В дальнейшем анализ проводят так же, как при определении витамина А в молоке. Сухой остаток иеомыляемой фракции после отгона эфира растворяют в 1—2 мл хлороформа и колориметрируютОпределение каротиноидов. Определение проводят с омылением пробы желтка и без него. В первом случае каротиноиды в яйце определяют одновременно ст в нем витамина А. Берут навеску массой 5—7 г. Омыление и извлечение неомыляемой фракции проводят, как при определении витамина А в яйцах. Обезвоженный эфирный экстракт делят пополам. Одну часть используют для определения витамина A другую — для ОВО ато полученный после отронки эфира, растворяют В 10— 15$ мл бензинау Б-70.у Полученныйй экстрактэк колориметрируютр ва фотоэлектроколориметре с синим светофильтром.Зная экстинкцию испытуемого раствора, по калибровочной кривой находят количество каротина в | мл раствора (мкг). Расчет содержания каротинондов в образце проводят по формуле:
х= EVER ,
G
rye х — количество каротина Bir навески, мкг; К — количество кавой;ротинаУ —в объем1 мл раствора,испытуемогонайденноераствора,по калибровочноймл; С — навеска,кри-г; 2 — пересчет на весь объем раствора (брали '/› часть). В основу определения каротинондов в яйце без омыления положен метод Г. Д. Дубровина с некоторым изменением (по Е. В. Щербакову). В центрифужную пробирку отвешивают 0,2 г желтка из средней пробы и добавляют 3 мл этилового спирта. Желток в спирте тщательно растирают стеклянной палочкой до появления однородной взвеси. Затем содержимое пробирки центрифугируют при 2500 об/мин в течение 5—7 мин, после чего спирт сливают. К осадку добавляют бензин, хорошо перемешивают той же палочкой и центрифугируют до выпадения плотного осадка. Полученный экстракт сливают в мерную пробирку и колориметрируют. Если осадок желтоватого оттенка, экстрагирование бензином повторяют, оберирование.порции экстракта объединяют, после чего проводят колориметСодержание каротиноидов в желтке вычисляют по формуле, приведенной выше.
Определение содержания витамина А в комбикорме, обогащенном этим витамином
Принцип определения тот же, что при определении витамина А в молоке с некоторыми особенностями при омылении и подготовке образца к экстрагированию неомыляемой фракции. Подготовка образца. Пробу комбикорма массой 400 г подвергают тщательному размолу, для чего ее дважды пропускают через мельницу и хорошо перемешивают. Ход анализа. Навеску размолотого комбикорма массой 10— 20 г (в зависимости от дозы внесенного в корм препарата витамина А) помещают в коническую колбу на 250 мл, добавляют 100 мг пиро-
галлола, 50—70 мл дистиллированной воды, перемешивают и добавляют затем 50—75 мл этилового спирта и 10—20 мл 60%-ного раствора КОН. Содержимое колбы осторожно помешивают, ‘продувают углекислым газом или азотом. (в колбыОмылениеставятпроводятнебольшиев течениеворонки,1—1,5заменяющие4 при температуреобратный холо-80°C дильник). Смесь периодически осторожно перемешивают встряхиванием. После омыления колбу с содержимым охлаждают под струей воды, затем добавляют 50 мл дистиллированной воды и 20 мл спирта. После этого колбы со смесью ставят на шуттель-аппарат на 10— 15 минут, наблюдая за качанием. Экстрагирование омыленного образца проводят 4 раза, используя первый раз 50 мл эфира, затем — по 40 мл. Для экстракции ис| пользуют две делительные воронки, а далее поступают, как указано при определении витамина А в молоке. Определение витамина А в премиксах Метод определения витамина А тот же, что и при определении Bтезбелок). Sone) Tiere,еречень 060)ранееудования,(предус м оа т ренериаловTY 59-49—72и еактивов ВНИИприве син - ден выше. Ниже а внимание in КОТА р. ведения данного анализа. Из средней пробы хорошо перемешанного премикса берут навеску массой 5 г, помешают в колбу на 200—250 мл для омыления, добавляют 50 мл 96% -ного этилового спирта и 50 мг пирогаллола. Содержимое перемешивают и ставят в кипящую водяную баню. ком)Омылениес моментапроводятначала вкипения.течение Смесь30 минпериодически(с обратным взбалтываютхолодильникруговыми движениями. После омыления содержимое колбы быстро охлаждают под струей воды до комнатной температуры. Для экстракции витамина А в колбу добавляют 50 мл эфира и хорошо взбалтывают. Содержимое колбы через воронку Шотта, используя водоструйный насос, переносят в делительную воронку на 500 мл, куда предварительно налито около 50 мл дистиллированной воды. Экстракцию неомыляемой фракции повторяют трижды порциями по 30 мл. мый Послеостатокотгонав колбеэфирабыстро(в токерастворяютуглекислогов хлороформегаза) сухойи неомыляе-переносят каждую порцию в мерную колбу на 100 мл. Объем доводят до метки хлороформом. Затем проводят колориметрирование или спектрофотометрирование.
