Определение витамина А и каротина в молоке и молозиве
Содержание витамина А в молоке в молозиве колеблетсяty в или 7 роких границах и зависит в первую очередь от потреблетия каротина с кормами. | л зимнего молока содержит 0,20—0,30 ит а . летнего — 0,40—0,80 мг. А-витаминная ценность НН ВК зависит от обеспеченности коров каротинным питанием в CRG TOR ный период и колеблется по дням молозивного пернода. Содержание пнтамина А в | л зимнего молозива первого удоя колеблется от 1,50 до 3,0 мг, легнего— от 2,50 до 7,00 мг. Содержание витамина А в молозниве на четвертый день после отела составляет в среднем 12--29% его копиентрации 8 первый день. Это следуст учитывать ири отборе проб молозива для анализа. Среднюю пробу молока берут во флаконы из темного Cassie He: у посредственно после доения по общепринятому способу ЕЕ eres или от одной в количестве 50 (летнее) или 100 мл (зимиего) (мо 4031180— 30 мл). | » Woe В пробу молока сразу после взятия приливают 60%-ный водный раствор едкого калия из расчета: на 50 мл молока— 20 мл раствора КОН, 100 мл молока —50 мл, 30 мл молозива— 20 ВД Законсер вированные щелочью пробы молока можно хранить в холодильнике в течение 3—5 дней. Омыление проб молока. Пробу5 молока с раствором щелочи переносят из флакона в плоскодонную колбу на 500 мл, флакои дважды ополаскивают небольшими порциями дистиллированной водырогаллола(по 10(вместомл) и добавляютпирогаллола10можномл этиловогоиспользоватьспирта аскорбиновуюи о мг пикислоту в том же количестве). Колбу с воздушным холодильником с веществом ставят в водяную баню и омыляют в течение 2—2,5 ч при 90—95° С. Дия Омен ного раствора характерны однородность жидкости темно-бурого ц та и запах мыла. После охлаждения в колбу с омыленным раствором добавляют 20 мл дистиллированной воды и 10 мл спирта. Экстрагирование и обезвоживание неомылnae.я. мой фракции. Для экстракции используют две eae Teepe BO; ронки. Сначала в колбу с омыленным раствором добавляют С. этилового эфира и осторожно смешивают, затем содержимое Е носят в первую делительную воронку, после чего колбу ополаск от неболышим количеством воды, которую сливают в ту же Boney Я‘y. Раствору дают отстояться в‘течение 3—5 мин, после ЕТО Пронская расслоение на верхний— эфирный в нижинй — щелочной бло pe неполном расслоении или появлении эмульсии в жидкость Aghapsnion дили10—15омыление,мл спирта,добавляютНижний слой30—40сливаютмл этиловогов колбу,эфира,в оонсмешивакпро’ a и выливают во вторую делительную воронку. После разделения слоев нижний сливают в колбу дляр омылени. тih верхний— в первую делительную воронку. Нижний слой затем экс трагируютВсе эфирныедваждыэкстрактыаналогичнымобъединяютобразом. в 1-й делительной. воронке и добавляют 50—70 мл дистиллированной воды, осторожно встряхивают и после отделения воды инжний слой сливают. Промывание экстракта водой повторяют 4—5 раз, пока последняя порция промывных вод не будет нейтральной (проба на фенолфталеин) Эфирный экстракт переливают в сухую колбу на 200 мл, в кото-
. 201
рую предварительно насыпают 15—20 г безводного сернокислого натрия. Делительную воронку ополаскивают. 10—15 мл эфира и тоже сливают в колбу. Эфирный экстракт оставляют в темном шкафу в колбе на 1—2 4, После этого его фильтруют в чистую колбу со шлиhom на 200 мл. Оставшийся на дне сернокислый натрий промывают трижды диэтиловым эфиром по 15 мл, ния Обезвоживаниеего через бумажныйэфирногофильтр,экстрактана которыйпроводятпомещаютпутемсернокислыйфильтрованатрий Последний по окончании фильтрования промывают трижды небольшими порииямн этилового эфира. Объем эфирного экстракта измеряют цилиндром. Учитывая, что в молоке, кроме витамина A, содержится каротин, а хроматография при анализе He применяется, обезвоженный эрирный экстракт делят на двое (в одной части определяют витамин А, в другой — каротин).
