пропорциональна количеству неорганического фосфора в растворе. Определяя в колориметре интейсивность окраски испытуемого и стандартного раствора фосфора, находят количество миллиграммов неорганического фосфора. Реактивы. 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; 5% -ный раствор молибденовокислого аммония (25 г молибденовокислого аммония растворяют в 300 мл ди стиллированной воды ин фильтруют в мерную колбу Ha 500 мл, куда осторожно добавляют 75 мл концентрированной серной кислоты и после охлаждения доводят дистиллированной водой до метки); содово-сернистый раствор (100 мл 20%-ного раствора углекислого натрия соединяют с 25 мл 15%-ного раствора сернистокислого натрия и фильтругот). Раствор нестоек, и его готовят только перед употреблением. Растворы углекислого и сернистокислого натрия готовят раздельно из сухих безводных солей; 1ф-ный раствор гидрохинона (к 100 мл раствора гидрохинона прибавляют одну каплю коицентрированной серной кислоты); раствор должен быть почти бесцветным; при хранении может приобрести желто-коричневый цвет, и тогда его использовать нельзя; хранится в темной склянке; основной стандартный 57. Использование реактивов при постановке цветной реакции
| SENS т | И а Испытуемая ithe ам НЕ) Рабочий Фен стандартный СЭ |
|---|---|
| В пробирки с делениями на 10 мл берут:| р прозрачный центрифуга (фильтрат)_ | . рабочий стандартный рас- твор фосфора с содержа- рр Opa в | мл 0,01 мг фос- 20 ный раствор трихлор- уксусной кислоты дистиллированная вода молибденовокислый аммо- ний | Е 15 " - _ роз 5 5 — По 0,5 До объема 3 До объема 3 0,5 По 0,5 . ПОТ ЕО |
| NORTE: | 05 По 0,5 oF |
| содово-сернистый рас- твор * | Пробирки встряхивают, жид- кость 10 мин синеет, оставляют на 1,5 По 1,5 Пробирки осторожно встряхи- — |
| ее . из пробирки). | в ется |
раствор фосфора (2,197 г х.ч. KHyPO,, предварительно высушенного в эксикаторе над серной кислотой до постоянной массы, растворяют в мерной колбе на 500 мл и доливают дистиллированной водой до метки). К готовому раствору прибавляют 5 мл хлороформа. В | мл стандартного раствора содержится | мг фосфора. Перед употреблением готовят рабочий стандартный раствор путем разведения основного раствора фосфора в 100 раз. 1 мл рабочего стандартного раствора содержит 0,01 мг фосфора. Посуда и оборудование. Центрифуга; градуированные пробирки с метками 10 мл; центрифужные пробирки; градуированные пипетки на |1, 2и 5 мл; бюретки; фотоэлектроколориметры ФЭК-М или ФЭК-56 (можно использовать и другие виды колориметров типа KOHцентрациовногоХод опредления.колориметраОсаждениеКОЛ-1М).белков. Из бюретки в цевтрифужные пробирки наливают по 3 мл дистиллированной воды. Сюда же пипеткой приливают по | мл сыворотки крови. Затем приливают по | мл 204ф-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Тщательно перемешивают содержимое стеклянной палочкой. В результате белки осаждаются. Оставляют в покое на 5 мин, затем цеитрифугируют 15—20 мин (можно фильтровать через беззольный фильтр). Фильтрат должен быть совершенно бесцветен и прозрачен. Цветная реакция. Реакцию проводят одновременно с центрифугатом (фильтратом) и стандартным раствором (табл. 57). После того как прошла реакция восстановления (прекратилось выделение пузырьков ааа из бюретки в пробирку доливают дибичомJ li иb общийit объем составил 10 мл. Содер-дер Одновременно проводят контрольную пробу, в которую вместо испытуемого фильтрата берут дистиллированную воду, все реактивы берут в тех же количествах и доводят дистиллированной водой до 10 мл. ре противЧерез 10контролямин пробына реактивы,колориметрируютприменяянакрасныйфотоэлектроколоримет-светофильтр, B кюветах толщиной 10 MM, используя правый барабан. Все пробы должны быть параллельные. чета НИПри оп еделенииоocpopa мына отоэлектроколориметрет ЕЕ eenдля raрасровочную кривую. Для ее построения ставят серию определений, в которых кровь заменена рабочим стандартным раствором фосфора. В ряд пробирок с меткой на уровне объема 10 мл ставят нветную реакцию CO стандартным раствором и одновременно контрольную пробу по следующей ‘схеме (табл. 58). Содержимое пробирок смешивают и колориметрируют. При построении калибровочного графика на лист миллиметровой бумаги наносят дне прямоугольные оси координат, На осн абсцисс откладываютфотоэлектроколориметра.концентрацию фосфораШкалу (мг),периодическина оси ординатпроверяют,— показанияДля повышения точности анализа рекоменлустся на каждую серню определений готовить 3 стандартных раствора. Содержание неорганического фосфора находят по формуле:
Pea. С.100
Vv
где х — содержание неорганического фосфора, мг%; С — концентра232
ция фосфора, определенная по калибровочной кривой в соответствии с показаниями фотоэлектроколориметра, МГ; у = объем сыворотки ‘в нентрифугате, взятом для цветной реакиии (в 1,5 мл центрифугата содержится 0,3 мл сыворотки); 100— пересчет данных в мг%.
| 58. Схема внесения реактивов в пробирки со стандартным раствором фосфора 7 Se Eee 00 К eee Пробирки Растворы, мл раст я as a el a т | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| : | | _ | | d | | 4 | | Al | | = | ||
| | Oe) | О | Е | |||||
| Рабочий фосфора | стандартный раствор (в 1 мл 0,01 мг) | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | 2,5 | 3,0 |
| Дистиллированная вода | 2,5 | 2,0 | 1,5 | 1,0 | 0,5 | — | |
| Молибденовокиелый аммоний | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Пробирки | встряхивают | ||||||
| Гидрохинон | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Пробирки | встряхивают | ||||||
| Содово-сернистый раствор | 1,5 | 5 | 1,5 | 15 | 15 | 15 | |
| Fat НЕЕ CETTE р | EES вода фосфора в 10 мл ра, мг | 0,005 По | робиркь 4,5 0,010 мл | осторожно в 0,015 | каждую | у встряхи- пробирку 0,0200,025 | у 0,030 |
При использовании колориметров типа КОЛ-1М или Дюбоско содержание неорганического фосфора находят по формуле: С.Н, -100 хе" Н..0,3 ? ERCте — COAGЗы DayaHHeеннеорганического> фосфора,. мг%; С — содержание а в STRAP THOM растворе, использованном при колор ни ( и CARR BRTHOLO раствора содержит 0,01 мг aeemope), мг; о слоя стандартного раствора по Е. и 2-~ толщина слоя испытуемого раса ра : 100. ore Аи СВОИ В которой определялся п И ое а паев. eae ees А Se В крови даже при отсутствии гемолит RNS EERE: = ч может нарастать органическая кислотоTPOBSADрастаоримая REY Е|6 братное заявление:счет неорганическогоорганический кислотораствфосфора. П о римыйзднее фосфор. подвергается гидролизу с образованием неорганического фара (в темолизированноя крови гидролиз совершается сразу н весьма интенсивно). Поэтому при взятии крови для определения фосфора необходимо не допускать. гемолиза, а определение проводить непосредственно после взятия крови,
