Ход определения. Доставленную в лабораторию пробу воды тщательно перемешивают, стараясь ие смачивать пробку. Стерильными пипетками набирают пробы для посева в чашки, Для каждой чашки берут отдельную пипетку. При недостатке пипеток можно пользоваться одной пипеткой при условии, что посев начинают с больших разведений. Воду с небольшим загрязнением высевают в количестве от | до 0,1 мл непосредственно в чашки, а со значительным. загрязнением разводят перед посевом стерильной водой. Для этого ‘в пробирку с 9 мл стерильной воды вносят | мл исследуемой воды и тщательно перемешивают. Получают первое разведение 1:10. После этого 1 мл воды первого разведения вносят во вторую пробирку (разведение 1:100). Так поступают до получения необходимого разведения (каждый раз берут новую стерильную пипетку). Из пробы исследуемойзависимостиводыот степенидолжноожидаемогобыть сделанозагрязнения.не менеев двух разведений^ в Отобранное количество воды впосят в чашку, слегка приподняв ее крышку. Одновременно ставят в водяную баню (45°) пробирки с мясо-пептонным агаром для расплавления и выливают в чашку с исследуемой водой. Враацательным движением смешивают воду © агаром и ставят чашки на горизонтальной плоскости для застывания агара Восковым карандашом делают на крышке чашки нужные надписи (номер пробы, количество зассянной воды, разведение, дата посева). Чашки помещают в термостат крышкой вниз, стопками {по 3—4) при 37° на 24 ч. Пробы воды из открытых водоемов засевают в две чашки, которые помещают во второй термостат при 20° на 48 ч. Подсчитывают колонии с помощью лупы по всей площади чашки. Если на площади чашки выросло свыше 300 колоний и нет посевов других разведений, можно вести подсчет при помощи счетной пластинки. (снявДлякрышта к огоу илиподсчетавверх дном).чашкуСосчитываютс колониямиколонииставят в под12 квадра-стекло тах; в четырех центральных и в двух, расположенных по -четырем углам счетной пластинки. По найденным числам определяют число колоний ва всю площадь чашки (последнюю измеряют по формуле sir?) и рассчитывают содержание микроорганизмов в 1 мл исседуемои воды. Пример. Диаметр чашки 10 см, откуда площадь ее равна 5?.3,14=78,5тельно на 1 см?см?. приходитсяВ 12 квадратах7 колоний,сосчитаноа на 84всюколонии,площадьследова-чашки 78,5-7=549,5. Засеяно 0,5 мл воды, откуда в 1 мл содержится 549,5.2=1099 колоний микробов. Подечет лучше делать на двух чашках с посевом одной и той же пробы воды и взять среднее арифметическое из’ них. , Для определения числа бактерий в воде может быть использо» ван «прямой метод», основанный на использовании мембранных фильтров с последующим подсчетом микробов под микроскопом. Имеется модификация этого метода с применением фазово-контрастной микроскопии. В воде незагрязненных и хорошо оборудованных артезнанских скважин микробное число не превышает 10—30, в воде шахтных колодцев— 300—400, в воде сравнительно чистых открытых водоемов — 1000—1500 в 1 мл. В водопроводной воде при достаточной очистке100 в 1 мли обеззараживанииводы. микробное число не должно превышать - 263
Результаты количественного определения в воде бактерий : Е. coli выражают в виде коли-титра и коли-индекса. . Колн-титром называют наименьший объем исследуемой воды, в котором обнаружена кишечная палочка. Коли-индекс показывает число кишечных палочек B 1 л воды. Ускоренный метод определения в воде кишечной палочки (по М. Г. Киченко). Метод позволяет сократить срок анализа до 20— 24 чи не только установить титр Е. coli, но и дифференцировать виды выросших организмов. Исследования ведут в два этапа: посев исследуемой воды на среду накопления (пептонно-глюкозную) н выращивание на ней в течение 12 4 npn температуре 42°; пересев со среды накопления (независимо от признаков роста) на агаровую среду с розоловой кислотой и выращивание в течение 12 ч при 37 (можно при 42°), Для пересева пользуются платиновон петлей с большим ушком. . Оборудование и питательные среды. Термостат, отрегулированный для поддержания температуры в пределах 42°, пробирки с газовками, платиновая (нихромовая) петля с крупным ушком; среда накопления для первичного посева; мясо-пептонный arap с розоловой кислотой. . Для подготовки среды накопления в 1000 мл водопроводной воды растворяют при нагревании 10 г нептона и 5 г поваренной coли, доводят до кипения, фильтруют и после этого добавляют5 г (можно 2,5 г) глюкозы. Устанавливают рН среды в пределах а 7.6. Разливают среду в пробирки с поплавками по 10 мл ин стерилизуют в текучепаровом аппарате или в автоклаве при открытом вентиле, 7 Мясо-пептонный агар с розоловой кислотой готовят no следующей прописи: в | л мясо-пептонного агара (агара около 1%) вноcar 50 мл желчи, 10 г лактозы и 1 г глюкозы. Все