Справочник по контролю кормления и содержания животных

раствор фосфора (2,197 г х.ч. KHyPO,, предварительно высушенного в эксикаторе над серной кислотой до постоянной массы, растворяют в мерной колбе на 500 мл и доливают дистиллированной водой до метки). К готовому раствору прибавляют 5 мл хлороформа. В | мл стандартного раствора содержится | мг фосфора. Перед употреблением готовят рабочий стандартный раствор путем разведения основного раствора фосфора в 100 раз. 1 мл рабочего стандартного раствора содержит 0,01 мг фосфора. Посуда и оборудование. Центрифуга; градуированные пробирки с метками 10 мл; центрифужные пробирки; градуированные пипетки на |1, 2и 5 мл; бюретки; фотоэлектроколориметры ФЭК-М или ФЭК-56 (можно использовать и другие виды колориметров типа KOHцентрациовногоХод опредления.колориметраОсаждениеКОЛ-1М).белков. Из бюретки в цевтрифужные пробирки наливают по 3 мл дистиллированной воды. Сюда же пипеткой приливают по | мл сыворотки крови. Затем приливают по | мл 204ф-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Тщательно перемешивают содержимое стеклянной палочкой. В результате белки осаждаются. Оставляют в покое на 5 мин, затем цеитрифугируют 15—20 мин (можно фильтровать через беззольный фильтр). Фильтрат должен быть совершенно бесцветен и прозрачен. Цветная реакция. Реакцию проводят одновременно с центрифугатом (фильтратом) и стандартным раствором (табл. 57). После того как прошла реакция восстановления (прекратилось выделение пузырьков ааа из бюретки в пробирку доливают дибичомJ li иb общийit объем составил 10 мл. Содер-дер Одновременно проводят контрольную пробу, в которую вместо испытуемого фильтрата берут дистиллированную воду, все реактивы берут в тех же количествах и доводят дистиллированной водой до 10 мл. ре противЧерез 10контролямин пробына реактивы,колориметрируютприменяянакрасныйфотоэлектроколоримет-светофильтр, B кюветах толщиной 10 MM, используя правый барабан. Все пробы должны быть параллельные. чета НИПри оп еделенииоocpopa мына отоэлектроколориметрет ЕЕ eenдля raрасровочную кривую. Для ее построения ставят серию определений, в которых кровь заменена рабочим стандартным раствором фосфора. В ряд пробирок с меткой на уровне объема 10 мл ставят нветную реакцию CO стандартным раствором и одновременно контрольную пробу по следующей ‘схеме (табл. 58). Содержимое пробирок смешивают и колориметрируют. При построении калибровочного графика на лист миллиметровой бумаги наносят дне прямоугольные оси координат, На осн абсцисс откладываютфотоэлектроколориметра.концентрацию фосфораШкалу (мг),периодическина оси ординатпроверяют,— показанияДля повышения точности анализа рекоменлустся на каждую серню определений готовить 3 стандартных раствора. Содержание неорганического фосфора находят по формуле:

Pea. С.100
Vv

где х — содержание неорганического фосфора, мг%; С — концентра232

ция фосфора, определенная по калибровочной кривой в соответствии с показаниями фотоэлектроколориметра, МГ; у = объем сыворотки ‘в нентрифугате, взятом для цветной реакиии (в 1,5 мл центрифугата содержится 0,3 мл сыворотки); 100— пересчет данных в мг%.

