воронкиколбы(4— 40мерныеem,делительныеkh—на 10—12100 мл;цилиндрическиесм);пипеткицилиндрына 1, мерныена2, Би500 10намл;мл;25,кристаллизаторворонки100 и 250хими-мл; ческие(размер 2230(для фильтрования);см); пробирки колбыхимические.Бунзена; пластины стеклянные Реактивы. 60%-ный водный раствор КОН; 40%-ный водный раствор КОН; спирт этиловый (ректификат) н абсолютный; эфир дизтиловый,(х.ч. свободный от примесей; натрий сернокислый безводный ный спиртовойили a),растворпирогаллолфенолфталеина;(ч.д. а); окисьпетролейныйалюминияэфир;для хрома-0,05%тографии;ангидрид хлороформ (х.ч, ч.д.а); сурьма треххлористая; уксусный Ход определения.(4, д, а); бихромат. Количествеиноекалня. определение витамина А в исследуемых образиах можно разделить на 4 операции: омыление образца;вание; колориметрированиеэкстрагирование ‘неомыляемойили спектрофотометрирование.фракции; хроматографироОмыление и экстрагирование анализируемых образнов (молока, описаниепрепаратовпроцессавитаминаанализаА и др.)обраацаимеетприводитсяряд особенностей,на примереДетальноеисследования содержания витамина А в молоке, Анализ рекомендуется проводить быстро, без перерывов между отдельными операциями, при слабом рассеянном свете. Омыление необходимо проводить в атмосфере азота или углекислого газа. следуетЭкстрагированиепроводитьомыленногов вытяжном образцашкафу. и дальнейшие исследования нужноПри колориметрическом определенни витамина А в образцах чистогопредварительноацетата витаминастроитьА. калибровочный график из растворов Подготовка к анализу. Пост роение калибровочной кривой при анализе витамина А (по А. А. Дмитровскому). Растворы для построения калибровочной кривой готовят из чистого ретинилацетата или из масляных концентрированных препаратов с точно определенной активностью. Берут навеску ацетата витамина А, содержащую в расчете на чистоемом вещество 3,44 мг ретинилацетата, растворяют ee хлорофорв мерной колбе на 100 мл. Приготовленный основной раствор содержит в | мл 100 ИЕ витамина А. Затем готовят серию рабочих кр а ми;створов.в первуюДля этогоотмеряютберут | 8 мл,колбвоиливторуюпробирок— 2, третьюс притертыми— 3, четвер-пробтуюосновного —4, пятуюраствора.— 5, шестуюЗатем в— каждую7, седьмуюколбу— 9 ив(пробирку)восьмуюдоливают — 10 мл похлороформвосьмую доколбу10 мл.содержитВ результате10, 20, |30,мл40,рабочего50, 70, 90раствораи 100 HEс первойвитаMunaДляA, построения калибровочной кривой при определении витамина А с треххлористой сурьмой в кювету фотоколориметра наливаютцию. 0,4Затеммл рабочегоизмеряютраствораинтенсивностьиз первойокраскиколбы раствораи измеряютиз экстинк-второй, третьей колбы и т. д. При измерении экстинкции раствора из первой колбы в кювете STHсодержится20, шестойвеличины—4,28,используютиз седьмойвторой ——при 368, третьейпостроенииин из восьмой— 12. калибровочногочетвертой—40 ИЕ— витамина16, графика,пятой—А. откладывая их на оси абсцисс, а измеренные величины экстинкцин— на оси ординат, 200
Определение витамина А и каротина в молоке и молозиве
Содержание витамина А в молоке в молозиве колеблетсяty в или 7 роких границах и зависит в первую очередь от потреблетия каротина с кормами. | л зимнего молока содержит 0,20—0,30 ит а . летнего — 0,40—0,80 мг. А-витаминная ценность НН ВК зависит от обеспеченности коров каротинным питанием в CRG TOR ный период и колеблется по дням молозивного пернода. Содержание пнтамина А в | л зимнего молозива первого удоя колеблется от 1,50 до 3,0 мг, легнего— от 2,50 до 7,00 мг. Содержание витамина А в молозниве на четвертый день после отела составляет в среднем 12--29% его копиентрации 8 первый день. Это следуст учитывать ири отборе проб молозива для анализа. Среднюю пробу молока берут во флаконы из темного Cassie He: у посредственно после доения по общепринятому способу ЕЕ eres или от одной в количестве 50 (летнее) или 100 мл (зимиего) (мо 4031180— 30 мл). | » Woe В пробу молока сразу после взятия приливают 60%-ный водный раствор едкого калия из расчета: на 50 мл молока— 20 мл раствора КОН, 100 мл молока —50 мл, 30 мл молозива— 20 ВД Законсер вированные щелочью пробы молока можно хранить в холодильнике в течение 3—5 дней. Омыление проб молока. Пробу5 молока с раствором щелочи переносят из флакона в плоскодонную колбу на 500 мл, флакои дважды ополаскивают небольшими порциями дистиллированной водырогаллола(по 10(вместомл) и добавляютпирогаллола10можномл этиловогоиспользоватьспирта аскорбиновуюи о мг пикислоту в том же количестве). Колбу с воздушным холодильником с веществом ставят в водяную баню и омыляют в течение 2—2,5 ч при 90—95° С. Дия Омен ного раствора характерны однородность жидкости темно-бурого ц та и запах мыла. После охлаждения в колбу с омыленным раствором добавляют 20 мл дистиллированной воды и 10 мл спирта. Экстрагирование и обезвоживание неомылnae.