Г. т iT]
®г} Ликопин ИЕ|
il
оротин
| x К i|]И
1 P- Коротин .
ey
Й оХаратин | il inhd |
| | fo
Fh \ K
se с А Be
=} с |+ \ ffY/ CANA7 Way\WYм ‘=esр7’ ; ПИ= =
МАЖИ Novy Я iШJ alii \АА ит| ieя WR.р
В Lier Е | Vis
п"Мн ии Wh В О” *
Shada Ам хеfe4 1 2 3 4
тРис. 3. it gue.С 4 ть АЯ ARERHALHPOBARHAS; ‹
тов в колонке. 1 — колба Byusena; 2 — фильтр Шотта; 8 — sopon-
ка Бюхнёра; 4— тигель Гуча,
Яок т eens вые моно хорошо измель5 г. Вещество переносят а фарфоров Я ост врут навеску 3— мельченное стекло. 1216 Е Е р стук, куда добавляют изЯ растительной массы) а Pada слого натрия (для обезвоживалегко окисляется). О а Aiton nc (каротин на воздухе как с сухими KOpMani (sie: 4) роцесс исследования такой же, Посе gactanne aie ов . aay астанвання раствор каротиноидов из колбы сливают в адсорбционную трубку. Перед пропусканием вытяжки через колонку ae a, предварительно пропустить небольшое количество растворит.О ОЕ Don pati вакуумом; Осадок, оставшийпереносят в боян и О чеством растворителя и вают до тех пор; пока ва а т и. ор анЕ МЕ nevcraner бебпветным По Bea Dr : ial низ трубки Аллина О етным. По окончании адсорбции объем прошедшего через колонку раствора каротинондов измеряют цилиндром и колоВАМ трируют с синим светофильтром, Расчет содержания ка ротина в ко рме проводят по калибровочному графику. В том случае, когда калибровочная кривая Reopens на основе синтетического каротнна, расчет выполняют по Формуле
Vie СK-V-1000
где X — количество каротина корма, мке/г или мг/ке корма; K — количествовочиой кривой;каротинаУ —в объем1 мл раствора,испытуемогонайдениоераствора,по калибро-мл; С -- навеска корма, г; 1000 — коэффициент пересчета на | кг При пользовании стандартным раствором двухромовокислого ка лия содержаниеuuкорма. каротинар вычисляютипо формулери где а-- эквивалентноеграфику, мл; 0,00416количество— коэффициентисходного раствора,перевода найденное1 мл исход-по ного раствора К›Сг2О? в эквивалентное количество мг каротина (для азобензола этот коэффициент равен 0,00235); ладаетСредиВ-каротнн.С —корма.каротниондовнавескаБиологическаякорма,наибольшейг; 1000активность— биологическойкоэффициентдругихпересчетаактивностьюосновныхна 1изо-об-кг меровтину составляеткаротина 52—57%— %, у и (В.криптоксантинаМ. Березовский,— по1959). отношению к В-кароВ растительном материале на долю В-каротина приходится в траве около 75%, в красной моркови— 85%, в желтой кукурузе— 50% от суммарного содержания каротина (А. Р. Вальдман, 1977). Определение витамина A в биологических объектах деленииСущностьнеомыляемойметодафракцииопределениясодержащейвитаминаего, иА определениисостоит в вы-в иней витамина колориметрическим или спектрофотометрическим измерением.
