Определение неорганического фосфора с ванадат-молибдатнымв безбелковом фильтратереактивомкрови
Принцип метола. В безбелковом фильтрате фосфор с ванадатмолибдатным реактивом дает лимонно-желтое окрашивание. При концентрации 1—20 мг/л интенсивность окраски пропорциональна содержанию фосфора, Интенсивность полученного окрашивания замеряется на сисктрофотометре или фотоэлектроколориметре Реактивы. 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; концентTeeрировапная Saсерная кислота;100 т eeeрастворВ молибдата500 a водыаммония О(готовятдо 50°ванной С); после охлаждения осторожно приливают 100 мл концентриробу, у долнваютсернойдистиллированнойкислоты, спова охлаждают,водой до1 переносятa: растворв ванадатамерную кол-аммония (2,5< г ванадата. аммония йрастворяют} = в 500 мл кипящейoe дистиллированной воды; кипячение продолжают до тех пор, пока раствор ие окрасится в желтый цвет; после охлаждения раствор переносят в мерную колбу и доливают дистиллированной водой до 1 a; реактив стоек); реактиз na фосфор (готовят путем смешивания растворов молибдата и ванадата аммония в равных объемах; пригоден в течение двух месяцев); стандартный раствор фосфора (2,1940 г однозамещенного фосфата калия, высушенного в эксикаторе над концентрированной серной кислотой до постоянной массы, растворяют B мерной колбе на 500 мл, доводят до метки дистиллированной водой; к готовому раствору ИО 2,5 мл хлороформа). В 1 Ma раствора содержится 1 мг фосфора. Перед употреблением готовят рабочнй стандартный раствор фосфора путем разбавления в 50 awl мл раствора переносят в мерную колбочку на 50 мл и О OBARHGG водой доводят до метки) 1 мл рабочего стандарто а а содержит 20 мкг фосфора у ОР посуда Фотоэлектроколориметр; центрифуга; центрифужные пробирки; НЕО ПОНЕС нагревательный прибор; eye сикатор; термос сольдом у у Xon ны Кровь сразу после взятия осаждают равным объемом охлажденной 20% oil трихлоруксусной кислоты, перемеSTEREO ОЕНЕС К ЕР и помещают в термос со льдом Затем в лаборатории центрифугируют 20 мин при 2000 об/мин Центрифугат сливают в пробирки: он должен быть прозрачным (без: белковый фильтрат можно хранить в холодильнике в течение суток) ВУ Е центрифужные пробирки берут по 0,5 мл ненрифугата т АХ = See GEREN On Ti Fe OD cam реактива re фосфор, пе ТИ ta р стоять в течение 9 ч Центрифугируют mpi 1500. об/мни НИИ г т Фотометрию лучше проводить при длние волиы 436 им (фнолетовый светофильтр) в кювете 10 мм против контроля (2 мл диетиллированной водыды и 2 мл4 реактиваа а наKe фосфор)а В крайнем случае фотометрировать можно, используя синий светофильтр с максимумом пропускания 450—460 им ЕН PASH ROGEMAGE кривой. Берут 0.5: 10: 15 и 90 мл рабочего стандартного раствора, доводят объем до 2 мл дистиллированной водой, добавляют по 2 мл реактнва на фосфор, а далее поступают, как с испытуемыми растворами РасчетXSLpms CONSр CUE я WasSoaв ническогор irфосфорфосфора в крови! проводятoe
234
УВ ] ing Ром> 1000 ‚
где П — количество фосфора по калибровочному графику, мкг; 4 — разведение пробы крови; 100 — пересчет на 100 мл; 1000— пересчет мкг% в мг%.
