Кетоз коров и телят

1. 0,3 н. раствор NaOH: 12 г NaOH ч. д. а., х. ч. растворяют в 700 мл дистиллированной воды, охлаждают и водой доводят объем в мерной колбе до 1 л.

Для растворов 1 и 2 не так важна абсолютная концентрация, как то, чтобы они нейтрализовали друг друга объем в объем. Последнее проверяется медленным титрованием с индикатором фенолфталеином.

1. Реактив Сомоджи, в 1 л которого содержится:

2. а) медь сернокислая, 5-водная, (CuSO4 × 5H2O) ч. д. а., х. ч. — 8 г;

3. б) натрий углекислый (NaCO3) безводный, ч. д. а., х. ч. — 30 г;

4. в) калий-натрий виннокислый, 4-водный (сегнетова соль) (KNaC4H4O6 ×

× 4H2O), ч. д. а. — 30 г;

• г) калий йодистый (KI), ч. д. а., х. ч. — 5 г;

• д) натрий сернокислый безводный (Na2SO4), ч. д. а., х. ч. — 180 г;

• е) 1 н. раствор едкого натрия (NaOH), х. ч. — 40 мл (готовят из фиксанала);

ж) калий йодноватистокислый 1 н. раствор, ч. д. а., х. ч. (35,67 г KIO3 растворяют в 1 л дистиллированной воды) — 5 мл.

Приготовление раствора Сомоджи.

Натрий углекислый и калий-натрий виннокислый растворяют в 200 мл горячей дистиллированной воды, добавляют раствор NaOH, перемешивают, после чего раствор кипятят для удаления СО2.

Натрий сернокислый растворяют в 500 мл горячей дистиллированной воды и нагревают до кипения. Оба раствора смешивают и добавляют калий йодистый, предварительно растворенный в малом количестве дистиллированной воды. Затем вливают раствор йодноватистокислого калия и после охлаждения доливают дистиллированной водой в мерной колбе до 1 л.

Через несколько дней раствор фильтруют (обычно через 2 дня). Реактив рекомендуется хранить при комнатной температуре, не подвергая его действию солнечного света. Если температура ниже 20°С, выпадают кристаллы натрия сернокислого, то перед употреблением реактив необходимо немного подогреть и растворить осадок. При высоких концентрациях сахара в крови (у мелких животных при сахарной нагрузке) можно использовать более разведенный фильтрат.

1. 2 н. раствор серной кислоты: берут 56 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84) и доводят объем дистиллированной водой в мерной колбе до 1 л.

2. 0,005 н. раствор натрия серноватокислого 5-водного (гипосульфита натрия, Na2S2O3), ч. д. а. (готовят перед анализом из 0,1 н. раствора, приготовленного из фиксанала).

3. 1%-ный раствор крахмала, приготовленный в насыщенном растворе хлористого натрия.

Чтобы приготовить насыщенный раствор NaCl, необходимо при кипячении дистиллированной воды добавлять к ней при перемешивании NaCl до тех пор, пока не образуется осадок, т. е. избыток NaCl останется нерастворенным. После чего к этому раствору добавляют необходимое количество растворимого крахмала.

Например, в колбе объемом 250 мл, заполненной на 2/3 дистиллированной водой, растворяют 35 г NaCl (х. ч., ч. д. а.), нагревают до кипения и добавляют при перемешивании NaCl до тех пор, пока не образуется осадок. Затем раствор охлаждают и надосадочную жидкость переливают в мерную колбу на 100 мл более чем до ее половины. Выливают в ту же колбу 1 г растворимого крахмала (х. ч., ч. д. а.), предварительно растворенного в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды при кипячении в течение 3–5 мин до полного просветления. После этого колбу доливают до метки раствором хлористого натрия. Перемешивают. Приготовленный в насыщенном растворе поваренной соли крахмал сохраняется намного дольше.

1. 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина.

Готовят следующим образом: 0,1 г индикатора фенолфталеина растворяют в 100 мл 96°-ного этилового спирта.

Специальное оборудование и аппаратура . Пробирки 2,0–2,5 × 15 см, водяная баня, микробюретка на 5 мл, мерные колбы на 1000 мл, колбы из термостойкого стекла на 500 и 1000 мл, холодильник бытовой, термос на 3–5 л, центрифуга, штативы для пробирок, пробирки химические.

Материал для исследования. Материалом служит стабилизированная гепарином кровь.

