папление роста посторонней микрофлоры < (Е. со, В. proleus и др.). На рост кишечной палочки наиболее сильное действие оказывает среда Шустовой— Зайденглянца, которая подавляет рост в 93,5% проб, затем следуют бактоагар Плоскирева (в 63%), среда Эндо (в 33,8%), среда Левина (в 27,6%) и среда Дригальского (в 15,3% проб). Одновременно мы установили, что среда Шустовой — Зайденглянца подавляет также рост сальмонеллезных бактерий. При исследовании 40 проб сильно обсемененного материала сальмонеллы на бактоагаре Плоскирева и агаре Эндо в первом случае были выявлены из 35 проб (87,5%), во втором— из 20 (50%). Другой особенностью бактоагара является то, что некоторые сапрофитные микробы (Вас. пезещейсиз, Вас. subtilis) на нем вовсе не растут, а В. proteus образуют О-форму. Таким образом, для практического применения паилучшими по простоте приготовления, подавлению роста посторонней микрофлоры и четкости дифференциальной окраски являются среда Левина и бактоагар Плоскирева. К этим элективиым средам рекомендуется добавлять 1% сахарозы. После выдержки посева в течение 16—18 ч в термостате при наличии подозрительных колоний из них гоTOBAT мазок и окрашивают по Граму, ставят реакцию агглютинации на предметном стекле со смесью из равпых объемов сывороток гертнера, бреслау и суипести(ep в разведении 1:50 в физиологическом растворе. Если такая реакция окажется положительной, то ее ставят с каждой сывороткой в отдельности и определяют таким способом, к какой именно группе относится выделенная культура. Если она дает положительную реакцию агглютинации с двумя сыворотками одновреMCHHO, TO на предметном стекле ставят реакцию с разведением сывороток 1:100 и 1:1000 и следят, с какой сывороткой быстрее наступит реакция агглютинации и произойдет более полное просветление сыворотки. Эта реакция свидетельствует о наличии сальмонелл. Миогда для полной типизации можно провести более углубленное изучение биохимического и серологическоro, а также патогсиного действия выделенной культуры Иа лабораторных животных (обычно на мышах). Такой типизацией преимущественно приходится заниматься 7 115
тогда, когда в организме больного животного изменяются те или иные свойства бактерий вследствие предварительной вакцинации, применения антибиотиков ит. д. и более простые методы исследования не дают возможности днагностировать возбудителя болезни. Для биохимической типизации используют или короткий ряд питательных сред, состоящий из лактозы, сахарозы, глюкозы, маннита и МПБ (для определения индола и сероводорода), или широкий ряд, содержащий, кроме перечисленных веществ, арабинозу, ксилозу, дульцит, глицериновый бульон по Штерну, среду с рамнозой по Биттеру. Результаты посева биохимического ряда проверяют через 16—24 ч после его проведения. Для ускорения учета результатов биохимической типизации на биохимическом ряду можно использовать микропробирки с объемом среды 1 мл, приготовленной на 0,2% -ном полужидком агаре или семенниковом бульоне. Перед засевом питательные среды целесообразно выдержать в термостате 2 ч при температуре 37°С. В таком случае посев даст результаты через 6—8 ч. Для анализа монорецепторного аппарата ставят пробную атглютинацию на предметном стекле с применением агглютинирующих O- и Н-монорецепторных сывороток в Неразведенном виде. на-Методикапредметноеидентификациистекло наносятмикроорганизмовкаплю сыворотки,такова:в которой эмульгируется небольшое количество микробных клеток из скошенного на пробирке агара суточного роста. Для определения О-антигена микробные клетки слёдуетния Н-антигенабрать с верхней части пробирки, а для установлегруппа изучаемой— изкультурыконденсационнойуже определенажидкости.обычнымиЕсли агглютннирующими сыворотками (гертнера, бреслау, суипестифер), то типизацию начинают с помощью О-сывороток этой же группы и в последующем переходят к анализу Н-антигена. Таким путем удается точно определить, к какому типу сальмонелл относится выделенная культура. Однако при определении необходимо учитывать возможность изменчивости монорецепторного аппарата идентифицируемых микробов. Специфические О-сыворотки выявляют групповую принадлежность сальмонелл, а специфические Н-сыворотки устанавливают тип и вид микроба. Сухие адсорбированные сыворотки перед употреблением растворя-
116
<
юг (одну ампулу) в 1 мл или 2 мл стерильной дистилиированной воды или физиологического раствора. С рас'порсиной сывороткой (без дополнительного разведения ce) по вышеуказанной методике ставят пробную реакиню агглютинации на стекле. Для постановки пробирочной реакции агглютинации используют групповые сальмонеллезные сыворотки (гертнера, бреслау, суипестифер и т. д.), которые разводят физиологическим раствором, начиная с 1: 10— 1: 100 и кончая предельным THTPOM, указанным на ампулах или коробке, в которой они уложены. С практической точки зрения целесообразно ставить реакцию с теми сыворотками, с которыми при пробной реакции на предметном стекле были получены положительные результаты. В каждую пробирку добавляют 2—3 капли смыва.суточной культуры с физиологическим раствором из скошенного агара и выдерживают их в течение 2 4 в термостате при температуре 37°С, а затем 16—20 ч в комнатных условиях, после чего читают реакцию по обшепринятой методике. И. В. Шур (1953) считает, что результат пробирочной агглютинации при отсутствии агглютиноскопа удобно читать в зеркале, снятом с микроскопа. И. В. Шур (1970) для ускорения диагноза рекомендуст бактериологически патологический материал исследовать по следующей схеме: микроскопия кляч-препаратов, посев на три пробирки, предварительно подогретых до 38—39°С (первая с мясо-пептонным агаром, вторая —со средой Тисса, содержащей глюкозу, третья— со средой Гисса, содержащей лактозу; во вторую ин третью пробирки помещают поплавки для улавливання газа). После 12—18-часовой инкубации при 37°C учитывают результаты посевов. Получив чистую культуру, изучают морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму), подвижность, культурально-биохимические свойства, ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентной агглютинирующей сальмонеллезной сывороткой (В, С, О) в разведении 1:10, с монотипоспенифическими агглютинирующими сыворотками (гертнера, бреслау и суипестифер) в разведении 1:50, а также с монорецепторными сыворотками. 7 Реакция преципитации. В ветеринарной практике опа широко применяется при исследовании кожепенного сырья на сибирскую язву. Ряд авторов ис117