МЕТОДЫ ОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЧИ Исследованию мочи животных придается большое значение, тах a att) BEM ERS AIO ИЕgi ke CE OBCTE) tN SLT NOTIONS a te CTEM,ООЗУЖЫАЕОТНЫНЧЕИОжелудочно-кишечногоФУНКЦИЙтракта,мочеполовой,но и нарушенияСердечнообменаSeen)веществ,Cr $вязанныес a с‘ atнепра ныHae peneмлеBenen2М, ., 2 целью контроля Ще обменных процессов в организме fiat ie их веществ ДИН И ох тел, Села УрО т оч Zur утро i netanee 9 зуют свежесобранy On ee atten ЧИ (pH) Se ых on ut pee HHS р у В. mM Beas Bu WE сущи свои днапазоны колебания РН. мочи (у коров 7,7—8,6; телят 70 та лошадей 7,2—8,7; BOB 8—8, >; свиней 6,5 7,8). . сакция мочи у животных может быть более кислой при ацидо1, что может быть вызвано скармливанием больших количеств концентратов ни других кормов, реакция золы которых кислая. Имеются указания, что у животных с простым желудком скармливание большого количества кормов, содержащих щавелевую кислоry и ее соли (свекольная ботва, некоторые сорта свеклы и др.), способствует позиикиовению ацидоза и вызывает снижение рН мочи. У жилчных животных щавелевая кислота и ее соли под влиянием деятельности микрофлоры рубца всасываются в виде солей щелочных металлов. В результате последующего их расщепления создается избыток щелочей, выводимых с мочой, рН которой повышается. Аналогичные результаты могут быть получены при скармливании больших количеств силоса (поступление в организм большого количества кислот, особенно уксусной). Это может быть причиной ухудшения всасывания кальция. Несмотря на достаточное его количество в рационе, животным приходится давать кальциевую минеральную подкормку. При нормальной концентрации водородных ионов в моче и избытке кальция в рационе следует применять фосфорные полкормки, например фосфорно-натриевые соли. Реакцию мочи определяют сразу после взятия образца, так как при стоянии из-за образования карбоната аммония она ощелачивам р и а nat Оee ans мусовон оумагон. в J У ума , :- ной мочой, указывает на ее кислую реакцию, а посинение красной бумажкиА — изй шелочную.ь. Нейтральнаяity моча не меняет цвета ни си = ней, ии красной лакмусовой бумаги. В случае изменения цвета и красной, и синей бумажек— реакция мочи амфотерная. Лучше опто вы и, ато аа fan, ЭТОМ ун д д рную бумагу у. iC сравнивают полученную окраску с цветной шкалой, приложенной к poyвеличиие‘активнойpH.бумаге.Более Определенныйточно pH определяютцвет соответствуетс помощью рН-метра.определенной
235
Определение ацетоновых (кетоновых) тел в моче стическийАнализ мочи на содержание кетоновых тел — хорощий диагнотоза,бенно частов условияхпоказательвстречающегосяпромышленныхдля выявленияу высокопродуктивныхкомплексов.начальных стадийживотных,развитияосо-кепод Ацетон,общим названиемацетоуксусную— ацетоновыеи В-оксимасляную(кетоновые) кислотутела. Ониобъединяютпредставляют собой промежуточные продукты обмена жиров, белков н углеводов. К кетогенным веществам относят жиры и некоторые аминокислотыновное антикетогенное(лейцин, нзолейцин,вещество.тирозин,Подобнымифенилаланин).свойствамиГлюкозаобладают— осглицерин, глюконовая, яблочная, яптариая, лимонная и другие кислоты, принимающие участие в цикле Кребса. Кроме того, антикетотеннымилин, метионинсвойствамии др.). обладают липотропные кормовые факторы (хо-
Кетоновые тела, образующиеся в организме здоровых животных, окисляются. Часть их может ресинтезироваться в высшие жирные кислоты (качественные реакции в моче их He обнаруживают). При дефиците углеводов в организме уснлнвается образование кетоновых тел в печени и тормозится HX окисление, а количество их в моче возрастает. Увеличение кетоновых тел в моче (кетонурия) у животных отмечают при несбалансированном, неполноценном кормлении, особенно при высоком его уровне (у высокопродуктивных коров), при скармливании большого количества силоса, кислого жома и других кормов, содержащих избыточное количество масляной и уксусной кислот, избыточном скармливании концентратов и недостаточном количестве в рационе легкорастворимых углеводов. Кетопурию отмечают при голодании, в пик лактации, при родильном парезе и других заболеваниях. Увеличение кетоновых тел может отмечаться при высокой концентрации в крови аммонийных солей. В этом случае аммиак тормозит окисление пировиноградной кислоты и ацетилкофермента А (прерывается цикл Кребса). Отмечено, что в моче здоровых коров содержится 9—10 мг% кетоновых тел, в моче больных животных до 200—300 mr%. Предлагаемые ниже методики определения наличия ацетоновых тел в моче иства.молоке могут быть выполнены непосредственно в условиях хозяй-
Проба Лестраде. Реактивы ин посуда. Реактив Лестраде: 1 часть нитропруссида натрия растирают в ступке, затем добавляют 20 частей аммония сернокислого и 20 частей безводного карбоната натрия и тщательно растирают, Реактив хранят в темной склянке в сухом месте. В процессе хранения он теряет свою активность, поэтому готовить его на длительный срок не следует. Кафельная белая палитра или белая фарфоровая чашечка (можно использовать обычное предметное стекло, помещенное на белый лист бумаги). Ход определения. На палитру, чашечку или стекло наноear около 0,2 г реактива и капают на него 2—3 капли мочи. Появление через 0,5—1] мин розовой и темно-фиолетовой окраски свидетельствует о наличии в моче ацетоновых тел (ацетона и ацетоуксусной кислоты). Слабое окрашивание смеси в розовый с сиреневым оттенком цвет означает наличие анетопа ие менее 10 мг %, появление темно-фиолетового цвета свидетельствует о наличии ацетона свыше 100 мг %.
