Кетоз коров и телят

1. 0,02 н. раствор серной кислоты, готовят из 0,1 н. раствора серной кис-

лоты в день исследования.

1. 0,1 н. раствора гидроокиси натрия (из фиксанала).

2. 0,02 н. раствора гидроокиси натрия готовят из 0,1 н. раствора гидро-

окиси натрия в день исследования.

0,1 н. и 0,02 н. растворы гидроокиси натрия хранят в бутылях, защищенных от доступа воздуха.

1. 5%-ный раствор серной кислоты: к 2,7 мл концентрированной серной кислоты добавляют 95 мл дистиллированной воды.

2. 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина (см. с. 56).

3. Вазелиновое масло. 1%-ный раствор гепарина.

Специальное оборудование и аппаратура. Сдвоенные колбы с резиновыми пробками, микробюретки на 2 и 5 мл, штативы универсальные, пипетки на 1, 2, 5 мл, бутыль с тубусом, центрифужные пробирки из толстого стекла, центрифуга, колбы мерные на 100 и 1000 мл.

Материал для исследования. Материалом для исследования служит плазма крови, полученная в условиях, максимально исключающих доступ воздуха в пробу. Для этого в чистые сухие центрифужные пробирки вносят 0,5–1,0 мл вазелинового масла, 1–2 капли 1%-ного раствора гепарина. Кровь берут из яремной вены в подготовленную пробирку под слой вазелинового масла, закрывают пробкой, осторожно перемешивают и ставят в прохладное место (в термос со льдом). В лаборатории кровь центрифугируют в той же пробирке под слоем вазелинового масла (пробирки открывают) при 2500–3000 об/мин в течение 15 мин. Плазму крови хранят в бытовом холодильнике при температуре 4°С. Анализ проводят в течение 8–12 ч после взятия образца крови.

Ход определения. По количеству проб крови с учетом параллельных исследований подбирают сдвоенные колбы и три сдвоенные колбы оставляют для контроля. Точность результатов всей серии исследований полностью зависит от точности титрования раствора гидроокиси натрия в контрольных колбах. Все колбы закрывают резиновыми пробками.

Анализы проводят серийно. В одну из каждой пары сдвоенных колб, поочередно открывая, вносят с помощью пипетки и шприца или резиновой груши по 2 мл 0,02 н. раствора гидроокиси натрия и плотно закрывают пробкой. В смежную колбу, кроме контрольных, опять поочередно открывая и закрывая, вносят 0,5 мл плазмы крови, находящейся под вазелиновым маслом. После этого в колбы с плазмой (контрольные без плазмы), также поочередно открывая, вносят из пипетки (не выдувая) по 1 мл 5%-ного раствора серной кислоты и быстро плотно закрывают пробкой. Проверяют, хорошо ли закрыты колбы, осторожно вращательными движениями перемешивают плазму крови с кислотой и оставляют стоять в течение 4 ч. Перемешивают плазму с кислотой не менее 3 раз.

Через 4 ч приступают к титрованию. Для этого поочередно открывают колбу, где находится раствор гидроокиси натрия, вносят туда 1–2 капли раствора фенолфталеина и титруют из микробюретки на 2 мл 0,02 н. раствором серной кислоты до полного обесцвечивания раствора, которое наступает от одной

последней капли кислоты. Титрование нужно проводить осторожно, не допускать вытекания большой струи кислоты. Опытные и контрольные пробы титруют с одинаковой скоростью.

Расчеты результатов. По разнице результатов титрования в контрольных и опытных образцах определяют количество миллилитров 0,02 н. раствора гидроокиси натрия, связанного с углекислым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы.

Расчет ведут по формуле

x ( об. %CO2 ) = ( V к − V п ) × 0,448 × 100 ,
V пл

где x — количество об. %СО2; V к — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного образца, мл; V п — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование исследуемого образца, мл; V пл — количество плазмы крови, мл (в методике принято равным 0,5 мл); 0,448 — коэффициент пересчета 0,02 н. раствора гидроокиси натрия на СО2 в условиях данной реакции; 100 — коэффициент для перевода результатов анализа на 100 мл плазмы крови.

Для более быстрого расчета концентрации щелочного резерва в плазме разницу количества (мл) 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного и опытного образцов ( V к – V п), умножают на коэффициент 89,6 и получают конечный результат в об. %СО2.

