уровня глюкозы крови и щелочного резерва сыворотки крови и, таким образом, прогнозировать состояние и направления кетогенеза в организме животного.
Следует отметить, что степень достоверности расчета кетоновых тел ограничивается диапазоном обучающей выборки и зависит прямо пропорционально от качества и правильности определения исходных параметров. В нашем случае обучающая выборка состояла из результатов 62 лабораторных исследований крови клинически здоровых и больных субклиническим кетозом коров. Поэтому увеличение размеров обучающей выборки будет способствовать повышению степени достоверности расчетного показателя. С другой стороны, для объективной оценки уровня кетоновых тел в крови и правильности постановки диагноза при значительном превышении концентрации кетоновых тел верхнего предела физиологических параметров, выявленного в ходе нейросетевого моделирования, мы считаем целесообразным определение содержания кетоновых тел при помощи более точных и апробированных методов количественного и (или) качественного определения, а данный метод следует использовать главным образом для скрининг-диагностики.
Для более точной диагностики кетоза важными показателями являются: количественное определение в крови — общего количества кетоновых тел и их фракций, глюкозы, общего белка, белковых фракций в сыворотке, остаточного и полипептидного азота, кислотно-щелочного состояния крови, общего кальция, неорганического фосфора, активности щелочной фосфатазы; в моче — кетоновых тел, удельного веса, цвета, реакции рН, белка, глюкозы, индикана, аммиака, мочевины, мочевой кислоты и креатинина; в молоке — кислотности, белка, молочного сахара, хлора, кетоновых тел, мочевины (Э. Б. М. Ахмед, 1973; Б. Н. Шестаков, 1980; А. С. Яковлев, 1983; В. А. Пасечник, 1987; H.-P. Nohner, P. Hocker, 1987; М. М. Исламов, 1989; G. Staudacher, 1989; F. Enjabert et al., 2001). В связи с низкой концентрацией фракции АсАс в молоке A. Ubald et al. (2000) рекомендует для диагностики субклинического кетоза определять в молоке β-гидроксибутират (ВНВ), а C. Heuer et al. (2001) с этой целью — метод инфракрасной спектроскопии молока.
Для диагностики кетоза иногда прибегают к пункции печени с последующим патолого-морфологическим, гистологическим, гистохимическим исследованием пунктата. Морфологическим маркером заболевания является комплекс изменений: увеличение количества клеток с процессами вакуолизации, просветлением цитоплазмы и разрушением ультраструктур по всей дольке при их функциональном истощении, развитие очагов микронекрозов и очаговых лимфоидно-клеточных инфильтратов, явления жировой дистрофии с отложением липофусцина, появление всех фаз атрофического цирроза (И. В. Стряпунина, 1998).
В ходе наших исследований была также установлена возможность диагностики ацетонемического состояния у коров посредством микроскопии печеночной ткани. Так, при сопоставлении данных биохимического и гистологического исследования нами была выявлена определенная зависимость между степенью жировой инфильтрации печени и уровнем кетоновых тел в крови больных кетозом коров. Данные исследования представлены в таблице 2.4.
Зависимость жировой инфильтрации печени от концентрации кетоновых тел в крови (ммоль/л)
| Показатель кетогенеза | Крупнокапельная жировая дистрофия преимущественно центролобулярной локализации | Крупнокапельная цен- тролобулярная и тотальная жировая дистрофия | Отсутствие види- мой (при световой микроскопии) жи- ровой дистрофии |
|---|---|---|---|
| n = 9 | n = 3 | n = 6 | |
| ОКТ | 2,81 ± 0,21* | 2,3 ± 0,31* | 3,35 ± 0,28* |
| АсАс | 0,97 ± 0,08* | 1,1 ± 0,09* | 0,78 ± 0,09* |
| ВН | 1,82 ± 0,14* | 1,2 ± 0,07* | 2,57 ± 0,3* |
| ВН/АсАс | 1,9 ± 0,5* | 1,1 ± 0,3* | 3,8 ± 0,7* |
- Р < 0,05.
Из таблицы 2.4 видно, что наиболее высокие значения показателей ОКТ, ВН и ВН/АсАс отмечались у коров с отсутствием выраженной жировой инфильтрации печеночной ткани и составили соответственно 3,35 ± 0,28 ммоль/л, 2,57 ± 0,3 ммоль/л и 3,8 ± 0,7.
При этом более интенсивное поражение печени сопровождается понижением указанных показателей и повышением АсАс. Так, при крупнокапельной жировой дистрофии преимущественно центролобулярной локализации, которая, по мнению Д. Я. Луцкого, А. В. Жарова, В. П. Шишкова и др. (1978), И. В. Стряпуниной (1998), наиболее характерна для субклинического кетоза, концентрация ОКТ, ВН и ВН/АсАс составила 2,28 ± 0,21, 1,84 ± 0,14 ммоль/л и 1,9 ± 0,5 соответственно, уровень АсАс в крови данных животных, напротив, был выше и составил 0,97 ± 0,08 ммоль/л.
