При отсутствии колориметра можно использовать колориметрическую шкалу. Количество каротина высчитывают по формуле:
К.И. 100 r= @ z eae вЕ oxpacxe,OeMs nopeК cae. к oi У— объем эфирного экстракта, мл; ЕВЕ СИ taboporsasten, А > мл; J ленияновной растворкаротина720 мг вК»Сг»Огкормахв 1 aи водысыворотке(1 млмосновногокрови.раство-Ocра соответствует 0,00416| mr каротина) у
- Колориметрическая шкала для определения каротина
| про- №| бирки | | и Основной | раствор, мл | вода, | мл | | Ш и |SMe wa | раствора, т | в | Номер | бирки про- | es | Мы |Основной раствор, мл | | ли и Вода, мл | | | а тие раствора, apd |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 10,0 | 0,0 | 0,004160 | 13 | 4,0 | 6,0 | 0,001664 | |
| 2 | 9,5 | 0,5 | 0,003952 | 14 | 5,5 | 6,5 | 0, 001456 | |
| 3 | 9,0 | 1,0 | 0,003744 | 15 | 3,0 | 7,0 | 0, 001248 | |
| 4 | 8,5 | 1,5 | 0,003536 | 16 | 2,5 | 7,5 | 0,001040 | |
| 5 | 8,0 | 2,0 | 0,003328 | 17 | 2,0 | 8,0 | 0, 000832 | |
| 6 | 7,5 | 2,5 | 0,003120 | 18 | 1,5 | 8,5 | — | 0,000624 |
| 7 | 7,0 | 3,0 | 0,002912 | 19 | 1,0 | 9,0 | 0,000416 | |
| 8 | 6,5 | 3,5 | 0,002704 | 20 | 0,5 | 9,5 | — | 0,000208 |
| 9 | 6,0 | 4,0 | 0,002496 | 21 | 0,4 | 9,5 | 0,000166 | |
| 10 | 5,5 | 4,5 | 0,002288 | 22 | 0,3 | 9,7 | 0,000125 | |
| И | 5,0 | 5,0 | 0,002080 | 23 | 0,2 | 9,8 | 0,000083 | |
| 12 | 4,5 | 5,5 | 0,001872 | 24 | 0,1 | O,8) ы | 0,000042 |
и Определение витаминаА и каротиноидов в яйце Содержание витамина А и каротиноидов в желтке характеризует обеспеченность.птиц А-витаминным питанием и одновременно используетсяОпределениепри оценкевитаминаинкубационныхА. При анализекачествяичногояиц. желтка из средней пробы (10 желтков) в колбу для омыления берут навеску 5 г, добавляют 10 мл дистиллированной воды, перемещивают, затем добавляют 30 мл этилового спирта, снова перемешивают, добавляют 100 мг пирогаллола, 10 мл 60%-ного раствора КОН и нагревают в водяной бане при 90—95?С с обратным холодильником (его можно заменить небольшими химическими воронками) не менее | ч. В процессе омыления смесь в колбе осторожно помешивают круговыми движениями. После омыления колбу охлаждают, содержимое переносят в делительную воронку, куда добавляют 20 мл дистиллированной воды. Экстракцию проводят этиловым эфиром 4 раза {первый раз 40 мл, затем по 30 мл).
206
В дальнейшем анализ проводят так же, как при определении витамина А в молоке. Сухой остаток иеомыляемой фракции после отгона эфира растворяют в 1—2 мл хлороформа и колориметрируютОпределение каротиноидов. Определение проводят с омылением пробы желтка и без него. В первом случае каротиноиды в яйце определяют одновременно ст в нем витамина А. Берут навеску массой 5—7 г. Омыление и извлечение неомыляемой фракции проводят, как при определении витамина А в яйцах. Обезвоженный эфирный экстракт делят пополам. Одну часть используют для определения витамина A другую — для ОВО ато полученный после отронки эфира, растворяют В 10— 15$ мл бензинау Б-70.у Полученныйй экстрактэк колориметрируютр ва фотоэлектроколориметре с синим светофильтром.Зная экстинкцию испытуемого раствора, по калибровочной кривой находят количество каротина в | мл раствора (мкг). Расчет содержания каротинондов в образце проводят по формуле:
х= EVER ,
G
rye х — количество каротина Bir навески, мкг; К — количество кавой;ротинаУ —в объем1 мл раствора,испытуемогонайденноераствора,по калибровочноймл; С — навеска,кри-г; 2 — пересчет на весь объем раствора (брали '/› часть). В основу определения каротинондов в яйце без омыления положен метод Г. Д. Дубровина с некоторым изменением (по Е. В. Щербакову). В центрифужную пробирку отвешивают 0,2 г желтка из средней пробы и добавляют 3 мл этилового спирта. Желток в спирте тщательно растирают стеклянной палочкой до появления однородной взвеси. Затем содержимое пробирки центрифугируют при 2500 об/мин в течение 5—7 мин, после чего спирт сливают. К осадку добавляют бензин, хорошо перемешивают той же палочкой и центрифугируют до выпадения плотного осадка. Полученный экстракт сливают в мерную пробирку и колориметрируют. Если осадок желтоватого оттенка, экстрагирование бензином повторяют, оберирование.порции экстракта объединяют, после чего проводят колориметСодержание каротиноидов в желтке вычисляют по формуле, приведенной выше.
