к. млдос aniделениями,Обетне доходящи-на Размеры7 пробок . 2 мл; сдвоенные колбы (рис. 6), a в об состоящие из двух стеклянных ФИ = - колбочек, соединенных между со- ом Lo | бой переходной трубкой; резино| ——— симостивые пробкиот №диаметра14 или 16отверстий(в зави- — | колб). Новые резиновые пробки j р следует прокипятить в 3%-ном | | растворе едкого натра, тщательно | Ss промыть проточяой, а затем 2— | coh $ 2 раза щиниировенном BOLE: р В процессе работы пробки моют $42 1, P42. | водопроводной, а. затем дистил- м, т | лированной водой. Вся посуда | N должна быть химнчески чистой и В сухой. | и 1 80 | Получение плазмы. В сухие 1250. |Pedal центрифужные пробирки вносят ae 4 at дыеантикоагулянт10 мл кровииз расчета2—3 каплина каж-свежептво р аиготовлениогогепарина, или 10%-ного1%-ного рас- определенияРис. 6. Сдвоенныерезервнойколбыщелоч-для твора трилона Б, или 20—30 мг ности крови. тщательно измельченного щавелевокислого калия. Затем вносят . около 1,5—2 мл вазелинового масла. Кровь берут из яремной вены, подслаивая ее под вазелиновое масло. После взятия крови пробирку быстро закрывают пробкой, осторожно несколько раз перемешивают и ставят в холодное место. В лаборатории пробирки открывают и немедленно центрифугируют 15—20 мин при 3000 об/мин. Плазму вместе с вазелиновым маслом отсасывают с помощью пипетки с резиновой грушей и переносят в сухую и чистую пробирку (масло должно покрывать плазму слоем около 1,5 см). Ход определения. Анализы проводят серийно. Каждая проба крови сопровождается двумя параллельными исследованиями и на серию опытов ставят 3—4 контроля. Подготовленные сдвоенные колбы нумеруют и закрывают пробками (пробки увлажняют дистиллироВАННОЙ ieee oo . В одну половину сдвоенной колбы вносят 2 мл 0,02 н. раствора ‘едкого натрия н плотно закрывают пробкой . 2. В смежную половину сдвоенной колбы вносят 0,5 мл плазмы Bea (es EDEEE ат Ню. rae 6 eT MEY у с плазмон пипеткой 6 широким отверствем быстро вносят 1 мл Senor раствора серной кислоты и немедленно. плотно АЕо Ceo ke On) врещательнымы. ApeТыCpSMH; сыешиваьгon плазму, , с кислотой i Boras стоять при комнатной температуре на4ч ce в i). Смешивание повторяют 3—4 раза. a р#4 canesabelаapes Sele затра: О рывают,
6, По истечении указанного времени (4 и и более) колбочки, где находится раствор шелочи, открывают, вносят в нее 1—2 капли раствора фенолфталенна и титруют 0,02 н. раствором серной кислоты дооченьобесцвенивания.резкий, н поэтомуПереходтитроватьот красногонужно осторожно,раствора к нобесцветномуглавное с одинаковой скоростью как в опыте, таки в контроле, Устанавливают количество 0,02 н. раствора серной киелоты, пошедшее на титрование опытных н контрольных образцов, По разниие гигрования контрольных м опытных образцов определяют количество 0,02 и. раствора едкого натрия, связанного с углекнелым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы. Расчет ведут по формуле: м (А— A,)-0,448. №06% СО: =————100 где А — количество 0,02 н. раствора серной0,5 кислоты, пошедшее на титрование контроля, мл; Ay — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшее на титрование исследуемого образца, мл; 0,5 — количество плазмы крови, взятое для анализа,елкогомл;натра0,448на —СО»коэффициентв условиях пересчетаданной реакции;0,09 н. 100раствора ” — коэффициенткрови перевода результатов анализа на 100 мл плазмы Пормальная ственных животныхвеличина46—66 резервнойоб%СО,. Резервнующелочностищелочностьдля сельскохозяй-плазмы кровиТ-110. можно определять с помощью лабораторного титратора
