Пробирки ставят на 10 мин в кипящую водяную баню (со BpeAa usзакипания ae ern MP BialagaerВыпадае" крр а спо - бурыы й осадокс: закис и меди.] За34А ентокм ORY. 5 5 Ав nD: 500— И0 / ПХ ть © (neha Bay О сливался). Край пробирки подсушиваютосадкад уфильтровальнойCAAT ‹ бумагой. Ир Сразуx дистпослеSe anesсливапияant ня,teжидкостиоды ВНЕстряхивк осадкуuy Lindдобавляюту yO ЗЕпоадко\2 мл а es ae Racer ear oat? cara, Ме ЕВЕ сматривают,т2—3к moonyСнова: раза. икн.центрифугнруютПосленет лн|каждогонариченилповерхностицентрифугированияи сливаютилированнонаводььчастичекжидкость.закисипробыПромываютмеди,с водойеслиanesводойпро-сни плавают па поверхности, добавляют 6—10 капель этилового спирта,От ТЕ дистиллированиой воды (чтобы закись меди не соприкасалась с воздухом) . : К осадку приливают 3р мл раствора сериокислого окисного железа. Для быстрого растворения закиси меди раствор железа добавЗоо ANTONY ГПБ», ЕЙ МЕССИ УЕ, £0) peBi Ceаст а. Растворoe в пробиркер рке ставовится зелено-© й и Не вынимая палочки, раствор титруют из микробюретки 0,1— 0,2%-ным раствором марганцовокислого калия (его готовят перед aa анны И ane a ‘ И С контрольную пробу. Для этого вместо исайлытуемого> гидролизатаeeeни are wsберут оеу4 мл аодистиллированнойi Е25 воды. Ход a ) р = Содержание сахароваха BASELассчитываютHTETассчитываютHTETHTET по формуформулеформуле (а— 6).С.У.100 "= КВУу11 где х — процент сахара в исследуемом корме; а — количество раствора КМпО., пошедшее на титрование испытуемой пробы, мл; 6 — количество раствора KMnOy, пошедшее на титрование контрольной пробы, мл; С — количество меди, соответствующее 1 мл KMnO,, мг (1 мл точного 0,1%-ного раствора КМпО. соответствует 2 мг меди); К — коэффициент перевода меди в сахар: | мг глюкозы. соответствует 1,77 мг меди, 1 мг сахарозы (инвертированный сахар) — 1,90 мг меди; В — навеска корма, мг; У — общий объем водной вытяжки сахара из навески корма, мл; У, — объем экстракта, взятый трифужную пробирку для определения сахара, мл; 100 — коэффи-в ценциент перевода в проценты. Определение растворимых и легкогидролизуемых углеводов в кормах
BASELассчитываютHTETассчитываютHTETHTET по формуформулеформуле . (а— 6).С.У.100 3 "= КВУу11 в исследуемом корме; а — количество рас1 на титрование испытуемой пробы, мл; 6 — KMnOy, пошедшее на титрование контрольной меди, соответствующее 1 мл KMnO,, мг раствора КМпО. соответствует 2 мг меди); перевода меди в сахар: | мг глюкозы. соответствусахарозы (инвертированный сахар) — 1,90 мг .
Принцип метода. Углеводы под лействием концентрированлой серной кислоты дегидратнруются (пентозы до фурфурола, гексозы— до метилфурфурола). Эти вещества ксиденсируются с антроном, образуя соединение, окрашенное № голубовато-зеленый ивет. Оптическая плотность окрашенного раствора находится в линейной завн-
симостиНЫЕ приот625содержанияee хуглеводов.ду: Максимальное` светопоглощеОборулование,a у реактивы: сисктрофотометры «Сиекол» или ФЭК-М; } микроразмельчите.кроразмельчитель тканейаней РТ-2;ы водянаядя баня;AA; нагрева-м2 |. тельный прибор; штативы с гнездами для пробирок; пробирки стек7 г —9е “ord 20 ¢ : TEpTLI бками; АИ (ина ERE Ч Е: PANT, аж aay, ©мермостойкиепритертыми а ОСТпробками;3 $ 10304391—72);стеклянныеWay ticeмерныеворонки;xontehy мерныеЕ ОЙцилиндрыи 100 млна 10, 100, 250, 500 и 1000 мл; пинетки на 1, 2, 5, 10, 25, 50 4,100 мл; фильтроиольнаяrp; if Aga у lAбумага fevр aбыстрой3 = фнильграцинareas3 opeсть — неФОБ Poul(ГОСТOL):; 12026—антрочae Be a a мн ч ла 7150. мы K [Fe(CN)l - 3HLOx. 4: ln ai от ый о tire: x4: a eta ras эфир; ‘то луол,bi: a рбензол и х, Ч; < воронкаГ. ту ЯВ гра; OKCey ain mpone у Приготовление реактивов. Перекристаллизация антРони: преднорительно 1 г антрона рас ПИР 8 9тмш ‘горячего бенлола, к получениому раствору приливают 3 мл холодвого петроочайногоa = ть,эфира тВыша ет» светло-желтые ткристал еотфильтровы- р ори ,ом"of нау воронкет 4 кнер:у ACY2 ают вэ р д = ы у i ch р бы реактии: в термостойкой посуде смешиваjoy (O00 млtenaлистоллированной Gos с 760 мл кониентрированной. Е “ серной Wieser (вливая постепенно ee в воду). После охлаждения в ot 1 gs фиотиор, постоянно перемешивая, вводят | г тиомочевины, а