я. мой фракции. Для экстракции используют две eae Teepe BO; ронки. Сначала в колбу с омыленным раствором добавляют С. этилового эфира и осторожно смешивают, затем содержимое Е носят в первую делительную воронку, после чего колбу ополаск от неболышим количеством воды, которую сливают в ту же Boney Я‘y. Раствору дают отстояться в‘течение 3—5 мин, после ЕТО Пронская расслоение на верхний— эфирный в нижинй — щелочной бло pe неполном расслоении или появлении эмульсии в жидкость Aghapsnion дили10—15омыление,мл спирта,добавляютНижний слой30—40сливаютмл этиловогов колбу,эфира,в оонсмешивакпро’ a и выливают во вторую делительную воронку. После разделения слоев нижний сливают в колбу дляр омылени. тih верхний— в первую делительную воронку. Нижний слой затем экс трагируютВсе эфирныедваждыэкстрактыаналогичнымобъединяютобразом. в 1-й делительной. воронке и добавляют 50—70 мл дистиллированной воды, осторожно встряхивают и после отделения воды инжний слой сливают. Промывание экстракта водой повторяют 4—5 раз, пока последняя порция промывных вод не будет нейтральной (проба на фенолфталеин) Эфирный экстракт переливают в сухую колбу на 200 мл, в кото-
. 201
рую предварительно насыпают 15—20 г безводного сернокислого натрия. Делительную воронку ополаскивают. 10—15 мл эфира и тоже сливают в колбу. Эфирный экстракт оставляют в темном шкафу в колбе на 1—2 4, После этого его фильтруют в чистую колбу со шлиhom на 200 мл. Оставшийся на дне сернокислый натрий промывают трижды диэтиловым эфиром по 15 мл, ния Обезвоживаниеего через бумажныйэфирногофильтр,экстрактана которыйпроводятпомещаютпутемсернокислыйфильтрованатрий Последний по окончании фильтрования промывают трижды небольшими порииямн этилового эфира. Объем эфирного экстракта измеряют цилиндром. Учитывая, что в молоке, кроме витамина A, содержится каротин, а хроматография при анализе He применяется, обезвоженный эрирный экстракт делят на двое (в одной части определяют витамин А, в другой — каротин).
Колориметрическоеопределение витамина А в молоке » 2 млСухойхлороформаостаток (принеомыляемойопределениифракциивитаминабыстров молозиверастворяютберутв 2—1— 3гомл) и тщательно перемешивают. Микропипеткой берут 0,4 мл это10 ммраствора,и ставятпереносятее в колориметр.в сухую Затемкювету в соднурабочимкюветурасстояниемдобавляют 4 мл 23%-ного раствора треххлористой сурьмы в хлороформе, в другую — чистый хлороформ. ; Экстинкцию измеряют прн красном светофильтре (620 нм), через 5—10 с после добавления реактива. Каждое измерение проводят в двух-трех повторностях. По данным экстинкции находят концентрацию витамина А по калибровочной кривой и рассчитывают содержание витамина А в анализируемом образце по формуле a= х.И.0,3.1000 0,4.С 3 у где А — концентрация витамина А, мкг/л; x > количество витамина А, найденное по калибровочной кривой, ИЕ; С — масса навески, г; 0,3 — коэффициент для перевода HE в весовые единицы; 0,4 — количество хлороформиого экстракта, взятого для цветной реакции; У — общий объем хлороформного раствора неомыляемой фракции, мл; 1000 — коэффициент для пересчета на 1 кг молока. Колориметрическое определение каротина в молоке Сухой остаток исомылясмой фраки ТВ О IZ) a Tere aed после отгонки эфира определения каротина Kerr fo Gran pa для колориметрического стандартным О СРО a pany | pomona сравнивают со о 207 лориметре при синем светоормуле, приведенной в раз‘делеему OinenaraneКсопутствуют о пределенияличество каротина BREAPETRIEкаротинвычисляют3Лatinx азпо9 форм уле,(молM око, ипсчень),he if гдер у ротиноиды и другие примеси, проводят после 202
