тогда, когда в организме больного животного изменяются те или иные свойства бактерий вследствие предварительной вакцинации, применения антибиотиков ит. д. и более простые методы исследования не дают возможности днагностировать возбудителя болезни. Для биохимической типизации используют или короткий ряд питательных сред, состоящий из лактозы, сахарозы, глюкозы, маннита и МПБ (для определения индола и сероводорода), или широкий ряд, содержащий, кроме перечисленных веществ, арабинозу, ксилозу, дульцит, глицериновый бульон по Штерну, среду с рамнозой по Биттеру. Результаты посева биохимического ряда проверяют через 16—24 ч после его проведения. Для ускорения учета результатов биохимической типизации на биохимическом ряду можно использовать микропробирки с объемом среды 1 мл, приготовленной на 0,2% -ном полужидком агаре или семенниковом бульоне. Перед засевом питательные среды целесообразно выдержать в термостате 2 ч при температуре 37°С. В таком случае посев даст результаты через 6—8 ч. Для анализа монорецепторного аппарата ставят пробную атглютинацию на предметном стекле с применением агглютинирующих O- и Н-монорецепторных сывороток в Неразведенном виде. на-Методикапредметноеидентификациистекло наносятмикроорганизмовкаплю сыворотки,такова:в которой эмульгируется небольшое количество микробных клеток из скошенного на пробирке агара суточного роста. Для определения О-антигена микробные клетки слёдуетния Н-антигенабрать с верхней части пробирки, а для установлегруппа изучаемой— изкультурыконденсационнойуже определенажидкости.обычнымиЕсли агглютннирующими сыворотками (гертнера, бреслау, суипестифер), то типизацию начинают с помощью О-сывороток этой же группы и в последующем переходят к анализу Н-антигена. Таким путем удается точно определить, к какому типу сальмонелл относится выделенная культура. Однако при определении необходимо учитывать возможность изменчивости монорецепторного аппарата идентифицируемых микробов. Специфические О-сыворотки выявляют групповую принадлежность сальмонелл, а специфические Н-сыворотки устанавливают тип и вид микроба. Сухие адсорбированные сыворотки перед употреблением растворя-
116
<
юг (одну ампулу) в 1 мл или 2 мл стерильной дистилиированной воды или физиологического раствора. С рас'порсиной сывороткой (без дополнительного разведения ce) по вышеуказанной методике ставят пробную реакиню агглютинации на стекле. Для постановки пробирочной реакции агглютинации используют групповые сальмонеллезные сыворотки (гертнера, бреслау, суипестифер и т. д.), которые разводят физиологическим раствором, начиная с 1: 10— 1: 100 и кончая предельным THTPOM, указанным на ампулах или коробке, в которой они уложены. С практической точки зрения целесообразно ставить реакцию с теми сыворотками, с которыми при пробной реакции на предметном стекле были получены положительные результаты. В каждую пробирку добавляют 2—3 капли смыва.суточной культуры с физиологическим раствором из скошенного агара и выдерживают их в течение 2 4 в термостате при температуре 37°С, а затем 16—20 ч в комнатных условиях, после чего читают реакцию по обшепринятой методике. И. В. Шур (1953) считает, что результат пробирочной агглютинации при отсутствии агглютиноскопа удобно читать в зеркале, снятом с микроскопа. И. В. Шур (1970) для ускорения диагноза рекомендуст бактериологически патологический материал исследовать по следующей схеме: микроскопия кляч-препаратов, посев на три пробирки, предварительно подогретых до 38—39°С (первая с мясо-пептонным агаром, вторая —со средой Тисса, содержащей глюкозу, третья— со средой Гисса, содержащей лактозу; во вторую ин третью пробирки помещают поплавки для улавливання газа). После 12—18-часовой инкубации при 37°C учитывают результаты посевов. Получив чистую культуру, изучают морфологические и тинкториальные свойства (окраска по Граму), подвижность, культурально-биохимические свойства, ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентной агглютинирующей сальмонеллезной сывороткой (В, С, О) в разведении 1:10, с монотипоспенифическими агглютинирующими сыворотками (гертнера, бреслау и суипестифер) в разведении 1:50, а также с монорецепторными сыворотками. 7 Реакция преципитации. В ветеринарной практике опа широко применяется при исследовании кожепенного сырья на сибирскую язву. Ряд авторов ис117
пользовали эту реакцию для диагностики зараженностн 7 сальмонеллами пищевых продуктов. лезеМытелятизучалии выбралиреакциюследующуюпреципитацииметодикупри сесальмонел-проведе. ния. В качестве проб берут часть печени, селезенки и лимфатические узлы (поверхностный шейный или коленной складки). Из каждой пробы 2—3 кусочка стерильно засевают в пробирку с мясо-пептонным бульоном (3—5 мл), которую ставят в термостат на 20—29 ч при температуре 37°С. Затем содержимое пробирки кипятят над спиртовкой 2—3 мин, после чего фильтруют через асбестовую вату, вложенную в воронку, до получения прозрачного фильтрата. Иногда фильтрование приходится пойторять 2—3 раза. для0,2—0,4преципитациимл фильтратаи подслаиваютналиваютк пемув узкуютакойnpobupkyже объем сыворотки или, наоборот, вначале наливают сыворотку, а затем надслаивают фильтрат. При этом должна образоваться четкая граница между сывороткой и фильтратом. Учитывают реакцию в течение 1—2 ч, лучше на темном фоне при проходящем свете. При положительной реакции в месте соприкосновения фильтрата с сывороткой образуется серовато-белое кольцо. Если такоеется кольцо в течение 2 ч не появится, реакция считаВ отрицательной.качестве контроля ставят реакции: 1) сыворотка роткапреципитирующаяненммунизированного+ физиологическийкроликараствор; 2) сывоТакая + фильтрат. можность постановка реакции преципитации дает возОднако диагностировать заболевания в течение 24 y, к бактериологическомуее пока можно применятьметоду выделениялишь как сальмонелл.дополнение чев Гисто-(1951) предложили фагоднагностика.наряду a бактериологическимИ. И. Кокури:Я патологическим7 ЕВ. П. Логиновbckauamperисследованиями(1957) олпредложилиспользоватьметод ускоренной8гистоло-С этой гистологической диагностики сальмонеллеза телят и поросят. Для этой цели берут печень павших и вынужден. но убитых животных; из нее в 2—3 местах вырезают тонкие кусочки (2—2,5 мм), помещают их в широкую пробирку с 15%-ным раствором формалина и нагревают Ha спиртовке 5 мин, не доводя до бурного кипения.
118