Колориметрическоеопределение витамина А в молоке » 2 млСухойхлороформаостаток (принеомыляемойопределениифракциивитаминабыстров молозиверастворяютберутв 2—1— 3гомл) и тщательно перемешивают. Микропипеткой берут 0,4 мл это10 ммраствора,и ставятпереносятее в колориметр.в сухую Затемкювету в соднурабочимкюветурасстояниемдобавляют 4 мл 23%-ного раствора треххлористой сурьмы в хлороформе, в другую — чистый хлороформ. ; Экстинкцию измеряют прн красном светофильтре (620 нм), через 5—10 с после добавления реактива. Каждое измерение проводят в двух-трех повторностях. По данным экстинкции находят концентрацию витамина А по калибровочной кривой и рассчитывают содержание витамина А в анализируемом образце по формуле a= х.И.0,3.1000 0,4.С 3 у где А — концентрация витамина А, мкг/л; x > количество витамина А, найденное по калибровочной кривой, ИЕ; С — масса навески, г; 0,3 — коэффициент для перевода HE в весовые единицы; 0,4 — количество хлороформиого экстракта, взятого для цветной реакции; У — общий объем хлороформного раствора неомыляемой фракции, мл; 1000 — коэффициент для пересчета на 1 кг молока. Колориметрическое определение каротина в молоке Сухой остаток исомылясмой фраки ТВ О IZ) a Tere aed после отгонки эфира определения каротина Kerr fo Gran pa для колориметрического стандартным О СРО a pany | pomona сравнивают со о 207 лориметре при синем светоормуле, приведенной в раз‘делеему OinenaraneКсопутствуют о пределенияличество каротина BREAPETRIEкаротинвычисляют3Лatinx азпо9 форм уле,(молM око, ипсчень),he if гдер у ротиноиды и другие примеси, проводят после 202
очистки с помощью хроматографии. Кели образец пе подвергался хроматографическому анализу перед определением витамина А (to Карр-Прайсу), его содержание рассматривают как суммарное количество витамина А и каротина. Количество каротина в молоке по отношению к витамииу А coставляет 30—45% и более, но каротии дает окраску с треххлористой сурьмой во много раз слабее, чем витамин А. ‘
Определение витамина А в печени
Содержание витамина А в печени рассматривается как показатель, отражающий степень обеспеченности организма этим витамиHOM. Количество витамина А в печени зависит от вида животных, их возраста, условий кормления и др. Например, в печени коров к копцу пастбищиного сезона содержится 14—20 mr% витамина A, зизапасмой приИдовлетворительном810 мгф, апоступленииand педостаткекаротинакаротинас кормомв рационеего снижается до 6—1,5 mr%. Печень новорожденных телят содержит 0,1—0,5 mr% витамина A. Ход определения. Среднюю пробу печени у жвачных животных (до 100 г) берут из одной и той же доли, тщательно измельчают или растирают в ступке. У птицы для анализа используют всю печень.К навеске 2—5 г гомогенизированного образца печени, взятой в колбу для омыления, добавляют 10 мл 60%-ного раствора КОН и 30 мл этилового спирта, 100 мг пирогаллола. Омыляют на водяной бане при 80°C в течение 1,5—2 4, периодически встряхивая колбу круговыми движениями. После омыления содержимое колбы охлаждают под струей воды до комнатной температуры. В колбу с омыленным раствором добавляют 50 мл эфира, осторожно смешивают н переносят в первую делительную воронку для экстракции. В дальнейшем анализ провоWIT так же, как при определении витамина А в молоке. Сухой остаток после отгона эфира растворяют в 3—5 мл хлороформа и колориметрируют. Если при колориметрировании окраска очень интенсивна, первоначальный хлороформный раствор разбавляют чистым хлороформом. В таком случае берут 1 мл испытуемого хлороформного раствора и к нему прибавляют 4—5—10 мл хлороформа, а при подсчете количества витамина А учитывают степень разведения, т.е. объем всего хлороформа, взятого на растворение сухого остатка.
Определение витамина А в сыворотке крови Содержание витамина А в сыворотке крови определяют колориметрическим или спектрофотометрическим методом. В колбу берут не менее 10 мл сыворотки крови, добавляют 10 мл этилового спирта, 3 мл 60%-ного раствора КОН и 100 мг, пирогаллола. Омыляют в течение 30 мин на водяной бане при 60°C, затем охлаждают. Экстрагируют серным эфиром один раз 30 мл, затем Сухой остаток после отгона эфира растворют в 1—2 мл хлоротри гы Вол. 4форма,мл растворазатем отбираюттреххлористой0,4 млсурьмыполученногои колоримерас т ворарируют.и добавляютСодержание витамина А в сыворотке крови рассчитывают, как и в молоке.
203
