Рис. 24
Шприц с колпачком
Описанное выше устройство и способ взятия крови позволяют:
1) применять его непосредственно на ферме и доставлять материал в лабораторию в течение часа;
2) последовательно производить взятие крови «традиционным» способом (в пробирки) и без доступа кислорода воздуха с помощью одной пункции;
3) наличие резинового переходника между иглой и шприцем компенсирует ненужные движения иглы в вене во время присоединения, отсоединения и взятия крови при помощи шприца.
Данный способ исключает:
-
1) воздействие воздуха на пробу крови;
-
2) многократную пункцию вены;
-
3) отсутствие специальных навыков;
-
4) чрезмерное стрессирование животного.
Вместе с тем в ветеринарии анализаторы КОР используются крайне редко. Поэтому состояние бикарбонатной буферной системы чаще проводят по определению в плазме крови резервной щелочности. Под резервной щелочностью понимают запас бикарбонатов крови, определяемый по общему СО2. Известно, что углекислый газ в основном содержится в составе бикарбонатов крови и только 1/20 его часть находится в растворенном и свободном состоянии. Такая малая доля существенно не влияет на оценку состояния бикарбонатной системы по общему СО2.
4.3.1. Определение щелочного резерва в плазме крови диффузионным методом по И. П. Кондрахину
Принцип метода . В одной половине сдвоенной колбы плазма крови обрабатывается серной кислотой, благодаря чему выделяется углекислый газ, находящийся в составе бикарбонатов. Выделившийся углекислый газ поглощается раствором гидроокиси натрия, который находится в другой половине колбы. Избыток гидроокиси натрия, не вошедшего в реакцию с углекислым газом, и половину натрия углекислого (Na2CО3), образовавшегося в процессе поглощения СО2, оттитровывают раствором серной кислоты. По количеству связанной гидроокиси натрия определяют количество выделенного из плазмы углекислого газа, которое эквивалентно содержанию бикарбонатов (NaHСО2).
Реактивы.
- 0,1 н. раствор серной кислоты (из фиксанала).
- 0,02 н. раствор серной кислоты, готовят из 0,1 н. раствора серной кис-
лоты в день исследования.
-
0,1 н. раствора гидроокиси натрия (из фиксанала).
-
0,02 н. раствора гидроокиси натрия готовят из 0,1 н. раствора гидро-
окиси натрия в день исследования.
0,1 н. и 0,02 н. растворы гидроокиси натрия хранят в бутылях, защищенных от доступа воздуха.
-
5%-ный раствор серной кислоты: к 2,7 мл концентрированной серной кислоты добавляют 95 мл дистиллированной воды.
-
1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина (см. с. 56).
-
Вазелиновое масло. 1%-ный раствор гепарина.
Специальное оборудование и аппаратура. Сдвоенные колбы с резиновыми пробками, микробюретки на 2 и 5 мл, штативы универсальные, пипетки на 1, 2, 5 мл, бутыль с тубусом, центрифужные пробирки из толстого стекла, центрифуга, колбы мерные на 100 и 1000 мл.
Материал для исследования. Материалом для исследования служит плазма крови, полученная в условиях, максимально исключающих доступ воздуха в пробу. Для этого в чистые сухие центрифужные пробирки вносят 0,5–1,0 мл вазелинового масла, 1–2 капли 1%-ного раствора гепарина. Кровь берут из яремной вены в подготовленную пробирку под слой вазелинового масла, закрывают пробкой, осторожно перемешивают и ставят в прохладное место (в термос со льдом). В лаборатории кровь центрифугируют в той же пробирке под слоем вазелинового масла (пробирки открывают) при 2500–3000 об/мин в течение 15 мин. Плазму крови хранят в бытовом холодильнике при температуре 4°С. Анализ проводят в течение 8–12 ч после взятия образца крови.
Ход определения. По количеству проб крови с учетом параллельных исследований подбирают сдвоенные колбы и три сдвоенные колбы оставляют для контроля. Точность результатов всей серии исследований полностью зависит от точности титрования раствора гидроокиси натрия в контрольных колбах. Все колбы закрывают резиновыми пробками.
Анализы проводят серийно. В одну из каждой пары сдвоенных колб, поочередно открывая, вносят с помощью пипетки и шприца или резиновой груши по 2 мл 0,02 н. раствора гидроокиси натрия и плотно закрывают пробкой. В смежную колбу, кроме контрольных, опять поочередно открывая и закрывая, вносят 0,5 мл плазмы крови, находящейся под вазелиновым маслом. После этого в колбы с плазмой (контрольные без плазмы), также поочередно открывая, вносят из пипетки (не выдувая) по 1 мл 5%-ного раствора серной кислоты и быстро плотно закрывают пробкой. Проверяют, хорошо ли закрыты колбы, осторожно вращательными движениями перемешивают плазму крови с кислотой и оставляют стоять в течение 4 ч. Перемешивают плазму с кислотой не менее 3 раз.
Через 4 ч приступают к титрованию. Для этого поочередно открывают колбу, где находится раствор гидроокиси натрия, вносят туда 1–2 капли раствора фенолфталеина и титруют из микробюретки на 2 мл 0,02 н. раствором серной кислоты до полного обесцвечивания раствора, которое наступает от одной
последней капли кислоты. Титрование нужно проводить осторожно, не допускать вытекания большой струи кислоты. Опытные и контрольные пробы титруют с одинаковой скоростью.
Расчеты результатов. По разнице результатов титрования в контрольных и опытных образцах определяют количество миллилитров 0,02 н. раствора гидроокиси натрия, связанного с углекислым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы.
Расчет ведут по формуле
x ( об. %CO2 ) = ( V к − V п ) × 0,448 × 100 ,
V пл
где x — количество об. %СО2; V к — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного образца, мл; V п — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование исследуемого образца, мл; V пл — количество плазмы крови, мл (в методике принято равным 0,5 мл); 0,448 — коэффициент пересчета 0,02 н. раствора гидроокиси натрия на СО2 в условиях данной реакции; 100 — коэффициент для перевода результатов анализа на 100 мл плазмы крови.
Для более быстрого расчета концентрации щелочного резерва в плазме разницу количества (мл) 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного и опытного образцов ( V к – V п), умножают на коэффициент 89,6 и получают конечный результат в об. %СО2.
Ошибка метода составляет ± 3%.
Клиническое значение. Нормативные показатели концентрации глюкозы крови представлены в приложении 2. Снижение резервной щелочности крови свидетельствует о сдвиге кислотно-щелочного равновесия в сторону ацидоза, а повышение — алкалоза. Метаболический ацидоз отмечают при однотипном высококонцентратном или силосно-жомовом кормлении, кетозе, вторичной остеодистрофии, ацидозе рубца, сахарном диабете, расстройствах желудочнокишечного тракта, особенно при диарее молодняка, нефрите, нефрозе, септических процессах и т. д. Газовый ацидоз развивается вследствие замедления процесса отдачи углекислоты легкими при расстройстве сердечной деятельности, эмфиземе легких, при нахождении животных в среде с высокой концентрацией в воздухе углекислоты. Метаболический алкалоз у животных наблюдают при алкалозе рубца, введении в организм больших доз пищевой соды, а газовый — при усиленной гипервентиляции легких, выведении из организма большого количества углекислого газа, а также при содержании животных на большой высоте.
4.4. Методы определения кетоновых тел в крови, моче, молоке
4.4.1. Определение кетоновых тел в крови йодометрическим методом
Принцип. Из безбелкового фильтрата перегоняют свободный ацетон и ацетон, образовавшийся из ацетоуксусной и бета-оксимасляной кислот, с при-
