Основные данные были подвергнуты статистической обработке с использованием программ «Excel», «Statistica 10.0». Достоверными считали различия при р<0,05. Результаты исследований. При контакте нативной рубиовой жидкости с сенсорными люминесцирующими бактериями E.coli было зарегистрировано дозозависимое ингибирование свечения в первые секунды контакта (рис.17). При этом ко второй минуте контакта «тушение» составило до 5,20 + 0,59 % в случае с исходной средой и убывало в ряду двухкратных разведений до 102,56 + 4,83 % при титре 1:1024. После 30 минут инкубации смеси уровень свечения в пробе с нативной рубповой жидкостью достигает контрольного и с течением времени повышается до 190,59 = 22,15 % после 60 минут контакта. Штамм E.coli katG::lux, в котором клонированный промотор отвечает за синтез каталазы, обеспечивающей — нейтрализацию пероксида — водорода, продемонстрировал индукцию свечения, достигаемую 3,0 относительных единиц на 60 минуте контакта. Изучение генотоксических эффектов, основанное на активации белков системы репарации RecA/LexA с использованием штамма E.coli recA::lux, позволило зарегистрировать эффекты индукции свечения данных бактериальных клеток при контакте с нативной рубцовой жидкостью (рис. 18).
м“ ы
р д 3 ы
в
'
i wo &
zoe Е
Е 8 В
2“ з
. 8
Ca р
°2 4
° © 1024 512 Cremens255 разведении18 рубловойokжадкосты о
т Рис. 17 Уровень люминесцентногоотклика сенсорныхштаммов Ё.сой на2 (А) ибо (B) минуте контакта с различными титрами рубцовой жидкости
р
“
р
*
Е“insов
'
os
°
° 6 в 4 2 В
Степень pamenerais рубоювой жидкости
Рис 18 Индукцияосвечения репортерныхeeштаммов eeпри контактеЕс различными титрами рубцовой жидкости На основе ранее проведенных исследований, а также с учетом сегодняшних результатов был предложен способ биолюминесцентной оценки активности (токсичности) модельной рубцовой жидкости in Vitro. Сущностью предлагаемой заявки на изобретение является проведение ингибирующегооценки токсичности влияниямодельной составныхрубцовой частей модельнойжидкости рубцовойin vitro по жидкости выраженности (РЖ) на интенсивность свечения Escherichia coli K12 ТС] с клонированными luxCDABEинтенсивностьюгенамисвеченияPhotobacteriumтех жеleiognathiлюминесцирующих54010 по сравнениюбактерий вс физиологическом растворе, не содержащем токсического компонента, после рубцовойчего жидкости по формуле: на практике рассчитывают значение токсичности компонентов модельной
"> иЕст enon= убцовой7 eee agбл. Joan — Уровень люминесценции опытной пробы на 0,5-минуте; Tum — Уровень люминесценции опытной пробы на 0-минуте; Тинто» — Уровень люминесценции контрольной пробы на 0-минуте; 15.» — Уровень люминеспенции контрольной пробы на 0,5-минуте. 76
Критерием токсического действия является изменение интенсивности биолюминесценции тест-объекта в исследуемой пробе по сравнению с таковой для пробы ¢ раствором, не содержащим токсических вешеств. Уменьшение интенсивности биолюминесценции пропорционально токсическому эффекту. Предлагаемый слособ исключает необходимость применения питательных сред, позволяет быстро и достоверно оценить токсичность компонентов рациона или жидкости. Достигаемый технический результат заключаетсяв упрощении, снижении продолжительности и трудоемкости способа биолюминесцентной оценки токсичности модельной рубцовой жидкости in vitro. Используя выше представленный способ, были проведены исследования по изучению влияния крахмалосодержащих веществ на активность рубцовой жидкости © использованием люминесцирующих биосенсоров. Установлено что после 60-минутного контакта по мере увеличения концентрации субстрата от 0 до 0,78% в рубцовой жидкости наблюдается увеличение показателя биолюминисцентного индекса. Максимальный индекс установлен у ржи при концентрации ‘субстрата 0,78%, который был выше, чем у пшеницы на 23,3%, ячменя — на 19,3% (рис.19).
о
5
Е
о ДА
ois7 ‘7 SO\
$ / \
Ез *5 р2 : \
Е: yy7 \ \
у
74 \
о м
Субстрат, %
Рис. 19OPKОценка переваримостиSPL высококрахмалистыхPAT РЯ субстратовPO ineT vitro.
использованием «искусственного» рубца
В ходе исследований была оценена переваримость сухого вещества концентрированных кормов различных видов (рожь, овес, нут, шшеница,