Определение содержания витамина А в комбикорме, обогащенном этим витамином
Принцип определения тот же, что при определении витамина А в молоке с некоторыми особенностями при омылении и подготовке образца к экстрагированию неомыляемой фракции. Подготовка образца. Пробу комбикорма массой 400 г подвергают тщательному размолу, для чего ее дважды пропускают через мельницу и хорошо перемешивают. Ход анализа. Навеску размолотого комбикорма массой 10— 20 г (в зависимости от дозы внесенного в корм препарата витамина А) помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 100 мг пиро-
галлола, 50—70 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют затем 50—75 мл этилового спирта и 10—20 мл 60%-ного раствора КОН. Содержимое колбы осторожно помешивают, ‘продувают углекислым газом или азотом. (в колбыОмылениеставятпроводятнебольшиев течениеворонки,1—1,5заменяющие4 при температуреобратный холо-80°C дильник). Смесь периодически осторожно перемешивают встряхиванием. После омыления колбу с содержимым охлаждают под струей воды, затем добавляют 50 мл дистиллированной воды и 20 мл спирта. После этого колбы со смесью ставят на шуттель-аппарат на 10— 15 минут, наблюдая за качанием. Экстрагирование омыленного образца проводят 4 раза, используя первый раз 50 мл эфира, затем — по 40 мл. Для экстракции ис| пользуют две делительные воронки, а далее поступают, как указано при определении витамина А в молоке. Определение витамина А в премиксах Метод определения витамина А тот же, что и при определении Bтезбелок). Sone) Tiere,еречень 060)ранееудования,(предус м оа т ренериаловTY 59-49—72и еактивов ВНИИприве син - ден выше. Ниже а внимание in КОТА р. ведения данного анализа. Из средней пробы хорошо перемешанного премикса берут навеску массой 5 г, помешают в колбу на 200—250 мл для омыления, добавляют 50 мл 96% -ного этилового спирта и 50 мг пирогаллола. Содержимое перемешивают и ставят в кипящую водяную баню. ком)Омылениес моментапроводятначала вкипения.течение Смесь30 минпериодически(с обратным взбалтываютхолодильникруговыми движениями. После омыления содержимое колбы быстро охлаждают под струей воды до комнатной температуры. Для экстракции витамина А в колбу добавляют 50 мл эфира и хорошо взбалтывают. Содержимое колбы через воронку Шотта, используя водоструйный насос, переносят в делительную воронку на 500 мл, куда предварительно налито около 50 мл дистиллированной воды. Экстракцию неомыляемой фракции повторяют трижды порциями по 30 мл. мый Послеостатокотгонав колбеэфирабыстро(в токерастворяютуглекислогов хлороформегаза) сухойи неомыляе-переносят каждую порцию в мерную колбу на 100 мл. Объем доводят до метки хлороформом. Затем проводят колориметрирование или спектрофотометрирование.
Определение витамина А в препаратах, содержащих этот витамин (по А. А. Дмитровскому)
Витаминная промышленность выпускает жировые (масляные) концентраты витамина А, а также в сухой форме на декстриновой или белковой основе. Процесс количественного определения в них витамина А различен. Масляные концентраты сразу разбавляют хлороформом до требуемого объема, В | мл хлороформного раствора должно содержаться 15—80 ИЕ витамина А.
208