Осаждение белков. Одна часть крови гемолизируется в 5 частях дистиллированной воды и смешивается с 0,3 н. раствора NaOH из расчета: два объема щелочи на один объем крови. Затем добавляют 2 объема 5%-ного раствора сернокислого цинка. Тщательно перемешивают и через 30 мин фильтруют или центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Фильтрат сливают в другую пробирку. Кровь, таким образом, будет разбавлена 1:10. Изменяя соотношение воды и крови, можно получить безбелковый фильтрат меньшей концентрации.

При хранении крови концентрация глюкозы снижается, поэтому осаждение белка необходимо производить сразу после взятия крови. Кровь необходимо по возможности быстрее доставлять в термосе со льдом в лабораторию, где получают безбелковый фильтрат, который может храниться в холодильнике не более 5 дней.

Ход определения. В пробирку для анализа берут 5 мл прозрачного безбелкового фильтрата крови и 5 мл реактива Сомоджи, тщательно перемешивают и помещают на 15 мин в кипящую баню. Охлаждают до комнатной температуры. После охлаждения содержимое пробирки подкисляют 2,5–3,0 мл 2 н. серной кислоты. Чтобы подкисление пробы произошло одновременно, рекомендуется добавлять кислоту, быстро встряхивая пробирку. Затем в пробирку вносят 2– 3 капли 1%-ного раствора крахмала, перемешивают. Титруют из микробюретки 0,005 н. раствором гипосульфита до исчезновения синей окраски.

Контроль делают как опыт, но вместо фильтрата крови используют 5 мл воды.

Расчеты результатов. Расчет результатов ведут по формуле Х = ( А – В ) × 30,

где X — концентрация глюкозы, мг%; А — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченное на титрование контрольной пробы, мл; В — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченное на титрование опытной пробы, мл. Ошибка метода составляет ±5%.

Клиническое значение. Нормативные показатели концентрации глюкозы крови представлены в приложении 2. Снижение глюкозы в крови (гипогликемия) бывает при недостаточности микроэлементов в организме, легкоусвояемых углеводов в рационе, кетозе, остеодистрофии, ацидозе, гипокинезии. Повышение глюкозы в крови (гипергликемия) наблюдается при поражении эндокринной системы, недостаточной продукции инсулина, скармливании больших количеств свеклы, патоки, при сильном возбуждении животного.

4.3. Методы определения кислотно-основного равновесия (КОР)

Постоянство равновесия рН в организме поддерживается четырьмя основными буферными системами — гемоглобиновой, бикарбонатной, фосфатной и белковой. Перечисленные буферные системы представляют собой смесь слабой кислоты и соли этой кислоты. Благодаря им обеспечивается перемещение ионов от мест их образования к местам выделения почками, легкими без нарушения рН крови. рН крови постоянный (7,35–7,45), и изменение его выше 7,8 и ниже 6,8 несовместимо с жизнью; в клинической практике не наблюдается.

Кислотно-щелочное состояние, кроме рН, характеризуется показателями буферных систем, в первую очередь бикарбонатной как наиболее лабильной (время реакции — 30 с). Бикарбонатная буферная система представлена слабой угольной кислотой (Н2СО3) и ее солью (NaHCO3).

Состояние КОР оценивают по следующим показателям крови:

рН — актуальная величина рН артериальной, капиллярной или смешанной венозной крови, определяется без доступа воздуха при температуре 37°С (норма 7,35–7,45);

рСО2 — актуальное рСО2, определяется без доступа воздуха (норма артериальной крови 35–45 мм рт. ст., венозной — 46–58 мм рт. ст.);

АВ — актуальное (истинное) содержание бикарбоната в плазме, рассчитанное при истинном рСО2 и истинном насыщении крови кислородом (норма 19–25 ммоль/л);

SB — стандартный бикарбонат — рассчитанное содержание бикарбоната в плазме при насыщении крови кислородом 100%, рСО2 = 40 мм рт. ст. и при температуре 37°С (артериальная кровь 20–27 ммоль/л, венозная — 20– 29 ммоль/л);

ВЕ-В — рассчитанный истинный избыток оснований крови, измеряется в ммоль/л;

ВВ — буферные основания, связующее звено между КОР и электролитами, непосредственно участвующее в поддержании закона электронейтральности. Сумма бикарбоната и белка составляет 45–50 ммоль/л. Она остается неизменной при дыхательных расстройствах;