Определение витамина А в препаратах, содержащих этот витамин (по А. А. Дмитровскому)
Витаминная промышленность выпускает жировые (масляные) концентраты витамина А, а также в сухой форме на декстриновой или белковой основе. Процесс количественного определения в них витамина А различен. Масляные концентраты сразу разбавляют хлороформом до требуемого объема, В | мл хлороформного раствора должно содержаться 15—80 ИЕ витамина А.
208
Сухие препараты подвергают омылению. Для этого п цолбу для омыления помешают точную навеску препарата массой около 100 мг (препарат с активностью 250—325 тыс. ИЕ в 1 г), добавляют около 100 мг пирогаллола, | мл горячей дистиллированной воды (65— 70°C)ного растворенияи осторожномикрогранул.круговыми движениямиЗатем добавляютперемешивают2 мл 60%до -иогополКОН и 25 мл этилового спирта и снова перемешивают. Колбу продувают азотом или углекислым газом, присоединяют к обратному | воздушному холодильнику и помещают в водяную баню при 90— 95°С на 20 мин, изредка осторожно помешивая содержимое. | Через 20 мин колбу отсоединяют от холодильника, охлаждают | под струей холодной воды, содержимое переносят в делительную воронку и проводят 4-кратную экстракцию серным эфиром (в первый раз берут 30 мл эфира, затем — по 20 мл). Дальнейший процесс анализа, как в предыдущих методиках. Определение рибофлавина в яйце
Принцип метода. Метод основан на способности растворов риpoem ПЕНЬ в Еее: EERO SAD (Uae ЕноЕ.ы В ме Sis ETC eee ОА вактивы. Стандартный основной раствор рибофлавина. Навеску 10 мг предварительно растертого в ступке рибофлавина переносят в мерную колбу на 250 мл и растворяют в дистиллированной воде. После полного растворения доводят BOOK = pees (1 мл раствора содержит 40 мкг рибофлавина). Раствор [SISOSустойчив OAв течениеLt) SSI,месяцаARERATETTпри храненииДи Оооона холоде NHв темнойАЕОСЕНЬпосуде. ВОР: ля РЯ I eT SEEONE ETERS TEN) [PEASE ELSE (Sную колбу на 100 мл и доводят дистиллированной водой до метки. ВЯ мл ВЕООЕЕВОВАСТВОВА SONG eI ЕКО рибоФлавина. Этиловый спирт 96 а бевдпонмесей альдегидов), Этиловый спирт 55%-ный (берут 57,3 мл 96 №-ного и добавляют дистиллированной воды до 100 мл). Сода двууглекислая (МаНСО;). Гидросульфит натрия (№ 225204). кая качалка;Приборвеосудаьцилиндрытуроммерные с притертой,етрасянаборомпробкой;BUBBA HOESцилиндрыLUTмер-ee ные на 50. мл; колбы мерные на 50, 100 и 250 мл; стаканчики с носиком на 50 мл; воронки; стеклянные палочки. Ход определения рибофлавина в желтке. Из тщательно размешанной средней пробы желточной массы переливают около 10 гв стаканчик с носиком. Стаканчик с желточной массой взвешивают. В цилиндр с притертой пробкой вносят 50 мл 55%-ного этанола. Из стаканчика в этанол тонкой струей (быстрое сливание массы приводит к образованию плотных сгустков, которые впоследствии плохо разбиваются) лыот около 5 г желточной массы. Стаканчик с остатком желточной массы взвешивают и по разности определяют массу навески. Цилиндр затем закрывают пробкой, встряхивают 2 мин вручную. При отсутствии цилиндров с притертыми пробками можно использовать конические колбы на 250 мл. В центр колбы берут навеску 5 г желточной массы (она не должна попадать на стенки и 14—938 209
