твора ЭДТА содержит 0,1 мг кальция); стандартный раствор углекислого кальция (2,497 г предварительно высушенного при 105—120°С СаСО; х.ч. берут в колбочку на 200 мл, добавляют 25—30 мл дистиллированной воды и порциями по 1—9 мл 1 н. НС до полного растворения вещества (идет около 50—55 мл HCl). 3aтем смесь нагревают до кипения, переносят в мерную колбу на 1 л и после охлаждения доводят водой до метки (1 мл стандартного раствора содержнт | мг кальция); этиловый спирт; аммиачный буферный раствор (2 г хлористого аммония х.ч. растворяют в дистиллированной воде, добавляют 10 мл 25%-ного раствора аммиака и доводят до 100 мл дистиллированной водой); индикатор кислый хром темно-синий (0,5 г индикатора растворяют в 50 мл аммиачного буферного раствора и доводят до 100 мл 96%-ным этнловым спиртом); химическне стаканы на 150— 200 мл; пипетки на 2 и 5 мл; бюретка на 100 мл; мик робюретка на 5 мл; мерные колбы емкостью 100, 1000 мл; ступка. Определение поправки к титру ЭДТА. Из основного стандартного раствора CaCO; готовят рабочий раствор путем разведения в 10 раз, при этом Е мл рабочего раствора содержит 0,1 мг кальция, что титОGyиспользуют1K Нимл раствора НОиндикаторЭДТА.делением— Длякислыйопределения1хромНИ ЭДТАтемно-синий.поправкина количе-к ствоСаСО:.ваннойХодмл определения.ЭДТА, пошедшееВ химическийна титрованиестакан берут| мл 48рабочегомл дистиллиро-раствора 0,4 мл 9водын. раствораи добавляютедкого2 натра.мл сывороткиДобавляюткрови.на Затемкончикеприливаютшпателя несколько сантиграммов индикатора мурекснда. ния Изизменениямикробюреткиокраскититруютраствора0,005OT розовогон. растворомдо фиолетовогоЭДТА до получе-цвета. Переход не очень яркий, поэтому для сравнения цвета ставят перетитрованную пробу или образец (контроль) со всеми реактивамн, но без сыворотки крови. Через несколько определений ставят новый контроль, так как его окраска изменяется. Расчет проводят по формуле ==—_ п.К.0,1.100 а ,
где х — содержаниево 0,005 н. кальцияраствора о.TA, пошедшеекрови, мгф;на титрование,п — количест-мл; К-— поправка к титру ЭДТА; 0,1—1 мл 0,005 н. раствора ЭДТА эквивалентен 0,1 мг кальция; а — количество сыворотки крови, взятой на анализ, мл; 100 перевод в мг%.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ПО Р. Я. ЮДЕЛЕВИЧУ)
Принцип метода. Фосфаты безбелкового фильтрата крови nan сыворотки крови при взаимодействии с молибденовокислым аммониeM образуют комплексное соединение, которое в результате восстамолибденовую синь. Интенсивность образующейся при этом окраски 230
пропорциональна количеству неорганического фосфора в растворе. Определяя в колориметре интейсивность окраски испытуемого и стандартного раствора фосфора, находят количество миллиграммов неорганического фосфора. Реактивы. 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; 5% -ный раствор молибденовокислого аммония (25 г молибденовокислого аммония растворяют в 300 мл ди стиллированной воды ин фильтруют в мерную колбу Ha 500 мл, куда осторожно добавляют 75 мл концентрированной серной кислоты и после охлаждения доводят дистиллированной водой до метки); содово-сернистый раствор (100 мл 20%-ного раствора углекислого натрия соединяют с 25 мл 15%-ного раствора сернистокислого натрия и фильтругот). Раствор нестоек, и его готовят только перед употреблением. Растворы углекислого и сернистокислого натрия готовят раздельно из сухих безводных солей; 1ф-ный раствор гидрохинона (к 100 мл раствора гидрохинона прибавляют одну каплю коицентрированной серной кислоты); раствор должен быть почти бесцветным; при хранении может приобрести желто-коричневый цвет, и тогда его использовать нельзя; хранится в темной склянке; основной стандартный 57. Использование реактивов при постановке цветной реакции
