rae а-— количество трилона Б, пошедшее на титрование; К — поправочный коэффициент О,Ён; раствора трилона Б; Н — количество миллиграмм-эквивалентов, которому. соответствует 1 мл 0,1 н. раствора трилона Б; И — объем исследуемой воды, взятой для анализа. Для пересчета на градусы жесткости полученную величину yMножают па 2,8, По ГОСТ 2874—73 в питьевой воде общая жесткость допускается 7,0 мг-экв. нал (в некоторых случаях — не более 10,0 мг-экв.}. Допускается нопользование для поения животных в зависимости or зоны воды, имеющей жесткость: для крупного рогатого скота 10— 18,0, овен 20—45, лошадей 10—15, свиней 8—14 мг-экв. В полуцустынных районах Средней Азни допускается для поения животных вода с жесткостью до 21,4 мг-эквна Гл.
Бактериологические исследования воды
Бактериологический анализ воды—важнейшая часть гигиенического исследования. Результаты его могут иметь решающее значение при санитарной оценке воды, С эпнзоотологической точки ‘зрения при санитарно-гигиенической оценке воды имеют значение преимущественно патогенные микроорганизмы. Однако обнаружить их даже в заведомо инфицированной воде очень трудно. Поэтому при бактериологическом контроле обычно пользуются косвенным методом, определяя мнкробное число, титр кишечной палочки (колититр) и коли-индекс. При этом считают, что чем значительнее загрязнена вода, тем больше в ней сапрофитной и кишечной микрофлоры, и, наоборот, чем меньше она загрязнена, тем меньше в ITOH воде микробов, в частности бактерий Е. coli, и, следовательно, тем меньше выражена возможность возникновения инфекционных заб0леваний прн употреблении такой воды. Микробное число исследуемойводы. Это ориентировочный— общее количествопоказатель, микробовтаккак в |под- мл гчитываются все находящиеся в пробе микробы без их идентификапни. Оно указывает на загрязнение воды сточными водами, различными отходами, в которых могут содержаться патогенные микроорганизмы. Микробное число имеет зиачение при контроле за состоянием воды в одном и том же источнике в разные периоды времени, при контроле за эффективностью действия водоочистных сооружении HT. Пробып. воды для санитарно-бактернологического анализа следуer отбирать с соблюдением требований, описанных выше. _ Определение микробного числа. Посуда, приборы, питательные среды. Стерильные пипетки с делениями от 1 до 0,1 мл для посева чистых вод и до 0,01 мл для сравнительно загрязненных (воды с большим загрязнением высевают после соответствующих разведений); чашки Петри; два термостата < автоматическим терморегулятором в пределах 50°; лупа и счетная пластинка; мясопептонный агар (к 1 л мясо-пептонного бульона добавляют 15 г агара, растворяют при нагреванни в аппарате для стерилизации текучим паром или в автоклаве при открытом кране для выпуска пара}; величина РН среды в пределах 7—7,2 (среду разливают в пробирки по 15 мл и стернлизуют обычным путем в автоклаве); стерильная вода, налитая в пробирки по 9 мл.
262
Ход определения. Доставленную в лабораторию пробу воды тщательно перемешивают, стараясь ие смачивать пробку. Стерильными пипетками набирают пробы для посева в чашки, Для каждой чашки берут отдельную пипетку. При недостатке пипеток можно пользоваться одной пипеткой при условии, что посев начинают с больших разведений. Воду с небольшим загрязнением высевают в количестве от | до 0,1 мл непосредственно в чашки, а со значительным. загрязнением разводят перед посевом стерильной водой. Для этого ‘в пробирку с 9 мл стерильной воды вносят | мл исследуемой воды и тщательно перемешивают. Получают первое разведение 1:10. После этого 1 мл воды первого разведения вносят во вторую пробирку (разведение 1:100). Так поступают до получения необходимого разведения (каждый раз берут новую стерильную пипетку). Из пробы исследуемойзависимостиводыот степенидолжноожидаемогобыть сделанозагрязнения.не менеев двух разведений^ в Отобранное количество воды впосят в чашку, слегка приподняв ее крышку. Одновременно ставят в водяную баню (45°) пробирки с мясо-пептонным агаром для расплавления и выливают в чашку с исследуемой водой. Враацательным движением смешивают воду © агаром и ставят чашки на горизонтальной плоскости для застывания агара Восковым карандашом делают на крышке чашки нужные надписи (номер пробы, количество зассянной воды, разведение, дата посева). Чашки помещают в термостат крышкой вниз, стопками {по 3—4) при 37° на 24 ч. Пробы воды из открытых водоемов засевают в две чашки, которые помещают во второй термостат при 20° на 48 ч. Подсчитывают колонии с помощью лупы по всей площади чашки. Если на площади чашки выросло свыше 300 колоний и нет посевов других разведений, можно вести подсчет при помощи счетной пластинки. (снявДлякрышта к огоу илиподсчетавверх дном).