- Шкала разиедений
— SO nn ОТ УЗО О || conigirD: м В Ооapoma, | (Poko: | ция карти |Оба колориИ МЕН колбу, мл | ся AG метки | па, мкг/мл метре . бензином, мл ———=—= ra 0.6 10 0,6 f: 0,065 0'8 10 0,8 0,084 10 10 1,0 0, 104 то 10 1,2 0,123 14 10 1,4 0,140 1'6 10 1,6 0, 162 ГВ 10 1,8 0,180 о'0“ 10 2,0 0,199 UHM Приготовленныесветофильтром в растворыкювете с измеряютрабочим расстояниемна отокопорииетро1 см.7 По полу-nes й ченнымколичестваданнымВ-каротинастроят вграфик| мл раствора;зависимостиприпоказанийэтом на осиоеабсц; дот pe ант рацию каротина (мкг/мл), на оси ординат — показания прибора. Зная ЭКсТиикциюЮ манией р по vax либровочной кривой паходят количество каротина (вр OG. в | мл раствора) и рассчитывают содержание в анализируемом образце. В производственных условиях для приготовления лана тной iseDa COMES VOT Ape CTBODE ABYXDOMOKYCHOnORR asa 15 oP Bereta золаСтандартныйрастворяют в | л растворэтилового спирта;азо бе изола.1 мл этого растворамг аз пE окраске соответствует 0,00235 мг te м" => вокйсло 9 2 Стандартный раствор д о ЧЕ в 1 л дистиллия. 720 мг бихромата калия (К>Ст›От) растворяют к 0,00416лированноймг каротина.воды; | млИзосновногоосновногорастворарастворасоответствуетготовят шкалупо тырабочи xX ВЕ ОТВОВОВ: й колонки Приготовление хроматографической ОКО В трубку Аллина, в узкую часть ее, ОВЕН 0. (on ee {0 %) ской ваты, на который насыпают адсорбент tbe (ee i слоем 4—5 см. Трубку вставляют в пробку колбы Бунзена. 1 Проведение анализа. Пробу сена, сенажа, травяной паки мельчаютперемешивают,ножницамипосле начегоотрезкииз разныхдлинойместпе poneберут 15пробуae anitмассой дne 100 ги размалывают в мельнице. Травяную муку анализируют без ПреВЕраенНЕАЯ мельиСНИЯй Затем из разных мест перемешанной пробы на техни! ey ee a рут навеску 1—3 г н более (в зависимости от предпола В coro р держания каротина), помещают в фарфоровую ступку и тщ ee растирают с небольшим количеством (5—10 г) песка Г = | ченного стекла. Подготовленное вещество к т вина sont ническую колбу на 100—150 мл и заливают. ие: я об петролейного эфира. Ступку обмывают и ape SEATON Pes порциямипробкой и растворителя,оставляют на сливаянесколькоего часовв ту же(в TOтемном AEм cone) . чтобы все каротиноиды перешли в раствор. 197
Г. т iT]
