последней капли кислоты. Титрование нужно проводить осторожно, не допускать вытекания большой струи кислоты. Опытные и контрольные пробы титруют с одинаковой скоростью.
Расчеты результатов. По разнице результатов титрования в контрольных и опытных образцах определяют количество миллилитров 0,02 н. раствора гидроокиси натрия, связанного с углекислым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы.
Расчет ведут по формуле
x ( об. %CO2 ) = ( V к − V п ) × 0,448 × 100 ,
V пл
где x — количество об. %СО2; V к — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного образца, мл; V п — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование исследуемого образца, мл; V пл — количество плазмы крови, мл (в методике принято равным 0,5 мл); 0,448 — коэффициент пересчета 0,02 н. раствора гидроокиси натрия на СО2 в условиях данной реакции; 100 — коэффициент для перевода результатов анализа на 100 мл плазмы крови.
Для более быстрого расчета концентрации щелочного резерва в плазме разницу количества (мл) 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного и опытного образцов ( V к – V п), умножают на коэффициент 89,6 и получают конечный результат в об. %СО2.
Ошибка метода составляет ± 3%.
Клиническое значение. Нормативные показатели концентрации глюкозы крови представлены в приложении 2. Снижение резервной щелочности крови свидетельствует о сдвиге кислотно-щелочного равновесия в сторону ацидоза, а повышение — алкалоза. Метаболический ацидоз отмечают при однотипном высококонцентратном или силосно-жомовом кормлении, кетозе, вторичной остеодистрофии, ацидозе рубца, сахарном диабете, расстройствах желудочнокишечного тракта, особенно при диарее молодняка, нефрите, нефрозе, септических процессах и т. д. Газовый ацидоз развивается вследствие замедления процесса отдачи углекислоты легкими при расстройстве сердечной деятельности, эмфиземе легких, при нахождении животных в среде с высокой концентрацией в воздухе углекислоты. Метаболический алкалоз у животных наблюдают при алкалозе рубца, введении в организм больших доз пищевой соды, а газовый — при усиленной гипервентиляции легких, выведении из организма большого количества углекислого газа, а также при содержании животных на большой высоте.
4.4. Методы определения кетоновых тел в крови, моче, молоке
4.4.1. Определение кетоновых тел в крови йодометрическим методом
Принцип. Из безбелкового фильтрата перегоняют свободный ацетон и ацетон, образовавшийся из ацетоуксусной и бета-оксимасляной кислот, с при-
бавлением хромовой смеси и последующим кипячением. В дистилляте определяют весь перегнанный ацетон, связывая его йодом. Ацетон с йодом в щелочной среде образует йодоформ и йодистый натрий. Избыток йода удаляют добавлением серной кислоты, что определяют при помощи титрования раствором гипосульфита. По разности между контролем и опытом находят связанный йод.
Реактивы.
-
0,3 н. (0,3 моль/л) раствор едкого натра: 1,2 NaOH помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой.
-
5%-ный раствор сернокислого цинка (ZnSO ~~4~~ × 7H ~~2~~ 0): 5 г ZnSO4 помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой.
-
Бихроматная смесь. Реактивы: 20 г двухромовокислого калия, 200 мл концентрированной серной кислоты, дистиллированная вода до 1 л.
Приготовление бихроматной смеси:
В мерную колбу на 1 л вливают 400–600 мл дистиллированной воды, осторожно приливают 200 мл концентрированной серной кислоты, постоянно помешивая, затем добавляют 20 г мелкоистолченного двухромовокислого калия. После растворения вещества и остывания реактива доливают дистиллированной водой до метки.
-
20%-ный раствор серной кислоты (по объему): в мерную колбу на 100 мл вливают 20 мл концентрированной серной кислоты и добавляют (дробно) 80 мл дистиллированной воды.
-
10%-ный раствор едкого натра: 10 г NaOH помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой.
-
0,01 н. (0,005 моль/л) раствор йода (готовят перед анализом из 0,1 н. раствора, приготовленного из фиксанала). Титр 0,01 н. раствора йода каждый раз проверяют по 0,01 н. раствору натрия тиосульфата (гипосульфит).
-
0,01 н. (0,01 моль/л) раствор натрия серноватистокислого, 5-водного Nа2SО3 × 5Н2О (готовят из 0,1 н. (0,1 моль/л) раствора, приготовленного из фиксанала).