При использовании колориметров типа КОЛ-1М или Дюбоско содержание неорганического фосфора находят по формуле: С.Н, -100 хе" Н..0,3 ? ERCте — COAGЗы DayaHHeеннеорганического> фосфора,. мг%; С — содержание а в STRAP THOM растворе, использованном при колор ни ( и CARR BRTHOLO раствора содержит 0,01 мг aeemope), мг; о слоя стандартного раствора по Е. и 2-~ толщина слоя испытуемого раса ра : 100. ore Аи СВОИ В которой определялся п И ое а паев. eae ees А Se В крови даже при отсутствии гемолит RNS EERE: = ч может нарастать органическая кислотоTPOBSADрастаоримая REY Е|6 братное заявление:счет неорганическогоорганический кислотораствфосфора. П о римыйзднее фосфор. подвергается гидролизу с образованием неорганического фара (в темолизированноя крови гидролиз совершается сразу н весьма интенсивно). Поэтому при взятии крови для определения фосфора необходимо не допускать. гемолиза, а определение проводить непосредственно после взятия крови,

Определение неорганического фосфора с ванадат-молибдатнымв безбелковом фильтратереактивомкрови

Принцип метола. В безбелковом фильтрате фосфор с ванадатмолибдатным реактивом дает лимонно-желтое окрашивание. При концентрации 1—20 мг/л интенсивность окраски пропорциональна содержанию фосфора, Интенсивность полученного окрашивания замеряется на сисктрофотометре или фотоэлектроколориметре Реактивы. 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; концентTeeрировапная Saсерная кислота;100 т eeeрастворВ молибдата500 a водыаммония О(готовятдо 50°ванной С); после охлаждения осторожно приливают 100 мл концентриробу, у долнваютсернойдистиллированнойкислоты, спова охлаждают,водой до1 переносятa: растворв ванадатамерную кол-аммония (2,5< г ванадата. аммония йрастворяют} = в 500 мл кипящейoe дистиллированной воды; кипячение продолжают до тех пор, пока раствор ие окрасится в желтый цвет; после охлаждения раствор переносят в мерную колбу и доливают дистиллированной водой до 1 a; реактив стоек); реактиз na фосфор (готовят путем смешивания растворов молибдата и ванадата аммония в равных объемах; пригоден в течение двух месяцев); стандартный раствор фосфора (2,1940 г однозамещенного фосфата калия, высушенного в эксикаторе над концентрированной серной кислотой до постоянной массы, растворяют B мерной колбе на 500 мл, доводят до метки дистиллированной водой; к готовому раствору ИО 2,5 мл хлороформа). В 1 Ma раствора содержится 1 мг фосфора. Перед употреблением готовят рабочнй стандартный раствор фосфора путем разбавления в 50 awl мл раствора переносят в мерную колбочку на 50 мл и О OBARHGG водой доводят до метки) 1 мл рабочего стандарто а а содержит 20 мкг фосфора у ОР посуда Фотоэлектроколориметр; центрифуга; центрифужные пробирки; НЕО ПОНЕС нагревательный прибор; eye сикатор; термос сольдом у у Xon ны Кровь сразу после взятия осаждают равным объемом охлажденной 20% oil трихлоруксусной кислоты, перемеSTEREO ОЕНЕС К ЕР и помещают в термос со льдом Затем в лаборатории центрифугируют 20 мин при 2000 об/мин Центрифугат сливают в пробирки: он должен быть прозрачным (без: белковый фильтрат можно хранить в холодильнике в течение суток) ВУ Е центрифужные пробирки берут по 0,5 мл ненрифугата т АХ = See GEREN On Ti Fe OD cam реактива re фосфор, пе ТИ ta р стоять в течение 9 ч Центрифугируют mpi 1500. об/мни НИИ г т Фотометрию лучше проводить при длние волиы 436 им (фнолетовый светофильтр) в кювете 10 мм против контроля (2 мл диетиллированной водыды и 2 мл4 реактиваа а наKe фосфор)а В крайнем случае фотометрировать можно, используя синий светофильтр с максимумом пропускания 450—460 им ЕН PASH ROGEMAGE кривой. Берут 0.5: 10: 15 и 90 мл рабочего стандартного раствора, доводят объем до 2 мл дистиллированной водой, добавляют по 2 мл реактнва на фосфор, а далее поступают, как с испытуемыми растворами РасчетXSLpms CONSр CUE я WasSoaв ническогор irфосфорфосфора в крови! проводятoe

234