галлола, 50—70 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют затем 50—75 мл этилового спирта и 10—20 мл 60%-ного раствора КОН. Содержимое колбы осторожно помешивают, ‘продувают углекислым газом или азотом. (в колбыОмылениеставятпроводятнебольшиев течениеворонки,1—1,5заменяющие4 при температуреобратный холо-80°C дильник). Смесь периодически осторожно перемешивают встряхиванием. После омыления колбу с содержимым охлаждают под струей воды, затем добавляют 50 мл дистиллированной воды и 20 мл спирта. После этого колбы со смесью ставят на шуттель-аппарат на 10— 15 минут, наблюдая за качанием. Экстрагирование омыленного образца проводят 4 раза, используя первый раз 50 мл эфира, затем — по 40 мл. Для экстракции ис| пользуют две делительные воронки, а далее поступают, как указано при определении витамина А в молоке. Определение витамина А в премиксах Метод определения витамина А тот же, что и при определении Bтезбелок). Sone) Tiere,еречень 060)ранееудования,(предус м оа т ренериаловTY 59-49—72и еактивов ВНИИприве син - ден выше. Ниже а внимание in КОТА р. ведения данного анализа. Из средней пробы хорошо перемешанного премикса берут навеску массой 5 г, помешают в колбу на 200—250 мл для омыления, добавляют 50 мл 96% -ного этилового спирта и 50 мг пирогаллола. Содержимое перемешивают и ставят в кипящую водяную баню. ком)Омылениес моментапроводятначала вкипения.течение Смесь30 минпериодически(с обратным взбалтываютхолодильникруговыми движениями. После омыления содержимое колбы быстро охлаждают под струей воды до комнатной температуры. Для экстракции витамина А в колбу добавляют 50 мл эфира и хорошо взбалтывают. Содержимое колбы через воронку Шотта, используя водоструйный насос, переносят в делительную воронку на 500 мл, куда предварительно налито около 50 мл дистиллированной воды. Экстракцию неомыляемой фракции повторяют трижды порциями по 30 мл. мый Послеостатокотгонав колбеэфирабыстро(в токерастворяютуглекислогов хлороформегаза) сухойи неомыляе-переносят каждую порцию в мерную колбу на 100 мл. Объем доводят до метки хлороформом. Затем проводят колориметрирование или спектрофотометрирование.
Определение витамина А в препаратах, содержащих этот витамин (по А. А. Дмитровскому)
Витаминная промышленность выпускает жировые (масляные) концентраты витамина А, а также в сухой форме на декстриновой или белковой основе. Процесс количественного определения в них витамина А различен. Масляные концентраты сразу разбавляют хлороформом до требуемого объема, В | мл хлороформного раствора должно содержаться 15—80 ИЕ витамина А.
208
Сухие препараты подвергают омылению. Для этого п цолбу для омыления помешают точную навеску препарата массой около 100 мг (препарат с активностью 250—325 тыс. ИЕ в 1 г), добавляют около 100 мг пирогаллола, | мл горячей дистиллированной воды (65— 70°C)ного растворенияи осторожномикрогранул.круговыми движениямиЗатем добавляютперемешивают2 мл 60%до -иогополКОН и 25 мл этилового спирта и снова перемешивают. Колбу продувают азотом или углекислым газом, присоединяют к обратному | воздушному холодильнику и помещают в водяную баню при 90— 95°С на 20 мин, изредка осторожно помешивая содержимое. | Через 20 мин колбу отсоединяют от холодильника, охлаждают | под струей холодной воды, содержимое переносят в делительную воронку и проводят 4-кратную экстракцию серным эфиром (в первый раз берут 30 мл эфира, затем — по 20 мл). Дальнейший процесс анализа, как в предыдущих методиках. Определение рибофлавина в яйце