Колориметрическое определение витамина А основано на его способностиметоды определениядавать синеевитаминаокрашиваниеА лес треххло] истойTOCTсурьмой.7047-38.На Спектрофотометрический метод основан на измерении степени поглощения света раствором при длине волны 325 нм. Следует учесть, что в анализируемых объектах одновременно с витамином А содержатся каротиноиды, которые, как и витамин А, дают с треххлористой сурьмой аналогичную окраску. В результате этого содержание витамина А оказывается завышенным. Считают, что для точного определения содержания витамина А необходимо отделение его от каротиноидов (В. А. Девятнин, 1954; А. А. Дмитровский, В. С. Крюков, Т. М. Околелова, 1978). у Прямое спектрофотометрическое определение витамина А в иеомылясмой фракции возможно лишь в тщательно очищенных от различных соединений растворах. Поэтому при количественном определении витамина А его следует отделять от этих соединений методом тонкослойной хроматографии или с использованием хроматографической колонки. Такая хроматография обеспечивает одновременное разделение ксантофиллов, витаминов А, Е и В-каротина. П ри бо ры. Спектрофотометры СФ-4 СФ-4а, СФ-16 и др.; фотоэлектроколориметр ФЭК-М или др.; кварцевая лампа ПРК-4; весы аналитические; водяная баня с терморегулятором; роторный испаритель; водоструйный насос; центрифуга; баллон стальной (с инертным газом и приспособлением для пускания газа); штативы. Посуда. Колбы круглые плоскодонные для омыления; колбы со шлифом на 200 мл; колбы конические со шлифом на 150—200 мл;
199
воронкиколбы(4— 40мерныеem,делительныеkh—на 10—12100 мл;цилиндрическиесм);пипеткицилиндрына 1, мерныена2, Би500 10намл;мл;25,кристаллизаторворонки100 и 250хими-мл; ческие(размер 2230(для фильтрования);см); пробирки колбыхимические.Бунзена; пластины стеклянные Реактивы. 60%-ный водный раствор КОН; 40%-ный водный раствор КОН; спирт этиловый (ректификат) н абсолютный; эфир дизтиловый,(х.ч. свободный от примесей; натрий сернокислый безводный ный спиртовойили a),растворпирогаллолфенолфталеина;(ч.д. а); окисьпетролейныйалюминияэфир;для хрома-0,05%тографии;ангидрид хлороформ (х.ч, ч.д.а); сурьма треххлористая; уксусный Ход определения.(4, д, а); бихромат. Количествеиноекалня. определение витамина А в исследуемых образиах можно разделить на 4 операции: омыление образца;вание; колориметрированиеэкстрагирование ‘неомыляемойили спектрофотометрирование.фракции; хроматографироОмыление и экстрагирование анализируемых образнов (молока, описаниепрепаратовпроцессавитаминаанализаА и др.)обраацаимеетприводитсяряд особенностей,на примереДетальноеисследования содержания витамина А в молоке, Анализ рекомендуется проводить быстро, без перерывов между отдельными операциями, при слабом рассеянном свете. Омыление необходимо проводить в атмосфере азота или углекислого газа. следуетЭкстрагированиепроводитьомыленногов вытяжном образцашкафу. и дальнейшие исследования нужноПри колориметрическом определенни витамина А в образцах чистогопредварительноацетата витаминастроитьА. калибровочный график из растворов Подготовка к анализу. Пост роение калибровочной кривой при анализе витамина А (по А. А. Дмитровскому). Растворы для построения калибровочной кривой готовят из чистого ретинилацетата или из масляных концентрированных препаратов с точно определенной активностью. Берут навеску ацетата витамина А, содержащую в расчете на чистоемом вещество 3,44 мг ретинилацетата, растворяют ee хлорофорв мерной колбе на 100 мл. Приготовленный основной раствор содержит в | мл 100 ИЕ витамина А. Затем готовят серию рабочих кр а ми;створов.в первуюДля этогоотмеряютберут | 8 мл,колбвоиливторуюпробирок— 2, третьюс притертыми— 3, четвер-пробтуюосновного —4, пятуюраствора.— 5, шестуюЗатем в— каждую7, седьмуюколбу— 9 ив(пробирку)восьмуюдоливают — 10 мл похлороформвосьмую доколбу10 мл.содержитВ результате10, 20, |30,мл40,рабочего50, 70, 90раствораи 100 HEс первойвитаMunaДляA, построения калибровочной кривой при определении витамина А с треххлористой сурьмой в кювету фотоколориметра наливаютцию. 0,4Затеммл рабочегоизмеряютраствораинтенсивностьиз первойокраскиколбы раствораи измеряютиз экстинк-второй, третьей колбы и т. д. При измерении экстинкции раствора из первой колбы в кювете STHсодержится20, шестойвеличины—4,28,используютиз седьмойвторой ——при 368, третьейпостроенииин из восьмой— 12. калибровочногочетвертой—40 ИЕ— витамина16, графика,пятой—А. откладывая их на оси абсцисс, а измеренные величины экстинкцин— на оси ординат, 200