чашкуСосчитываютс колониямиколонииставят в под12 квадра-стекло тах; в четырех центральных и в двух, расположенных по -четырем углам счетной пластинки. По найденным числам определяют число колоний ва всю площадь чашки (последнюю измеряют по формуле sir?) и рассчитывают содержание микроорганизмов в 1 мл исседуемои воды. Пример. Диаметр чашки 10 см, откуда площадь ее равна 5?.3,14=78,5тельно на 1 см?см?. приходитсяВ 12 квадратах7 колоний,сосчитаноа на 84всюколонии,площадьследова-чашки 78,5-7=549,5. Засеяно 0,5 мл воды, откуда в 1 мл содержится 549,5.2=1099 колоний микробов. Подечет лучше делать на двух чашках с посевом одной и той же пробы воды и взять среднее арифметическое из’ них. , Для определения числа бактерий в воде может быть использо» ван «прямой метод», основанный на использовании мембранных фильтров с последующим подсчетом микробов под микроскопом. Имеется модификация этого метода с применением фазово-контрастной микроскопии. В воде незагрязненных и хорошо оборудованных артезнанских скважин микробное число не превышает 10—30, в воде шахтных колодцев— 300—400, в воде сравнительно чистых открытых водоемов — 1000—1500 в 1 мл. В водопроводной воде при достаточной очистке100 в 1 мли обеззараживанииводы. микробное число не должно превышать - 263
Результаты количественного определения в воде бактерий : Е. coli выражают в виде коли-титра и коли-индекса. . Колн-титром называют наименьший объем исследуемой воды, в котором обнаружена кишечная палочка. Коли-индекс показывает число кишечных палочек B 1 л воды. Ускоренный метод определения в воде кишечной палочки (по М. Г. Киченко). Метод позволяет сократить срок анализа до 20— 24 чи не только установить титр Е. coli, но и дифференцировать виды выросших организмов. Исследования ведут в два этапа: посев исследуемой воды на среду накопления (пептонно-глюкозную) н выращивание на ней в течение 12 4 npn температуре 42°; пересев со среды накопления (независимо от признаков роста) на агаровую среду с розоловой кислотой и выращивание в течение 12 ч при 37 (можно при 42°), Для пересева пользуются платиновон петлей с большим ушком. . Оборудование и питательные среды. Термостат, отрегулированный для поддержания температуры в пределах 42°, пробирки с газовками, платиновая (нихромовая) петля с крупным ушком; среда накопления для первичного посева; мясо-пептонный arap с розоловой кислотой. . Для подготовки среды накопления в 1000 мл водопроводной воды растворяют при нагревании 10 г нептона и 5 г поваренной coли, доводят до кипения, фильтруют и после этого добавляют5 г (можно 2,5 г) глюкозы. Устанавливают рН среды в пределах а 7.6. Разливают среду в пробирки с поплавками по 10 мл ин стерилизуют в текучепаровом аппарате или в автоклаве при открытом вентиле, 7 Мясо-пептонный агар с розоловой кислотой готовят no следующей прописи: в | л мясо-пептонного агара (агара около 1%) вноcar 50 мл желчи, 10 г лактозы и 1 г глюкозы. Все это смешивают при подогревании. Устанавливают РН среды в пределах 714—756. В приготовленную среду добавляют индикаторы (2 мл 1%-ного спиртового раствора бромтимолового синего и 2 мл 5%-ного свежеприготовленного спиртового раствора розоловой кислоты). Среду разливают в агглютинационные пробирки и стерилизуют при 112 в течение 20 мин. Перед посевами среду скашивают так, чтобы получилась косая поверхность H столбик ее достаточной высоты (полускошенный агар). Среда в готовом внде имеет коричнено-красный цвет, При отсутствии или недостатке бромтимолового синего среда будет иметь бледно-розовую окраску. Можно готовить среду и 6e3 добавления желчи, но она не будет давать четких показаний. Ход определения. Исследуемую воду, взятую из источника водоснабжения в стерильную посуду, возможно быстро доставляют в лабораторию, где ее засевают в колбы и пробирки. Сравнительно чистую воду из водопроводов, благоустроенных и. лодцев, артезианских скважин засевают в пробирки в количестве Тиб мл ив колбы в количестве 10,25 и 100 мл. Воду из открытых водоёмов в зависимости от предполагаемого загрязнения SeCCHRIOE F пробирки в количестве 0,01; 0,1; 0,2; 0,5; 1 мл или 0,001; 0,01; 0, и 1 мл (путем разведения в стерильной воде). Встряхиванием пробирки илн колбы воду хорошо смешивают со средой, стараясь в TO же время заполнить засеянной средой весь объем НЫ бирочки (газовки). Посевы помещают в термостат при 45 на 24 a Через 24 4 делают пересев на агаровую среду с POSONOBOA кие лотой путем уколя в толщу агара и проведения штриха на скошен‘ й