Принцип метода. Метод основан на способности растворов риpoem ПЕНЬ в Еее: EERO SAD (Uae ЕноЕ.ы В ме Sis ETC eee ОА вактивы. Стандартный основной раствор рибофлавина. Навеску 10 мг предварительно растертого в ступке рибофлавина переносят в мерную колбу на 250 мл и растворяют в дистиллированной воде. После полного растворения доводят BOOK = pees (1 мл раствора содержит 40 мкг рибофлавина). Раствор [SISOSустойчив OAв течениеLt) SSI,месяцаARERATETTпри храненииДи Оооона холоде NHв темнойАЕОСЕНЬпосуде. ВОР: ля РЯ I eT SEEONE ETERS TEN) [PEASE ELSE (Sную колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки. ВЯ мл ВЕООЕЕВОВАСТВОВА SONG eI ЕКО рибоФлавина. Этиловый спирт 96 а бевдпонмесей альдегидов), Этиловый спирт 55%-ный (берут 57,3 мл 96 №-ного и добавляют дистиллированной воды до 100 мл). Сода двууглекислая (МаНСО;). Гидросульфит натрия (№ 225204). кая качалка;Приборвеосудаьцилиндрытуроммерные с притертой,етрасянаборомпробкой;BUBBA HOESцилиндрыLUTмер-ee ные на 50. мл; колбы мерные на 50, 100 и 250 мл; стаканчики с носиком на 50 мл; воронки; стеклянные палочки. Ход определения рибофлавина в желтке. Из тщательно размешанной средней пробы желточной массы переливают около 10 гв стаканчик с носиком. Стаканчик с желточной массой взвешивают. В цилиндр с притертой пробкой вносят 50 мл 55%-ного этанола. Из стаканчика в этанол тонкой струей (быстрое сливание массы приводит к образованию плотных сгустков, которые впоследствии плохо разбиваются) лыот около 5 г желточной массы. Стаканчик с остатком желточной массы взвешивают и по разности определяют массу навески. Цилиндр затем закрывают пробкой, встряхивают 2 мин вручную. При отсутствии цилиндров с притертыми пробками можно использовать конические колбы на 250 мл. В центр колбы берут навеску 5 г желточной массы (она не должна попадать на стенки и 14—938 209
горло колбы). Затем очень маленькими пордиями при постоянном помешивании палочкой добавляют 50 мл 55%-ного этанола. Колбу закрывают пробкой (ватный тампон, обтянутый полиэтиленовой пленкой).
Цилиндры (или колбы) ставят в механическую качалку и встряхивают в течение двух часов. Содержимое отфильтровывают через сухой бумажный фильтр. Вытяжку разводят в 2—5 раз (используют мерные колбы на 50 мл). В разведенной вытяжке замеряют интенсивность флуоресценции при помощи флуорометра, согласно инструкции, прилагаемой к прибору. Одновременно замеряют интенсивность флуоресценции рабочегоВ пробиркистандартногосо стандартнымраствора.и испытуемым растворами прибазляют на кончике шпателя МаНСОз и Ма252О: (примерно по 0,1 г), смешивают и вновь измеряют флуоресценцию. При этом в стандартном растворе она гасится до нуля. В исследуемых вытяжках остается небольшая флуоресценция, обусловленная посторонними флуоресцирующими веществами. Тушение флуоресценции рекомендуется проводить дважды, так как иногда она протекает медленно. Для этого к пробам повторно добавляют гидросульфит натрия и соду и вновь измеряют флуоресценцию раствора. Содержание рибофлавина в исследуемой желточной массе вычисляют по формуле
(А— B)-0,4-V * C-a у
где х— количество рибофлавина в | г желтка, мкг; А — показания флуорометра для испытуемой вытяжки (первый отсчет); В — показания флуорометра для испытуемой вытяжки после гашения флуоресценции (второй отсчет); С — показания флуорометра для стандартного раствора, содержащего 0,4 мкг рибофлавина в | мл (чаще устанавливают на величину 60—80); 0,4 — содержание рибофлавина в {1 мл стандартного раствора, мкг; а— навеска желтка, г; У — объем вытяжки с учетом разведения, мл. Объем вытяжки с учетом разведения рассчитывают следующим образом: в 5 г желтка, взятых на анализ, содержится 2,5 г воды (содержание влаги в желтке равно 50%). Учитывая добавление 50 мл этанола, объем жидкости составляет 52,5 мл. Так как перед измерением интенсивности флуоресценции фильтрат был разведен в 5 раз, то общий объем (У) составит 262,5 мл (52,5-5). Пример. Показание флуорометра для испытуемого раствора (первый отсчет) 18, после гашения (второй отсчет) 4; показания флуорометра для стандартного раствора 60; навеска желтка 5 г. ‚_ (8—4-0,4.262,6 4 g мкг в 1 г желтка. 60.5
Определение рибофлавина в яичном белке
Среднюю пробу белка тщательно размешивают. В цилиндр © притертой пробкой берут навеску белка около 10 г. Для этого стаканчик с белковой массой взвешивают, затем часть белка переливают в цилиндр. Стаканчик взвешивают повторно, по разнице двух