Ошибка метода составляет ± 3%.

Клиническое значение. Нормативные показатели концентрации глюкозы крови представлены в приложении 2. Снижение резервной щелочности крови свидетельствует о сдвиге кислотно-щелочного равновесия в сторону ацидоза, а повышение — алкалоза. Метаболический ацидоз отмечают при однотипном высококонцентратном или силосно-жомовом кормлении, кетозе, вторичной остеодистрофии, ацидозе рубца, сахарном диабете, расстройствах желудочнокишечного тракта, особенно при диарее молодняка, нефрите, нефрозе, септических процессах и т. д. Газовый ацидоз развивается вследствие замедления процесса отдачи углекислоты легкими при расстройстве сердечной деятельности, эмфиземе легких, при нахождении животных в среде с высокой концентрацией в воздухе углекислоты. Метаболический алкалоз у животных наблюдают при алкалозе рубца, введении в организм больших доз пищевой соды, а газовый — при усиленной гипервентиляции легких, выведении из организма большого количества углекислого газа, а также при содержании животных на большой высоте.

4.4. Методы определения кетоновых тел в крови, моче, молоке

4.4.1. Определение кетоновых тел в крови йодометрическим методом

Принцип. Из безбелкового фильтрата перегоняют свободный ацетон и ацетон, образовавшийся из ацетоуксусной и бета-оксимасляной кислот, с при-

бавлением хромовой смеси и последующим кипячением. В дистилляте определяют весь перегнанный ацетон, связывая его йодом. Ацетон с йодом в щелочной среде образует йодоформ и йодистый натрий. Избыток йода удаляют добавлением серной кислоты, что определяют при помощи титрования раствором гипосульфита. По разности между контролем и опытом находят связанный йод.

Реактивы.

1. 0,3 н. (0,3 моль/л) раствор едкого натра: 1,2 NaOH помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой.

2. 5%-ный раствор сернокислого цинка (ZnSO ~~4~~ × 7H ~~2~~ 0): 5 г ZnSO4 помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой.

3. Бихроматная смесь. Реактивы: 20 г двухромовокислого калия, 200 мл концентрированной серной кислоты, дистиллированная вода до 1 л.

Приготовление бихроматной смеси:

В мерную колбу на 1 л вливают 400–600 мл дистиллированной воды, осторожно приливают 200 мл концентрированной серной кислоты, постоянно помешивая, затем добавляют 20 г мелкоистолченного двухромовокислого калия. После растворения вещества и остывания реактива доливают дистиллированной водой до метки.

1. 20%-ный раствор серной кислоты (по объему): в мерную колбу на 100 мл вливают 20 мл концентрированной серной кислоты и добавляют (дробно) 80 мл дистиллированной воды.

2. 10%-ный раствор едкого натра: 10 г NaOH помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой.

3. 0,01 н. (0,005 моль/л) раствор йода (готовят перед анализом из 0,1 н. раствора, приготовленного из фиксанала). Титр 0,01 н. раствора йода каждый раз проверяют по 0,01 н. раствору натрия тиосульфата (гипосульфит).

4. 0,01 н. (0,01 моль/л) раствор натрия серноватистокислого, 5-водного Nа2SО3 × 5Н2О (готовят из 0,1 н. (0,1 моль/л) раствора, приготовленного из фиксанала).

5. 1%-ный раствор крахмала (см. 55). Раствор стоек; с йодом должен давать чисто-синее окрашивание.

Оборудование. Прибор (перегонный аппарат) для определения кетоновых тел (20–30 шт.), его монтируют в вытяжном шкафу; электроплитки (8–10 шт.); микробюретки на 2 и 5 мл; стаканчики химические на 75–100 мл.

Ход определения.

А. Приготовление безбелкового фильтрата по Сомоджи.

К 5 мл крови добавляют 25 мл дистиллированной воды, 10 мл 0,3 н. раствора едкого натра, перемешивают, затем добавляют 10 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка, все тщательно взбалтывают и через 10 мин фильтруют через бумажный фильтр. Разведение крови таким образом будет 1:10.

Б. Определение общего количества кетоновых тел.

Непосредственно перед работой включают холодильник и аппарат просасывают 20 мин текучим паром, налив в перегонную колбу дистиллированную воду и добавив в нее немного пемзы для равномерного кипения.