относятся нитраты, аммиачные соли, свободные аминокислоты и их соли, амиды аминокислот, содержащие азот, глюкозиды, оргайические основания. _ Приборы, реактивы, оборудование. Колбы Кьельдаля на 250 и 500—700 мл; колбы конические или обычные; установки в шкафу для сжигания ло Кьельдалю; прибор для отгона азота по Кьельдалю; колбонагреватели или другой источник натрева; каплеуловители; конические колбы на 300—400 мл; бюретки на 50—25 мл; пилиндры на 25 и 100 мл; склянки для коицентрироваипых кислоты ин щелочи; концентрированная серная кислота (удельный вес 1,81 1,82); катализаторы (сернокислая медь и серпускаетсяпокиелый калийтехническая)пли смесь33—40%;этих солейпемзас селеном);порошкообразнаяедкая щелочьили гра-(донулировапная (стеклянные или фарфоровые трубочки); лакмусовая бумага (красная); дистиллированная вода; 2%-пый раствор борной кислоты; 0,1 н, раствор соляной кислоты; смешанный индикатор (индикатор Ташира). Принцип метода. Определение сырого протеина основано на определении азота как характерного элемента для бедка, Для получения азота органическое вещество сжнгается при воздействии концентрированной серной кислоты (удельный вес 1,84), Серная кислота при подогревании разрушает углеводы и жиры до углекислого, газа и воды, которые улетучиваются, а белки распадаются до аммнака, образующего с серной кислотой нелетучую соль (сернокислый аммоний) по следующему: ‘уравнению: р 2NHg-Е 2Н,5$0, _= (Ny)ant SOq-в : Затем Ha соль серпокиелого аммония действуют 33%-ной щелочью (NaOH), при этом снова выделяется аммнак по уравнению: (МН)),501 -- 2NaOH = Ма,30, + 2NH,OH. Выделяющийся аммиак поглощается 0,1 н. Нз5 Ох. Избыток серной кислоты титруют 0,1 н, NaOH, По количеству связанной серной кислоты определяют колнчество азота, бывшего в корме, зная, что образует1 мл 0,1 н.6,25Н.50О.г белкасоответствуетили сырого0,0014протеина.г азота, На1 г основанииазотав среднемэтих данных находим процентное содержание сырого протеина в корме. Вместо 0,1 и. HySO, используют также 2%-ный раствор борной кислоты (в приемпик набирают 20—25 мл). После отгона аммиака содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. соляной кислотой в присутствии 6—8 капель смешанного ипдикатора. Соляная кислота Bbly тесняет борную кислоту из солей н соединяется с нонами аммония, образуя хлористый аммоний. Конец реакции характеризуется рез“ ким сдвигом рН в кислую сторону (5,5). Протеин, определяемый по методу Кьельдаля, называется сырым потому, что определяется He только белковый азот, но и азот амннокислот и их амидов, азот солей азотной и азотистой кислот. Ход определения. Озоление органического вещест“ ва Насыпав в цилиндр 0,3—0,5 г исследуемого корма, взвешивают его и записывают вес. Содержимое цилнидрика аккуратно высыпаот в колбу Кьельдаля, опустив его глубоко в горло колбы. По разности веса цилиндрика с кормом и пустого цилиндрика определяют хавеску корма. й a В колбу Кьельдаля осторожно наливают 10—15 мл кониентрированной серной кислоты, аккуратно перемешивают содержимое 154
(при этом происходит обугливание вещества), добавляют катализаторы: 0,5—1 г Си5Ох- 5Н2О и 3—5 г К„50. или специальную смесь из этихСжиганиесолей с селеорга н ическогоом (0,2—0,5веществаг). проводится до получения светлого раствора (во избежание потерь азота сжигают на слабом огне). Во время сжигания следует часто помешивать содержимое колбы, чтобы на ее стенках не оставалось несгоревших частиц. После просветления жидкости колбу охлаждают, а затем осторожно приливают 100—150 мл дистиллированной воды. Жидкость становится зеленовато-голубоватой (медный купорос поглощает воду и восстанавливает голубой цвет). nanaПолученныйемкостью 500—700| a мл.