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ПО ДЕ ВААРДУ) Принция метода. Кальций из сыворотки крови осаждают щавелевокислым аммонием. Выпадающий в осадок щавелевокислый кальций после промывания растворяют в серной кислоте, при этом образуется сернокислый кальций и освобождается эквивалентное количерствоастворомщавелевоймарганцовокислогокислоты, которуюкалия.оттитровывают сантинормальным ный Реактивы и оборудование. Насыщенный (приблизительно 5%ка; 50%-ныйраствор щавелевокислогораствор серной кислоты;аммония 0,1х.ч.;н. 2%-ныйраствор растворКМпОц; аммна-0,01 н. раствор KMnO, готовят перед употреблением из 0,1 н. раствора); 0,01 н. раствор щавелевой кислоты (для проверки титра перманганата); центрифуга на 3000 об/мин; водяная баня; центрифужные пробирки (желательно с острым конусообразным дном); пипетки на 1и2 мл; микробюретка; стеклянные палочки; штатив. Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 2 мл дистиллированной воды. В ту же пробирку вносят 1 мл прозрачной сыворотки (она должна быть отделена от сгустка как можно быстрее и храниться в холодильнике). Перемешивают, ударяя пальцем по нижнему концу пробирки. Прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония и перемешивают, вращая пробирку между ладонями. Пробирки оставляют в штативе па 15—20 мин, периодически смешивая раствор путем вращения их между ладонями. Затем про228
бирки помещают в центрифугу и центрифугнруют 10—15 mu. На | дне пробирки остается белый осадок щавелевокислого кальция. Раствор над осадком сливают, опрокидывая пробирку, следят, магой.чтобы осадок ие сливался. Ее края вытирают фильтровальной бу| Затем в пробирку приливают 4 мл 2%-ного раствора аммнака, смывая стенки пробирки и взмучивая верхний слой осадка ee вращением между ладонями. Снова центрифугируют 10—15 мии. Далее жидкость сливают, вытирая фильтровальной бумагой края пробирки, снова приливают 4 мл 2%-ного аммиака н центрифугируют. (Цель промывания — удаление оставшейся над осадком жидкости, содержащей щавелезокислые соединения, которые могут завысить результат). Надосадочную жидкость сливают, как описано выше. После удаления аммнака к осадку приливают 2 мл 50%-ного раствора серной кислоты. Осадок размешивают стеклянной палочкой, пробирку (вместес палочкой) ставят в кипящую водяную баню на 2—3 мин, Горячий раствор титруют из микробюретки 0,01 н. раствором марганцовокислого калия до появления слабо-розового окрашивания, ие исчезающего в течение 1 мин. Одновременно ставят слепой ФИ (определяют количество кальция в реактивах и дистиллированной воде). Для этого в центрифужную пробирку вносят 3 мл дистиллированной воды и 0,5 мл щавелевокислого аммония, перемешивают, а далее поступают, как с исследуемой сывороткой. Расчет. Так как известно, что 1 мл 0,01 н. раствора KMnO,. соответствует 0,2 мг кальция, TO x, мг% = (т— п).К-0,2.100, где из — количество 0,01 н. раствора KMnO,, израсходованного на титрование испытуемой пробы, мл; п — количество 0,01 н. раствора KMnO,, израсходованного ка титрование слепого опыта, мл; К — поправка к титру КМпО‹; 100 — пересчет в мг%.
Комплексометрический метод определения кальция
вАенвородкокрове
Принцип метода. Мурексид в щелочной среде (рН 10—13) образует с ионами кальция комплексное соединеиие розового цвета. При титровании трилоном Б кальций образует с ним более стойкое комплексное соединение, освобождая индикатор, вследствие чего цвет раствора изменяется. Реактивы и посуда. 9 н. раствор едкого натрия (36 г едкого натрия растворяют в дистнллированной воде и после охлаждения доводят объем до 100 мл); индикатор мурексид— пурпурат аммония (его тщательно растирают с нитратом калия в отношении 1: 800); 0,005 н. раствор ЭДТА (двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, трилон Б, комплексон III). В мерной колбе na | л растворяют 0,9305 г вещества в 200 мл дистиллированной воды, затем подщелачивают 10%-ным едким натрием, лока раствор не станет вполне прозрачным и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор при хранении в полиэтиленовой посуде устойчив в течение двух месяцев (1 мл точного 0,005 H. рас229