| SENS т | И а Испытуемая ithe ам НЕ) Рабочий Фен стандартный СЭ |
|---|---|
| В пробирки с делениями на 10 мл берут:| р прозрачный центрифуга (фильтрат)_ | . рабочий стандартный рас- твор фосфора с содержа- рр Opa в | мл 0,01 мг фос- 20 ный раствор трихлор- уксусной кислоты дистиллированная вода молибденовокислый аммо- ний | Е 15 " - _ роз 5 5 — По 0,5 До объема 3 До объема 3 0,5 По 0,5 . ПОТ ЕО |
| NORTE: | 05 По 0,5 oF |
| содово-сернистый рас- твор * | Пробирки встряхивают, жид- кость 10 мин синеет, оставляют на 1,5 По 1,5 Пробирки осторожно встряхи- — |
| ее . из пробирки). | в ется |
раствор фосфора (2,197 г х.ч. KHyPO,, предварительно высушенного в эксикаторе над серной кислотой до постоянной массы, растворяют в мерной колбе на 500 мл и доливают дистиллированной водой до метки). К готовому раствору прибавляют 5 мл хлороформа. В | мл стандартного раствора содержится | мг фосфора. Перед употреблением готовят рабочий стандартный раствор путем разведения основного раствора фосфора в 100 раз. 1 мл рабочего стандартного раствора содержит 0,01 мг фосфора. Посуда и оборудование. Центрифуга; градуированные пробирки с метками 10 мл; центрифужные пробирки; градуированные пипетки на |1, 2и 5 мл; бюретки; фотоэлектроколориметры ФЭК-М или ФЭК-56 (можно использовать и другие виды колориметров типа KOHцентрациовногоХод опредления.колориметраОсаждениеКОЛ-1М).белков. Из бюретки в цевтрифужные пробирки наливают по 3 мл дистиллированной воды. Сюда же пипеткой приливают по | мл сыворотки крови. Затем приливают по | мл 204ф-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Тщательно перемешивают содержимое стеклянной палочкой. В результате белки осаждаются. Оставляют в покое на 5 мин, затем цеитрифугируют 15—20 мин (можно фильтровать через беззольный фильтр). Фильтрат должен быть совершенно бесцветен и прозрачен. Цветная реакция. Реакцию проводят одновременно с центрифугатом (фильтратом) и стандартным раствором (табл. 57). После того как прошла реакция восстановления (прекратилось выделение пузырьков ааа из бюретки в пробирку доливают дибичомJ li иb общийit объем составил 10 мл. Содер-дер Одновременно проводят контрольную пробу, в которую вместо испытуемого фильтрата берут дистиллированную воду, все реактивы берут в тех же количествах и доводят дистиллированной водой до 10 мл. ре противЧерез 10контролямин пробына реактивы,колориметрируютприменяянакрасныйфотоэлектроколоримет-светофильтр, B кюветах толщиной 10 MM, используя правый барабан. Все пробы должны быть параллельные. чета НИПри оп еделенииоocpopa мына отоэлектроколориметрет ЕЕ eenдля raрасровочную кривую. Для ее построения ставят серию определений, в которых кровь заменена рабочим стандартным раствором фосфора. В ряд пробирок с меткой на уровне объема 10 мл ставят нветную реакцию CO стандартным раствором и одновременно контрольную пробу по следующей ‘схеме (табл. 58). Содержимое пробирок смешивают и колориметрируют. При построении калибровочного графика на лист миллиметровой бумаги наносят дне прямоугольные оси координат, На осн абсцисс откладываютфотоэлектроколориметра.концентрацию фосфораШкалу (мг),периодическина оси ординатпроверяют,— показанияДля повышения точности анализа рекоменлустся на каждую серню определений готовить 3 стандартных раствора. Содержание неорганического фосфора находят по формуле:
Pea. С.100
Vv
где х — содержание неорганического фосфора, мг%; С — концентра232
