кг При пользовании стандартным раствором двухромовокислого ка лия содержаниеuuкорма. каротинар вычисляютипо формулери где а-- эквивалентноеграфику, мл; 0,00416количество— коэффициентисходного раствора,перевода найденное1 мл исход-по ного раствора К›Сг2О? в эквивалентное количество мг каротина (для азобензола этот коэффициент равен 0,00235); ладаетСредиВ-каротнн.С —корма.каротниондовнавескаБиологическаякорма,наибольшейг; 1000активность— биологическойкоэффициентдругихпересчетаактивностьюосновныхна 1изо-об-кг меровтину составляеткаротина 52—57%— %, у и (В.криптоксантинаМ. Березовский,— по1959). отношению к В-кароВ растительном материале на долю В-каротина приходится в траве около 75%, в красной моркови— 85%, в желтой кукурузе— 50% от суммарного содержания каротина (А. Р. Вальдман, 1977). Определение витамина A в биологических объектах деленииСущностьнеомыляемойметодафракцииопределениясодержащейвитаминаего, иА определениисостоит в вы-в иней витамина колориметрическим или спектрофотометрическим измерением.
Колориметрическое определение витамина А основано на его способностиметоды определениядавать синеевитаминаокрашиваниеА лес треххло] истойTOCTсурьмой.7047-38.На Спектрофотометрический метод основан на измерении степени поглощения света раствором при длине волны 325 нм. Следует учесть, что в анализируемых объектах одновременно с витамином А содержатся каротиноиды, которые, как и витамин А, дают с треххлористой сурьмой аналогичную окраску. В результате этого содержание витамина А оказывается завышенным. Считают, что для точного определения содержания витамина А необходимо отделение его от каротиноидов (В. А. Девятнин, 1954; А. А. Дмитровский, В. С. Крюков, Т. М. Околелова, 1978). у Прямое спектрофотометрическое определение витамина А в иеомылясмой фракции возможно лишь в тщательно очищенных от различных соединений растворах. Поэтому при количественном определении витамина А его следует отделять от этих соединений методом тонкослойной хроматографии или с использованием хроматографической колонки. Такая хроматография обеспечивает одновременное разделение ксантофиллов, витаминов А, Е и В-каротина. П ри бо ры. Спектрофотометры СФ-4 СФ-4а, СФ-16 и др.; фотоэлектроколориметр ФЭК-М или др.; кварцевая лампа ПРК-4; весы аналитические; водяная баня с терморегулятором; роторный испаритель; водоструйный насос; центрифуга; баллон стальной (с инертным газом и приспособлением для пускания газа); штативы. Посуда. Колбы круглые плоскодонные для омыления; колбы со шлифом на 200 мл; колбы конические со шлифом на 150—200 мл;
199
воронкиколбы(4— 40мерныеem,делительныеkh—на 10—12100 мл;цилиндрическиесм);пипеткицилиндрына 1, мерныена2, Би500 10намл;мл;25,кристаллизаторворонки100 и 250хими-мл; ческие(размер 2230(для фильтрования);см); пробирки колбыхимические.Бунзена; пластины стеклянные Реактивы. 60%-ный водный раствор КОН; 40%-ный водный раствор КОН; спирт этиловый (ректификат) н абсолютный; эфир дизтиловый,(х.ч. свободный от примесей; натрий сернокислый безводный ный спиртовойили a),растворпирогаллолфенолфталеина;(ч.д. а); окисьпетролейныйалюминияэфир;для хрома-0,05%тографии;ангидрид хлороформ (х.ч, ч.д.а); сурьма треххлористая; уксусный Ход определения.(4, д, а); бихромат. Количествеиноекалня. определение витамина А в исследуемых образиах можно разделить на 4 операции: омыление образца;вание; колориметрированиеэкстрагирование ‘неомыляемойили спектрофотометрирование.фракции; хроматографироОмыление и экстрагирование анализируемых образнов (молока, описаниепрепаратовпроцессавитаминаанализаА и др.)обраацаимеетприводитсяряд особенностей,на примереДетальноеисследования содержания витамина А в молоке, Анализ рекомендуется проводить быстро, без перерывов между отдельными операциями, при слабом рассеянном свете. Омыление необходимо проводить в атмосфере азота или углекислого газа. следуетЭкстрагированиепроводитьомыленногов вытяжном образцашкафу. и дальнейшие исследования нужноПри колориметрическом определенни витамина А в образцах чистогопредварительноацетата витаминастроитьА. калибровочный график из растворов Подготовка к анализу. Пост роение калибровочной кривой при анализе витамина А (по А. А. Дмитровскому). Растворы для построения калибровочной кривой готовят из чистого ретинилацетата или из масляных концентрированных препаратов с точно определенной активностью. Берут навеску ацетата витамина А, содержащую в расчете на чистоемом вещество 3,44 мг ретинилацетата, растворяют ee хлорофорв мерной колбе на 100 мл. Приготовленный основной раствор содержит в | мл 100 ИЕ витамина А. Затем готовят серию рабочих кр а ми;створов.