faba a(UPD
600000 аЕ ен
500000 елПВАBesОates eeСЕН НЫaegisСА PekАЕ ks = ИgtPit
£00000 42И‚a PERE oeSea МЕay ageBOSS =KASMeeИЕНboasя
ReeseОНР И
2 s00000 Pecoа gene
200000 isis, УЧ: tae be aie = я
|иЕ7 RU granarygyа
рт гоиИвsat
Аетао
ЕН ae г co
14 yz че ао 22h 25) zal aims lar vad
ae a esро
нативной рубцовой жидкости
Рис27 — Динамика отклика рекомбинантного штамма E.coli К12 fabA::luxCDABE в
:
faba (ner
о рии ее
eeа hee _ a иНТSs — /
Ри. ииeeНио.eee ee See eeЯ
п. т ии i
а See err oe
р и т eet
СО о.аeSтьоеаооя.
200000 ОВ о taco
ЕОАPE OIEт а. маааа Raaгиeea 4
и
fecoee, geт ОИores ereстен ey
тЕ7 10 р13за16 19Timeо22 25 ze 3 2 se 377 40
Рис. 28 — Динамика отклика рекомбинантного штамма E.coli К12 fabA::luxCDABEв искусственной рубцовой Идо Однако штамм E.coli katG::lux, в котором клонированный промотор отвечает за синтез каталазы, обеспечивающей нейтрализацию пероксида водорода, продемонстрировал индукцию свечения, достигаемую 3,0 142
относительных единиц на 60 минуте контакта. Данныйя факт aia aesто. пероксиданаличии активныхводорода,формспособныхкислорода,диффундироватьв первую очередьв средестабильныхHa з начиantl расстоянияHесмотря и свободнона то, проникать, что предшественником через мембраны клеток.данной формы метаболболитов кислорода является супероксид анион, при су тствие его в среде зарегистрировано не было, что подтверждает отсутствие ответа штамма ииЕ.с
| м специфическийй п промоторр отвечает за синтез регуляторного soxS:белка их,в системе в котор о кислительногоi стресса. С другойit стороны это не отменяет 2 on возможности наличия в среде супероксид аниона, м Ем незначительной продолжительности жизни, он ры ee расстояния от места своего образования и акцептиру компонентами рубцбцовой жидкости. елков Изучение генотоксических эффектов, основанное на weie я lux. системы репарации RecA/LexA с использованием штамма E.coli rec. ie позволило зарегистрировать эффекты индукции свечения да бактериальных клеток п р и контакте с нативной рубцовой жидкостью. Подобныйпероксида водородрезульт а т напроисходитмолекулу ДНК,вследствиелибо лиформибо и р прямогоованияр. ивоздействияНИ идроксильного радикала, вызывающего нарушения в структуре нукля гк и слот,др причем от данного метаболита 6:бактериальная клетка не имеет защитныхподобных генотоксическихмеханизмов. С эффектовдругой выявленостороны, недлябыло,штаммаи уровеньЕсойие acolD::lex не увеличивался при контакте с рубцовой жидкостью. Таким образом, проведенные исследования продемонстрировали возможность оценки токсичности рубцовой жидкости с использованием a ляется прямымсенсорныхотражениемштаммов бактерий,дезинтегрирующегоу которых уровеньхарактералюминесценциидействия средBe Pas клеточные компоненты. пПри этом показана двустадийная зависимость изменения свечения, заключающаяся в первичном его тушении с последующaa дифференциальнойвосстановлением,vaдажебиотоксичности превышающимвыявилоконтрольные.формирован! С другойие стороныактивных теформр
5 ть Ha различные компоненты
бактериальнойкислорода, способных клетки, включая— воздействова ДНК, что является вариантомто: гено’Ht токсического эффекта. ‘A По результатам исследований разработан aaa биохемилюминесцентнойnate!HT Ha изобретениер РФоценки№2603104),токсичностиоснованныйрубцовойя на биолюминесцжидкостиН fing 24реакциичасовой штаммаинкубации Е. Coliв«Эколюм-9»,условиях «искусственноговведенного в рубцовуюрубца»,6 путемжидкость,измерен> послеie в ме на интенсивности свечения бактерий в пробе в НЕПрЕВЫВНОМ рожи микропланшетном люминометре ГМ-01Т, и учета значений по формуле: 143
= 10.5 x12 ТРЖ = 100 — Loner(Cost Контроль).= om) x 100, где ТРЖ - токсичность(Waserрубцовойконтроль) жидкости
ps м own — уровень люминесценции опытной пробы на 0,5-минуте; Г a >. Сы — уровень люминесценции опытной пробы на 0-минуте; мт» — уровень люминесценции контрольной пробы на 0-минуте; IEлено — уровень люминесценции контрольнойг пробы на 0,5-минуте. и при значении ТРЖот о = 19% низкой, от 20 до 49%0 до средней 4% степеньиот 50 токсичности до 100 % высокой. считается нулевой, от5 до Таким образом, по результатам проекта решены следующие задачи: De cee отедонана интегральная охотоксичноске penn НО аа © Reaeaonceil ВЫ, arene aay, свечения биохемилюминесцентныхштамма микроорганизмов на основе рекомбинантного морскогоE.coliлюминесцирующегоK12 ТС1 с клонированнымимикроорганизма luxCDABEPhotobacteriumгенамиleiognathiприродного54010. Определена дифференциальная биологическая токсичность кормового фактора по повреждающему3 ..воздействиюРУна отдельныеме структуры рекомбинантных штаммов E.coli fabA::lux, E.coli ibpA::lux, E.coli recA::luxструктурыи E.coliре cda::lux. п луч Oy EBC A результаты позволили установить EA ESS ингибирующее воздействие на рекомбинантный штамм E.coli, характеризующеесякак цельнойos рубцовойрезкимжидкости,ртушениемполученнойсвечения ужеиз врубцапервыекрупногоминуты контактарогатого скота, так и некоторых ее отдельных компонентов. Так результаты исследований позволили идентифицировать уксусную кислоту как наиболее с сильный детергент в отношении фосфолипидных группировок и повреждения ДНК, основанное на активации белков системы репарации RecA/LexA. Установлена биологическая| активность двухвалентных солейм металлов, возрастающая в следующем порядке — медь — хром — железо. С post naar оценки токсичности рубцовой жидкости с использованиемeee areсенсорныхВОЗМОЖНОСТЬ штаммов я бактерий, у которых уровень люминесценции является прямым отражением ; дезинтегрирующего характера действия среды Ha клеточные компоненты. При я этом м в показана двустадийная зависимость изменения свечения, заключающаяся первичном его тушении с последующим восстановлением, даже биотоксичностипревышающим контрольные.. С другой стороны оценка дифференциальнойм воздействовать выявило формирование активных форм кислорода, способных ДНК, что4) являетсяна вариантомразличные генотоксическогокомпоненты бактериальнойэффекта. c клетки, включая рубцовой жидкостиРазработанin Vitro». «Способ биохемилюминесцентной оценки токсичности 5) Разработана математическая модель прогнозирования результатов биолюминесцентного тестирования межклеточного взаимодействия микроорганизмов рубца жвачных.