затем | г giponn, Полученный желто-зеленый раствор тщательно перемешивают и переливают в темную склянку. Хранят не более 2— , 1 пелель п холодильнике Оспетлиющие растворы: 300иг ZnSO, растверяют в пистиллироваиной nore и доводят obbem до Гл; 150 7 К [Ре ма АБО растворяют в дистиллированной: воде и, доводят объем ло Гл Основной стандартный раствор глюкозы: 0,3 г мелииииской глюкозы растворяют в мерной колбе на 1000 мл в дистиллированиой HOLE, предварительно прокинаяченной и охлажденной: П раствор на кончике скальпеля добавляют хлорную ртуть и доводит водой до метки. Основной раствор хранят в холодильнике неболее месяца. При отсутствии хлорной ртути добавляют несколько , капель толуола н хранят не более недели. | мл осповного раствора содержит 0,3 мг глюкозы. Шкала стандартных растворов: для ее приготовлсния непользуют основной раствор глюкозы, применяя мерные колбы ра,вместимостьюдоводят дистиллированной100 мл. Отбирают водойв них доколичестваметки и основноготщательнораство-персмешинают. @бъем основногоелюкозы,растворама медицичской Содержаниеглюкозы, . 1 мг/2гу. мл 10. РИО о о обо ом бо о о, ми... а. м. O09 20 5 5 о с РАВ 0 0 8 6 6 5M5 5 6G 0,120 25 „а. о... М.и, 0,150 т 169 |
массойХод 05определения.иHapeckyв SAOвоздушно-сухого rh ееразмолотого кормаия дой.60 млЗатемпредварительностакан помещаютнагретойв микроразмельчительдо 50—60°С. дистиллированнойPT-2 и гомоге-вонизируют корм в течение 2 мин (при отсутствии микроразмельчитсля раствор готовят в мерных колбах на 100 мл с тем же количеством горячей воды, встряхивая в течение 15 мин). После гомогепизации мешалку размельчителя обмывают дистиллированиой водой в тот же стакан, раствор фильтруют через стеклянную воронку с мягким бумажным фильтром в мерную колбу на 100 мл. Осадок на фильтре промывают небольшим количеством воды. После охлаждения раствор доводят до метки и тщательно перемешивают. Получают нсходный исосветленный экстракт углеводов, который при необходимости можно хранить в холодильнике (не более суток). Для осветления вытяжки при анализе грубых, сочных и KOHцентрированных кормов берут 10 мл исходного раствора (для свеклы —1 мл) в колбу емкостью 100 мл. Добавляют по 2 мл 30%-ного раствора ZnSO, и 15%-ного раствора 4 [Ее (СМ) в] - 31,0, доводят водой до метки, тщательно перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата. При анализе кормов, содержащих пебольшое количество углеводов, осветление проводят непосредственно после, гомогенизации в колоах с исходным раствором, не доводя предварительно до метки. Осветленные. растворы хранят в холодильнике (не более суток). В пробирки с притертыми пробками дозатором или пипеткойa с резиновым баллоичиком вливают по 10 мл аитронового реактива. Приливают осторожно по стенке по 2 мл осветленных растворов пробы, закрывают их пробками и для перемешивания энергично встряхивают 10 раз. Для построения калибровочного графика в пробирки с аптроновым реактивом вместо осветленных растворов добавляют по 2 мл стандартных растворов и также энергично встря“ 4 Пробирки открывают, ставят в штатив, который помещают в хивают. . ; сякипящуюдна бани).водянуюПри банюэтом растворна 20 минв пробирках(дно штативапринимаетне должноголубовато-касатьр зеленую окраску. й ° 30 MHItПробиркипроводятохлаждаютизмерениепроточнойоптическойводопроводнойплотности анализируемыхводой и черези х ‚ стандартных растворов на «Спеколе» при длине волны 625 нм или на 1 ФЭК-М при красном светофильтре в кюветах с толщиной просвечиваемого слоя 20 мм. Раствором сравнения служит холостая проба (вместо анализируемого раствора взято 2 мл воды). При работе Ha ФЭК-М холостой раствор готовится в двойном объеме. Наиболее точные результаты : измерения оптической плотности можио получить в пределах 0,15— ae Если исходные растворы без разведения дают очень низкую оптическую плотность, следует увеличить навеску. При очень выd сокойизмерения,оптическойи учестьплотностиэто при следуетрасчете, развестиКаждаярастворы,серия определениявзятые для обязательно должна сопровождаться анализом стандартных растворов. му Содержаниеграфику, построенномууглеводов впопроберезультатамопределяютизмеренияпо градуировочно-оптической 176 ,