-
1%-ный раствор крахмала (см. 55). Раствор стоек; с йодом должен давать чисто-синее окрашивание.
Оборудование. Прибор (перегонный аппарат) для определения кетоновых тел (20–30 шт.), его монтируют в вытяжном шкафу; электроплитки (8–10 шт.); микробюретки на 2 и 5 мл; стаканчики химические на 75–100 мл.
Ход определения.
А. Приготовление безбелкового фильтрата по Сомоджи.
К 5 мл крови добавляют 25 мл дистиллированной воды, 10 мл 0,3 н. раствора едкого натра, перемешивают, затем добавляют 10 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, все тщательно взбалтывают и через 10 мин фильтруют через бумажный фильтр. Разведение крови таким образом будет 1:10.
Б. Определение общего количества кетоновых тел.
Непосредственно перед работой включают холодильник и аппарат просасывают 20 мин текучим паром, налив в перегонную колбу дистиллированную воду и добавив в нее немного пемзы для равномерного кипения.
В приемный стаканчик вносят 20 мл дистиллированной воды, 2 мл 0,01 н. раствора йода, 2 мл 10%-ного раствора едкого натра и ставят под холодильник перегонного аппарата, чтобы конец его погрузился в жидкость. В перегонную колбу вносят 10 мл фильтрата крови, 15 мл бихроматной смеси и 10 мл дистиллированной воды. Параллельно готовят контроль в двух аппаратах: в перегонную колбу вносят 20 мл дистиллированной воды и 15 мл бихроматной смеси. Приборы закрывают, соединяют холодильники с водой и включают электроплитки. Опытные образцы кипятят 25 мин, контрольные — 15 мин. Отключают нагрев, снимают перегонную колбу, холодильник смывают небольшим количеством дистиллированной воды. Приемный стаканчик закрывают крышкой и ставят в темное место на 15–20 мин. По истечении указанного срока в приемный стаканчик быстро приливают 2 мл 20%-ного раствора серной кислоты, добавляют 2–3 капли 1%-ного раствора крахмала и титруют 0,01 н. раствором гипосульфита до обесцвечивания.
Расчет ведут по формуле
X мг% = ( А – В ) × 0,25 × 100,
где X — количество кетоновых тел в мг%; А — количество мл 0,01 н. раствора гипосульфата, пошедшего на титрование свободного йода в контрольной пробе; В — количество миллилитров 0,01 н. раствора гипосульфита, пошедшего на титрование свободного йода в опытной пробе; 1 мл 0,01 н. раствора йода связывает в данных условиях 0,25 мг ацетона; 100 — коэффициент перевода, мг%.
В. Определение ацетона и ацетоуксусной кислоты.
В приемный стаканчик вносят 20 мл дистиллированной воды, 2 мл 0,01 н. раствора йода, 2 мл 10%-ного раствора едкого натра, ставят его под холодильник перегонного аппарата. В перегонную колбу вносят 10 мл фильтрата крови, 1 мл 20%-ного раствора серной кислоты и 15 мл дистиллированной воды. Параллельно готовят два контроля: в перегонную колбу вносят 25 мл дистиллированной воды и 1 мл 20%-ного раствора серной кислоты. Закрывают систему, включают электроплитки и кипятят контроль 15 мин, опытные образцы — 25 мин.
Последующий ход анализа такой же, как и при определении общего количества кетоновых тел. Расчет ведут по формуле
X мг% = ( А – В ) × 10,24,
где А — количество миллилитров 0,01 н. раствора гипосульфита, пошедшего на связывание свободного йода в контроле; В — количество миллилитров 0,01 н. раствора гипосульфита, пошедшего на связывание свободного йода в опыте; 10,24 — коэффициент для перевода в мг% в условиях данной реакции. 1 мл 0,01 н. раствора йода соответствует 0,1024 мг ацетона. Количество фильтрата в опыте соответствует 1 мл крови, поэтому связанное количество йода, умноженное на 10,24 (0,1024 × 100), будет соответствовать содержанию ацетона и ацетоуксусной кислоты в 100 мл крови.
Г. Определение β -оксимасляной кислоты.
В приемный стаканчик вносят те же реактивы, что и для определения общего количества кетоновых тел, ставят его под холодильник. Перегонную колбу после отгонки ацетона и ацетоуксусной кислоты охлаждают и вносят в нее