Еще более значительная инфильтрация печеночной ткани (крупнокапельная тотальная жировая дистрофия) сопровождалась относительно низким уровнем ОКТ (2,3 ± 0,31 ммоль/л), коэффициентом ВН/АсАс (1,1 ± 0,3) и наибольшей концентрацией АсАс (1,1 ± 0,09 ммоль/л). Высокое значение ВН/АсАс, на наш взгляд, свидетельствует о серьезном нарушении процессов ассимиляции и диссимиляции в печеночной ткани.
Таким образом, жировая инфильтрация печени сопровождается повышением в крови уровня наиболее токсической фракции кетоновых тел (АсАс), снижением концентрации ОКТ, ВН и коэффициента ВН/АсАс, что является характерным для кетоза, и следовательно, жировая инфильтрация печени также может служить неспецифическим маркером кетоза.
Следует подчеркнуть, что субклинический кетоз преимущественно протекает со стертой не всегда заметной клинической картиной, поэтому и постановка диагноза сводится главным образом к результатам лабораторных исследований.
При этом очевидно, что чем раньше будут выявлены соответствующие изменения в биохимическом статусе больного животного, тем быстрее и эффективнее будут проведены лечебно-профилактические мероприятия. В этой связи для выявления ранних критериев диагностики, позволяющих заблаговременно прогнозировать развитие кетоза коров, нами были проведены исследова-
ния, охватывающие подряд два зимне-стойловых периода в течение нескольких лет, по следующей схеме: первое исследование — конец первого зимнестойлового периода, второе и третье — начало и конец второго (последующего) зимне-стойлового периода.
Как уже отмечалось, большинство авторов указывает, что характерные для ранней, субклинической формы кетоза изменения происходят в основном в крови и сопровождаются изменениями в концентрации глюкозы, щелочного резерва, кетоновых телах и соотношении их фракций между собой.
Вследствие этого для анализа и последующей разработки критериев ранней диагностики нами были выбраны указанные выше биохимические показатели.
Было установлено, что изменения концентрации глюкозы, щелочного резерва и ОКТ в течение всего периода исследований имели сезонную динамику повышения и понижения. При этом данные показатели во время зимне-стойлового периода выходили за физиологические значения, а в летне-стойловый период вновь возвращались в физиологические границы.
Однако анализ уровня кетоновых фракций (ВН и АсАс) в крови больных кетозом коров показал, что в течение всего периода исследований значения данных показателей не соответствовали физиологическому уровню. Результаты исследования крови больных кетозом коров представлены в таблице 2.5. Таблица 2.5 2.5 Результаты исследования крови больных кетозом коров (ммоль/л, М ± m, n = 44)
Таблица 2.5 2.5
| Группа коров | Исследования | ||
|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | |
| Глюкоза | |||
| Больные кетозом | 2,18 ± 0,15 | 2,85 ± 0,27 | 2,06 ± 0,14 |
| Клинически здоровые | 2,67 ± 0,16 | 2,8 ± 0,22 | 2,75 ± 0,19 |
| Щелочной резерв | |||
| Больные кетозом | 18,13 ± 1,49 | 21,39 ± 1,44 | 16,69 ± 1,33 |
| Клинически здоровые | 18,75 ± 1,14 | 22,05 ± 1,18 | 19,08 ± 1,29 |
| Общие кетоновые тела (ОКТ) | |||
| Больные кетозом | 2,6 ± 0,23 | 1,02 ± 0,09 | 2,81 ± 0,19 |
| Клинически здоровые | 1,1 ± 0,084 | 0,74 ± 0,064 | 0,9 ± 0,06 |
| Ацетон и ацетоуксусная кислота (АсАс) | |||
| Больные кетозом | 0,72 ± 0,11 | 0,18 ±0,84 | 068 ± 0,06 |
| Клинически здоровые | 0,12 ± 0,01 | 0,06 ± 0,001 | 0,1 ± 0,001 |
| β-оксимасляная кислота (ВН) | |||
| Больные кетозом | 1,87 ± 0,14 | 0,84 ± 0,07 | 2,11 ± 0,14 |
| Клинически здоровые | 0,98 ± 0,1 | 0,69 ± 0,06 | 0,79 ± 0,06 |
| ВН/АсАс | |||
| Больные кетозом | 2,6 ± 0,38 | 4,6 ± 0,38 | 3,1 ± 0,25 |
| Клинически здоровые | 8,17 ± 0,81 | 11,5 ± 1,56 | 7,9 ± 0,62 |