целикомЕе несколькопереносятразв другуюсмываютколбуводой,Кьель-сливая волу п большую колбу Кьельдаля. ' Колбу с раствором ставят на колбонагреватель отгоночного аипарата Кьельдаля, предварительно подобрав хорошую пробку. Отгон аммиака в серную кислоту. В коническую колбу берут из бюретки 20—50 мл 0,1 н. Н›5О; н 1—3 капли индикатора коигорот. Колбу затем ставят в аппарат Кьельдаля, опустив стеклянi трубку в Н2$О4. Отмернвают осторожно 60—70 мл 33% -ного вОН в цилиндр, а затем аккуратно переносят в колбу Кьельдаля. На кончике ложки добавляют в колбу кусочки пемзы, фарфора или фарфоровые трубочки (это необходимо для спокойного равномерного кипения). Плотно закрывают колбу пробкой с каплеуловиTone и ен, размешивают ее содержимое. ром (выделяющийсяключают кол эонагревательаммнак поглощаетсяи отгоняют0,1аммиакн. сернойс водянымОИ),паКонец отгона аммиака определяют по красной лакмусовой бумажке, подставленной под стекающую каплю отгона. Если лакмус не cHя аммиака окончен. Отгон при хорошем кипении длится По окончании перегона трубочки промывают дважды дистиллироваинон водой, сливая ее в приемную колбу. Затем оттитровывают содержимое колбы (избыток взятой 0,1 и. HySO4) 0,1 н. NaOH. Процент азота вычисляют по формуле:aie ри x=——, b
: |
в где х — искомый процент азота; @ — количество азота в навеске, г; b напеска вещества, г. J Для Вычисления процента сырого протенна полученный процент ed умиожают Wa 6,25. р о тгон аммиака в борную кислоту. Макрометод. Вместо рас^ TEARS 0,1 n. Н50; можно пользоваться 2%-ным раствором борной кислоты (в приемник набирают 20—25 мл). После отгона аммиака содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. HCI в присутствии 6— 8 капель смешанного индикатора (0,02 г метилового красного растворяют в 60 мл этилового спирта, затем добавляют 40 мл воды). pose этого 0,1 г метнлового синего растворяют в 100 мл воды. ь SPS работой смешивают 25 мл метилового красного и 3 мл меeee синего. Изумрудно-зеленый цвет содержимого колбы при. а соляной кислотой в присутствии смешанного индикатора Hee дит в красно-фполетовый при pH 5,5; 1 мл Он. раствора ‚ пошедшей на титрование, соответствует 0,0014 г азота.
Кьелъельдаля,Полумикрометод.применяяпр сернуюpry Проводяткислоту н какой-либоозоление кормакатализаторв колбедо просветления жидкости. После охлаждения содержимое7 колбы pas3° re 10—15 мл дистиллированной воды н переносят в мерную колAnne 100 ma . . 7 у Объем содержимого в мерной колбе доводят почти до 100 мл и 1 у . перемешивают. ие остывания раствора объем его доводят до т аммиак с водяными парами в аппарате Парнаса или pe налогичиом ‘приборе собранном в лаборатории. 100 Для‘мг корма)этого полученногоHeelan пипеткойраствора20п млотгоночную(эквивалентноколбу, примернодобавляtor 15 мл 304%-ного раствора щелочи и пропускают сильную струю пара. Если отгонку проводят ue в приборе Париаса, перед пуском параope пелесообразно содержимое отгоночной колбы нагреть до кипеЕ Е ns etsAKO или спиртовкой.в ге Tepen pawoaniuent ЕЕ в колбу Кьельдаля под выводящую т С oman отгоночного прибора ставят копическую кол> Е Sh Oye— 10 Maель 2%-ногосмешанногораствораиндикатора.борнойр кислоты, к которой добавляют i стиу НЫ15—30 мив, чтобыor СНсобрать околоструи50 млпарадистиллята.отгонку следуетОкончание = отгонки аммиака устанавливают нанесением капли дистиллята на лакмусовую бумагу. Отгон аммнака целесообразно проводить сразу Вдвухре Чунпр борах, р помещаяр в них параллельные пробы из одного ; ия orrona аммиака наконечник форштосса холоae снар ужи и внутри обмывают небольшим количеством дисae oa воды и содержимое колбы приемника титруют из Ч 5 мл) 0,1 или 0,05 н, раствором НС! до перехода Е НЯ A красную 2 ОР лек с определением азота в серии образцов проводят r Kono)АИTONE < (холостую)ОО reмещенияедшеепробу,навескиНа выполнивтитобразца И agвне в седистиллятаколбувышеуказанные6 Къельд;ьельдаля.в холостойKe.Ko-и ЕЕ м роваЕит анализируемых обпробе,О вычитают7 из результатов ` аОутв.ОНдержаниеизрасходованиомуcoorberrayeTазота3 в 0,0014навеске, apeckWa титрованиег азота.(в граммахг объемуQ или кислотыпроцентт а х).=i tml
Определениес использованиемазота реакциифото колориметрическимолориндолфт ae методомзелени (по методике WHHAO) i Определение азота в растворах после мокрого озоления кормов ) а бразования ионами аммония окрашенного индофенольо а вино которого регистрируется фотоколоногоpamerpom. Beaаяачале уeeреакцииИыион аммонияр натрияокисляетсяиндофенольноесляе хлор!ором(аль-до ] о ‘соединение сине-зеленого пвета с максимумом све7 фа-на ей по 655 им. В качестве катализатора этой реакции TORORO SERIA Че усснд натрия используют нитропруссид натрия. 156x