в первуюДля этогоотмеряютберут | 8 мл,колбвоиливторуюпробирок— 2, третьюс притертыми— 3, четвер-пробтуюосновного —4, пятуюраствора.— 5, шестуюЗатем в— каждую7, седьмуюколбу— 9 ив(пробирку)восьмуюдоливают — 10 мл похлороформвосьмую доколбу10 мл.содержитВ результате10, 20, |30,мл40,рабочего50, 70, 90раствораи 100 HEс первойвитаMunaДляA, построения калибровочной кривой при определении витамина А с треххлористой сурьмой в кювету фотоколориметра наливаютцию. 0,4Затеммл рабочегоизмеряютраствораинтенсивностьиз первойокраскиколбы раствораи измеряютиз экстинк-второй, третьей колбы и т. д. При измерении экстинкции раствора из первой колбы в кювете STHсодержится20, шестойвеличины—4,28,используютиз седьмойвторой ——при 368, третьейпостроенииин из восьмой— 12. калибровочногочетвертой—40 ИЕ— витамина16, графика,пятой—А. откладывая их на оси абсцисс, а измеренные величины экстинкцин— на оси ординат, 200
Определение витамина А и каротина в молоке и молозиве
Содержание витамина А в молоке в молозиве колеблетсяty в или 7 роких границах и зависит в первую очередь от потреблетия каротина с кормами. | л зимнего молока содержит 0,20—0,30 ит а . летнего — 0,40—0,80 мг. А-витаминная ценность НН ВК зависит от обеспеченности коров каротинным питанием в CRG TOR ный период и колеблется по дням молозивного пернода. Содержание пнтамина А в | л зимнего молозива первого удоя колеблется от 1,50 до 3,0 мг, легнего— от 2,50 до 7,00 мг. Содержание витамина А в молозниве на четвертый день после отела составляет в среднем 12--29% его копиентрации 8 первый день. Это следуст учитывать ири отборе проб молозива для анализа. Среднюю пробу молока берут во флаконы из темного Cassie He: у посредственно после доения по общепринятому способу ЕЕ eres или от одной в количестве 50 (летнее) или 100 мл (зимиего) (мо 4031180— 30 мл). | » Woe В пробу молока сразу после взятия приливают 60%-ный водный раствор едкого калия из расчета: на 50 мл молока— 20 мл раствора КОН, 100 мл молока —50 мл, 30 мл молозива— 20 ВД Законсер вированные щелочью пробы молока можно хранить в холодильнике в течение 3—5 дней. Омыление проб молока. Пробу5 молока с раствором щелочи переносят из флакона в плоскодонную колбу на 500 мл, флакои дважды ополаскивают небольшими порциями дистиллированной водырогаллола(по 10(вместомл) и добавляютпирогаллола10можномл этиловогоиспользоватьспирта аскорбиновуюи о мг пикислоту в том же количестве). Колбу с воздушным холодильником с веществом ставят в водяную баню и омыляют в течение 2—2,5 ч при 90—95° С. Дия Омен ного раствора характерны однородность жидкости темно-бурого ц та и запах мыла. После охлаждения в колбу с омыленным раствором добавляют 20 мл дистиллированной воды и 10 мл спирта. Экстрагирование и обезвоживание неомылnae.я. мой фракции. Для экстракции используют две eae Teepe BO; ронки. Сначала в колбу с омыленным раствором добавляют С. этилового эфира и осторожно смешивают, затем содержимое Е носят в первую делительную воронку, после чего колбу ополаск от неболышим количеством воды, которую сливают в ту же Boney Я‘y. Раствору дают отстояться в‘течение 3—5 мин, после ЕТО Пронская расслоение на верхний— эфирный в нижинй — щелочной бло pe неполном расслоении или появлении эмульсии в жидкость Aghapsnion дили10—15омыление,мл спирта,добавляютНижний слой30—40сливаютмл этиловогов колбу,эфира,в оонсмешивакпро’ a и выливают во вторую делительную воронку. После разделения слоев нижний сливают в колбу дляр омылени. тih верхний— в первую делительную воронку. Нижний слой затем экс трагируютВсе эфирныедваждыэкстрактыаналогичнымобъединяютобразом. в 1-й делительной. воронке и добавляют 50—70 мл дистиллированной воды, осторожно встряхивают и после отделения воды инжний слой сливают. Промывание экстракта водой повторяют 4—5 раз, пока последняя порция промывных вод не будет нейтральной (проба на фенолфталеин) Эфирный экстракт переливают в сухую колбу на 200 мл, в кото-
. 201
