Например, в колбе объемом 250 мл, заполненной на 2/3 дистиллированной водой, растворяют 35 г NaCl (х. ч., ч. д. а.), нагревают до кипения и добавляют при перемешивании NaCl до тех пор, пока не образуется осадок. Затем раствор охлаждают и надосадочную жидкость переливают в мерную колбу на 100 мл более чем до ее половины. Выливают в ту же колбу 1 г растворимого крахмала (х. ч., ч. д. а.), предварительно растворенного в пробирке в нескольких миллилитрах дистиллированной воды при кипячении в течение 3–5 мин до полного просветления. После этого колбу доливают до метки раствором хлористого натрия. Перемешивают. Приготовленный в насыщенном растворе поваренной соли крахмал сохраняется намного дольше.
- 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина.
Готовят следующим образом: 0,1 г индикатора фенолфталеина растворяют в 100 мл 96°-ного этилового спирта.
Специальное оборудование и аппаратура . Пробирки 2,0–2,5 × 15 см, водяная баня, микробюретка на 5 мл, мерные колбы на 1000 мл, колбы из термостойкого стекла на 500 и 1000 мл, холодильник бытовой, термос на 3–5 л, центрифуга, штативы для пробирок, пробирки химические.
Материал для исследования. Материалом служит стабилизированная гепарином кровь.
Осаждение белков. Одна часть крови гемолизируется в 5 частях дистиллированной воды и смешивается с 0,3 н. раствора NaOH из расчета: два объема щелочи на один объем крови. Затем добавляют 2 объема 5%-ного раствора сернокислого цинка. Тщательно перемешивают и через 30 мин фильтруют или центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин. Фильтрат сливают в другую пробирку. Кровь, таким образом, будет разбавлена 1:10. Изменяя соотношение воды и крови, можно получить безбелковый фильтрат меньшей концентрации.
При хранении крови концентрация глюкозы снижается, поэтому осаждение белка необходимо производить сразу после взятия крови. Кровь необходимо по возможности быстрее доставлять в термосе со льдом в лабораторию, где получают безбелковый фильтрат, который может храниться в холодильнике не более 5 дней.
Ход определения. В пробирку для анализа берут 5 мл прозрачного безбелкового фильтрата крови и 5 мл реактива Сомоджи, тщательно перемешивают и помещают на 15 мин в кипящую баню. Охлаждают до комнатной температуры. После охлаждения содержимое пробирки подкисляют 2,5–3,0 мл 2 н. серной кислоты. Чтобы подкисление пробы произошло одновременно, рекомендуется добавлять кислоту, быстро встряхивая пробирку. Затем в пробирку вносят 2– 3 капли 1%-ного раствора крахмала, перемешивают. Титруют из микробюретки 0,005 н. раствором гипосульфита до исчезновения синей окраски.
Контроль делают как опыт, но вместо фильтрата крови используют 5 мл воды.
Расчеты результатов. Расчет результатов ведут по формуле Х = ( А – В ) × 30,
где X — концентрация глюкозы, мг%; А — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченное на титрование контрольной пробы, мл; В — количество 0,005 н. раствора гипосульфита, затраченное на титрование опытной пробы, мл. Ошибка метода составляет ±5%.
Клиническое значение. Нормативные показатели концентрации глюкозы крови представлены в приложении 2. Снижение глюкозы в крови (гипогликемия) бывает при недостаточности микроэлементов в организме, легкоусвояемых углеводов в рационе, кетозе, остеодистрофии, ацидозе, гипокинезии. Повышение глюкозы в крови (гипергликемия) наблюдается при поражении эндокринной системы, недостаточной продукции инсулина, скармливании больших количеств свеклы, патоки, при сильном возбуждении животного.
4.3. Методы определения кислотно-основного равновесия (КОР)
Постоянство равновесия рН в организме поддерживается четырьмя основными буферными системами — гемоглобиновой, бикарбонатной, фосфатной и белковой. Перечисленные буферные системы представляют собой смесь слабой кислоты и соли этой кислоты. Благодаря им обеспечивается перемещение ионов от мест их образования к местам выделения почками, легкими без нарушения рН крови. рН крови постоянный (7,35–7,45), и изменение его выше 7,8 и ниже 6,8 несовместимо с жизнью; в клинической практике не наблюдается.
