6, По истечении указанного времени (4 и и более) колбочки, где находится раствор шелочи, открывают, вносят в нее 1—2 капли раствора фенолфталенна и титруют 0,02 н. раствором серной кислоты дооченьобесцвенивания.резкий, н поэтомуПереходтитроватьот красногонужно осторожно,раствора к нобесцветномуглавное с одинаковой скоростью как в опыте, таки в контроле, Устанавливают количество 0,02 н. раствора серной киелоты, пошедшее на титрование опытных н контрольных образцов, По разниие гигрования контрольных м опытных образцов определяют количество 0,02 и. раствора едкого натрия, связанного с углекнелым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы. Расчет ведут по формуле: м (А— A,)-0,448. №06% СО: =————100 где А — количество 0,02 н. раствора серной0,5 кислоты, пошедшее на титрование контроля, мл; Ay — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшее на титрование исследуемого образца, мл; 0,5 — количество плазмы крови, взятое для анализа,елкогомл;натра0,448на —СО»коэффициентв условиях пересчетаданной реакции;0,09 н. 100раствора ” — коэффициенткрови перевода результатов анализа на 100 мл плазмы Пормальная ственных животныхвеличина46—66 резервнойоб%СО,. Резервнующелочностищелочностьдля сельскохозяй-плазмы кровиТ-110. можно определять с помощью лабораторного титратора
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ПО ДЕ ВААРДУ) Принция метода. Кальций из сыворотки крови осаждают щавелевокислым аммонием. Выпадающий в осадок щавелевокислый кальций после промывания растворяют в серной кислоте, при этом образуется сернокислый кальций и освобождается эквивалентное количерствоастворомщавелевоймарганцовокислогокислоты, которуюкалия.оттитровывают сантинормальным ный Реактивы и оборудование. Насыщенный (приблизительно 5%ка; 50%-ныйраствор щавелевокислогораствор серной кислоты;аммония 0,1х.ч.;н. 2%-ныйраствор растворКМпОц; аммна-0,01 н. раствор KMnO, готовят перед употреблением из 0,1 н. раствора); 0,01 н. раствор щавелевой кислоты (для проверки титра перманганата); центрифуга на 3000 об/мин; водяная баня; центрифужные пробирки (желательно с острым конусообразным дном); пипетки на 1и2 мл; микробюретка; стеклянные палочки; штатив. Ход определения. В центрифужную пробирку наливают 2 мл дистиллированной воды. В ту же пробирку вносят 1 мл прозрачной сыворотки (она должна быть отделена от сгустка как можно быстрее и храниться в холодильнике). Перемешивают, ударяя пальцем по нижнему концу пробирки. Прибавляют 0,5 мл насыщенного раствора щавелевокислого аммония и перемешивают, вращая пробирку между ладонями. Пробирки оставляют в штативе па 15—20 мин, периодически смешивая раствор путем вращения их между ладонями. Затем про228
бирки помещают в центрифугу и центрифугнруют 10—15 mu. На | дне пробирки остается белый осадок щавелевокислого кальция. Раствор над осадком сливают, опрокидывая пробирку, следят, магой.чтобы осадок ие сливался. Ее края вытирают фильтровальной бу| Затем в пробирку приливают 4 мл 2%-ного раствора аммнака, смывая стенки пробирки и взмучивая верхний слой осадка ee вращением между ладонями. Снова центрифугируют 10—15 мии. Далее жидкость сливают, вытирая фильтровальной бумагой края пробирки, снова приливают 4 мл 2%-ного аммиака н центрифугируют. (Цель промывания — удаление оставшейся над осадком жидкости, содержащей щавелезокислые соединения, которые могут завысить результат). Надосадочную жидкость сливают, как описано выше. После удаления аммнака к осадку приливают 2 мл 50%-ного раствора серной кислоты. Осадок размешивают стеклянной палочкой, пробирку (вместес палочкой) ставят в кипящую водяную баню на 2—3 мин, Горячий раствор титруют из микробюретки 0,01 н. раствором марганцовокислого калия до появления слабо-розового окрашивания, ие исчезающего в течение 1 мин. Одновременно ставят слепой ФИ (определяют количество кальция в реактивах и дистиллированной воде). Для этого в центрифужную пробирку вносят 3 мл дистиллированной воды и 0,5 мл щавелевокислого аммония, перемешивают, а далее поступают, как с исследуемой сывороткой. Расчет. Так как известно, что 1 мл 0,01 н. раствора KMnO,. соответствует 0,2 мг кальция, TO x, мг% = (т— п).К-0,2.100, где из — количество 0,01 н. раствора KMnO,, израсходованного на титрование испытуемой пробы, мл; п — количество 0,01 н. раствора KMnO,, израсходованного ка титрование слепого опыта, мл; К — поправка к титру КМпО‹; 100 — пересчет в мг%.