это смешивают при подогревании. Устанавливают РН среды в пределах 714—756. В приготовленную среду добавляют индикаторы (2 мл 1%-ного спиртового раствора бромтимолового синего и 2 мл 5%-ного свежеприготовленного спиртового раствора розоловой кислоты). Среду разливают в агглютинационные пробирки и стерилизуют при 112 в течение 20 мин. Перед посевами среду скашивают так, чтобы получилась косая поверхность H столбик ее достаточной высоты (полускошенный агар). Среда в готовом внде имеет коричнено-красный цвет, При отсутствии или недостатке бромтимолового синего среда будет иметь бледно-розовую окраску. Можно готовить среду и 6e3 добавления желчи, но она не будет давать четких показаний. Ход определения. Исследуемую воду, взятую из источника водоснабжения в стерильную посуду, возможно быстро доставляют в лабораторию, где ее засевают в колбы и пробирки. Сравнительно чистую воду из водопроводов, благоустроенных и. лодцев, артезианских скважин засевают в пробирки в количестве Тиб мл ив колбы в количестве 10,25 и 100 мл. Воду из открытых водоёмов в зависимости от предполагаемого загрязнения SeCCHRIOE F пробирки в количестве 0,01; 0,1; 0,2; 0,5; 1 мл или 0,001; 0,01; 0, и 1 мл (путем разведения в стерильной воде). Встряхиванием пробирки илн колбы воду хорошо смешивают со средой, стараясь в TO же время заполнить засеянной средой весь объем НЫ бирочки (газовки). Посевы помещают в термостат при 45 на 24 a Через 24 4 делают пересев на агаровую среду с POSONOBOA кие лотой путем уколя в толщу агара и проведения штриха на скошен‘ й
ной поверхности агара при извлечении петли. Посевы делают из всех пробирок со средой накопления исзавиенмо от признаков роста. Пробирки с посевами ставят в термостат na 12 4 (можно на 244). При осмотре пробирок в среде накопления отмечают помутиение и образование газа в маленьких пробирочках (поплавках), B пробирках с агаром— разрыв столбика и образование лены в KOUденсационной жидкости. м Большинство обычных сапрофитных бактерий Ha-arape с розоловой кислотой не pacter, Если на розоловом агаре (в случаях раннего пересева) не установлен рост бактерий, а в среде накоплення через 20—24 ч выявлен рост кишечной палочки (помутнение, газообразование), рекомсидуется делать дополнительный посев на розоловый агар из пробирок с признаками роста. В соответствии с ГОСТ 18963—73 для определения в воде обmero числа бактерий и количества бактерий Е. coli (показатели фекального загрязнения), применяют мембранные ультрафильтры. Применение таких ультрафильтров позволяет вести ускоренные исследования, так как при фильтровании определенного объема воды на поверхности фильтра приблизительно равномерно оседают и распределяются все микробы, находящиеся в данном объеме. Состав фильтров позволяет выращивать осевшие микроорганизмы непосредственно на поверхности фильтров. Колонии, вырастающие на поверхности фильтра, сохраняют присущие нм видовые особенности. При таком анализе результаты получают уже через 24 ч. По количеству выросших колоний судят о загрязненности воды. В водопроводной воде после очистки и обеззараживания количество бактерий Е. coli допускается не более трех, в воде шахтных колодцев без обеззараживания— не более 10 в | a. Исследование воды на яйца гельминтов. При определении степени загрязненности воды открытых водоемов (рек, прудов, озер) яйцами гельминтов пробы воды для исследования необходимо брать выше и ниже места существующего или предполагаемого загрязнения, у берегов и вдали от них. Объем пробы—10—15л.Пробуво- ды в избранном месте надо брать постепенно: по 0,1—1 ‘л через каждые 5 мин как с поверхности водного слоя, так и с глубины 20—50 см, а также на расстоянии 50 см от дна (с помощью батометра). Пробы воды следует брать утром, днем и вечером, а также в разные сезоны. Соблюдение этих правил отбора проб даст возможность сделать точное и объективное заключение о наличии и степени загрязнения воды яйцами и личинками гельминтов. Исследуют пробы воды в хорошо оборудованных лабораториях с помощью специальных методов (метод Гиединой и др.) и приспособлений. Наиболее простым является модифицированный метод Васильковой, с помощью которого можно проводить исследования и в полевых условиях. Приборы, обо рудование и материалы: Воронки Гольдмана; ручной насос Швитца; колба Бунзена; микроскоп с малым увеличением; бумажные (беззольные) фильтры; 23—30%-ный раствор соляной кислоты. Ход определения. Бумажные фильтры помешают на дно воронки, сменяя их после пропускания через прибор 0,5—1 a исследуемой воды. Разрежение воздуха в колбе для ускорения фильтрации создается ручным насосом. 3 Бумажные фильтры с образовавшимся на них осадком просветляют в течение 3—5 мин раствором соляной кислоты и кладут на
265