®г} Ликопин ИЕ|
il
оротин
| x К i|]И
1 P- Коротин .
ey
Й оХаратин | il inhd |
| | fo
Fh \ K
se с А Be
=} с |+ \ ffY/ CANA7 Way\WYм ‘=esр7’ ; ПИ= =
МАЖИ Novy Я iШJ alii \АА ит| ieя WR.р
В Lier Е | Vis
п"Мн ии Wh В О” *
Shada Ам хеfe4 1 2 3 4
тРис. 3. it gue.С 4 ть АЯ ARERHALHPOBARHAS; ‹
тов в колонке. 1 — колба Byusena; 2 — фильтр Шотта; 8 — sopon-
ка Бюхнёра; 4— тигель Гуча,
Яок т eens вые моно хорошо измель5 г. Вещество переносят а фарфоров Я ост врут навеску 3— мельченное стекло. 1216 Е Е р стук, куда добавляют изЯ растительной массы) а Pada слого натрия (для обезвоживалегко окисляется). О а Aiton nc (каротин на воздухе как с сухими KOpMani (sie: 4) роцесс исследования такой же, Посе gactanne aie ов . aay астанвання раствор каротиноидов из колбы сливают в адсорбционную трубку. Перед пропусканием вытяжки через колонку ae a, предварительно пропустить небольшое количество растворит.О ОЕ Don pati вакуумом; Осадок, оставшийпереносят в боян и О чеством растворителя и вают до тех пор; пока ва а т и. ор анЕ МЕ nevcraner бебпветным По Bea Dr : ial низ трубки Аллина О етным. По окончании адсорбции объем прошедшего через колонку раствора каротинондов измеряют цилиндром и колоВАМ трируют с синим светофильтром, Расчет содержания ка ротина в ко рме проводят по калибровочному графику. В том случае, когда калибровочная кривая Reopens на основе синтетического каротнна, расчет выполняют по Формуле
Vie СK-V-1000
где X — количество каротина корма, мке/г или мг/ке корма; K — количествовочиой кривой;каротинаУ —в объем1 мл раствора,испытуемогонайдениоераствора,по калибро-мл; С -- навеска корма, г; 1000 — коэффициент пересчета на | кг При пользовании стандартным раствором двухромовокислого ка лия содержаниеuuкорма. каротинар вычисляютипо формулери где а-- эквивалентноеграфику, мл; 0,00416количество— коэффициентисходного раствора,перевода найденное1 мл исход-по ного раствора К›Сг2О? в эквивалентное количество мг каротина (для азобензола этот коэффициент равен 0,00235); ладаетСредиВ-каротнн.С —корма.каротниондовнавескаБиологическаякорма,наибольшейг; 1000активность— биологическойкоэффициентдругихпересчетаактивностьюосновныхна 1изо-об-кг меровтину составляеткаротина 52—57%— %, у и (В.криптоксантинаМ. Березовский,— по1959). отношению к В-кароВ растительном материале на долю В-каротина приходится в траве около 75%, в красной моркови— 85%, в желтой кукурузе— 50% от суммарного содержания каротина (А. Р. Вальдман, 1977). Определение витамина A в биологических объектах деленииСущностьнеомыляемойметодафракцииопределениясодержащейвитаминаего, иА определениисостоит в вы-в иней витамина колориметрическим или спектрофотометрическим измерением.
Колориметрическое определение витамина А основано на его способностиметоды определениядавать синеевитаминаокрашиваниеА лес треххло] истойTOCTсурьмой.7047-38.На Спектрофотометрический метод основан на измерении степени поглощения света раствором при длине волны 325 нм. Следует учесть, что в анализируемых объектах одновременно с витамином А содержатся каротиноиды, которые, как и витамин А, дают с треххлористой сурьмой аналогичную окраску. В результате этого содержание витамина А оказывается завышенным. Считают, что для точного определения содержания витамина А необходимо отделение его от каротиноидов (В. А. Девятнин, 1954; А. А. Дмитровский, В. С. Крюков, Т. М. Околелова, 1978). у Прямое спектрофотометрическое определение витамина А в иеомылясмой фракции возможно лишь в тщательно очищенных от различных соединений растворах. Поэтому при количественном определении витамина А его следует отделять от этих соединений методом тонкослойной хроматографии или с использованием хроматографической колонки. Такая хроматография обеспечивает одновременное разделение ксантофиллов, витаминов А, Е и В-каротина. П ри бо ры. Спектрофотометры СФ-4 СФ-4а, СФ-16 и др.; фотоэлектроколориметр ФЭК-М или др.; кварцевая лампа ПРК-4; весы аналитические; водяная баня с терморегулятором; роторный испаритель; водоструйный насос; центрифуга; баллон стальной (с инертным газом и приспособлением для пускания газа); штативы. Посуда. Колбы круглые плоскодонные для омыления; колбы со шлифом на 200 мл; колбы конические со шлифом на 150—200 мл;
199