Комплексометрический метод определения кальция
вАенвородкокрове
Принцип метода. Мурексид в щелочной среде (рН 10—13) образует с ионами кальция комплексное соединеиие розового цвета. При титровании трилоном Б кальций образует с ним более стойкое комплексное соединение, освобождая индикатор, вследствие чего цвет раствора изменяется. Реактивы и посуда. 9 н. раствор едкого натрия (36 г едкого натрия растворяют в дистнллированной воде и после охлаждения доводят объем до 100 мл); индикатор мурексид— пурпурат аммония (его тщательно растирают с нитратом калия в отношении 1: 800); 0,005 н. раствор ЭДТА (двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, трилон Б, комплексон III). В мерной колбе na | л растворяют 0,9305 г вещества в 200 мл дистиллированной воды, затем подщелачивают 10%-ным едким натрием, лока раствор не станет вполне прозрачным и доводят дистиллированной водой до метки. Раствор при хранении в полиэтиленовой посуде устойчив в течение двух месяцев (1 мл точного 0,005 H. рас229
твора ЭДТА содержит 0,1 мг кальция); стандартный раствор углекислого кальция (2,497 г предварительно высушенного при 105—120°С СаСО; х.ч. берут в колбочку на 200 мл, добавляют 25—30 мл дистиллированной воды и порциями по 1—9 мл 1 н. НС до полного растворения вещества (идет около 50—55 мл HCl). 3aтем смесь нагревают до кипения, переносят в мерную колбу на 1 л и после охлаждения доводят водой до метки (1 мл стандартного раствора содержнт | мг кальция); этиловый спирт; аммиачный буферный раствор (2 г хлористого аммония х.ч. растворяют в дистиллированной воде, добавляют 10 мл 25%-ного раствора аммиака и доводят до 100 мл дистиллированной водой); индикатор кислый хром темно-синий (0,5 г индикатора растворяют в 50 мл аммиачного буферного раствора и доводят до 100 мл 96%-ным этнловым спиртом); химическне стаканы на 150— 200 мл; пипетки на 2 и 5 мл; бюретка на 100 мл; мик робюретка на 5 мл; мерные колбы емкостью 100, 1000 мл; ступка. Определение поправки к титру ЭДТА. Из основного стандартного раствора CaCO; готовят рабочий раствор путем разведения в 10 раз, при этом Е мл рабочего раствора содержит 0,1 мг кальция, что титОGyиспользуют1K Нимл раствора НОиндикаторЭДТА.делением— Длякислыйопределения1хромНИ ЭДТАтемно-синий.поправкина количе-к ствоСаСО:.ваннойХодмл определения.ЭДТА, пошедшееВ химическийна титрованиестакан берут| мл 48рабочегомл дистиллиро-раствора 0,4 мл 9водын. раствораи добавляютедкого2 натра.мл сывороткиДобавляюткрови.на Затемкончикеприливаютшпателя несколько сантиграммов индикатора мурекснда. ния Изизменениямикробюреткиокраскититруютраствора0,005OT розовогон. растворомдо фиолетовогоЭДТА до получе-цвета. Переход не очень яркий, поэтому для сравнения цвета ставят перетитрованную пробу или образец (контроль) со всеми реактивамн, но без сыворотки крови. Через несколько определений ставят новый контроль, так как его окраска изменяется. Расчет проводят по формуле ==—_ п.К.0,1.100 а ,
где х — содержаниево 0,005 н. кальцияраствора о.TA, пошедшеекрови, мгф;на титрование,п — количест-мл; К-— поправка к титру ЭДТА; 0,1—1 мл 0,005 н. раствора ЭДТА эквивалентен 0,1 мг кальция; а — количество сыворотки крови, взятой на анализ, мл; 100 перевод в мг%.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (ПО Р. Я. ЮДЕЛЕВИЧУ)
Принцип метода. Фосфаты безбелкового фильтрата крови nan сыворотки крови при взаимодействии с молибденовокислым аммониeM образуют комплексное соединение, которое в результате восстамолибденовую синь. Интенсивность образующейся при этом окраски 230