Кислотно-щелочное состояние, кроме рН, характеризуется показателями буферных систем, в первую очередь бикарбонатной как наиболее лабильной (время реакции — 30 с). Бикарбонатная буферная система представлена слабой угольной кислотой (Н2СО3) и ее солью (NaHCO3).
Состояние КОР оценивают по следующим показателям крови:
рН — актуальная величина рН артериальной, капиллярной или смешанной венозной крови, определяется без доступа воздуха при температуре 37°С (норма 7,35–7,45);
рСО2 — актуальное рСО2, определяется без доступа воздуха (норма артериальной крови 35–45 мм рт. ст., венозной — 46–58 мм рт. ст.);
АВ — актуальное (истинное) содержание бикарбоната в плазме, рассчитанное при истинном рСО2 и истинном насыщении крови кислородом (норма 19–25 ммоль/л);
SB — стандартный бикарбонат — рассчитанное содержание бикарбоната в плазме при насыщении крови кислородом 100%, рСО2 = 40 мм рт. ст. и при температуре 37°С (артериальная кровь 20–27 ммоль/л, венозная — 20– 29 ммоль/л);
ВЕ-В — рассчитанный истинный избыток оснований крови, измеряется в ммоль/л;
ВВ — буферные основания, связующее звено между КОР и электролитами, непосредственно участвующее в поддержании закона электронейтральности. Сумма бикарбоната и белка составляет 45–50 ммоль/л. Она остается неизменной при дыхательных расстройствах;
BE — избыток или дефицит оснований. Показывает, сколько ммоль кислоты или основания следует добавить в 1 л внеклеточной жидкости для восстановления нормального рН (от −3,4 до +1,4 ммоль/л);
рО2 — напряжение кислорода, отражает концентрацию растворенного в плазме О2 (рО2 артериальной крови 72–105 мм рт. ст.).
Определение перечисленных показателей проводится на специальных приборах в стационарных условиях. Для определения КОР, калия, натрия, хлора, глюкозы, лактата предложены анализаторы ABL поколения 500, 600, 700 (Дания), NOVA статпрофили 2–11 (Австрия), анализаторы газов крови серии 800 (Германия), IL серии 1300 (США), AVL 995-S (Австрия).
В настоящее время на российском рынке достаточно фирм, выпускающих анализаторы для определения КОР крови (ЭЦ-60 и др.).
Для определения КОР с помощью автоматических газоанализаторов обязательным условием является получение крови без доступа воздуха. С этой целью нами было предложено «Устройство взятия цельной крови без доступа воздуха и способ его осуществления» (рацпредложение № 289, выдано Алтайским ГАУ 24 июля 2003 г.). Предлагаемое нами устройство состоит из кровопускательной иглы (1), резиновой трубочки длиной 20 мм с внешним и внутренним диаметром 7 и 4 мм соответственно (2) и одноразового шприца на 2 см3 (3) с колпачком и иглой (4) (рис. 21, 24).
Рис. 21
Устройство для взятия цельной крови без доступа воздуха в сборе
После предварительной стерилизации резиновую трубочку надевают на канюлю иглы, после чего оператор производит взятие крови «обычным» способом (для морфологического, биохимического и других видов исследования), наполняя необходимое количество пробирок (рис. 23).
Для получения крови без доступа кислорода оператор захватывает пальцами левой руки резиновую трубочку (рис. 22, I), а правой берет заранее подготовленный стерильный шприц (стенки шприца необходимо смочить гепарином — последовательно, сначала набрав, а затем выдавив 2 см3 раствора гепарина (5000 ЕД), но так, чтобы канюля шприца осталась наполнена раствором) и вводит его канюлю в резиновую трубочку. После чего, не изменяя положения шприца, перехватывает его левой рукой, а правой оттягивает поршень и набирает кровь до уровня 1–2 см3 (рис. 22, II). По завершении этой манипуляции оператор извлекает иглу, снимает резиновую трубочку с канюли шприца, который быстро закрывает собственным колпачком с иглой (рис. 24).
