ГЛАВА 3
МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
3.1. Правила взятия и пересылки патологического
материала
При вскрытии трупов животных, нередко возникает необходимость в проведении дополнительных лабораторных исследований патологического материала для подтверждения или установления диагноза. Поэтому в необходимых случаях определить или подтвердить причину заболевания или гибели животных (включая птиц, зверей, пчел, рыб) при подозрении на инфекционную или инвазионную болезнь или на отравление ветеринарный врач (фельдшер) обязан взять соответствующий патологический материал и направить его в ветеринарную лабораторию для исследования.
Во всех случаях взятия и пересылки материала ветеринарный врач (фельдшер) обязан руководствоваться: «Правилами взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования», а также соответствующими инструкциями по борьбе с болезнями животных, утвержденными Главным управлением ветеринарии МСХ РФ (документ по состоянию на август 2014 г.).
3.2. Взятие материала для патогистологического исследования
Патматериал берут от свежих трупов или вынужденно убитых животных не позднее 12, а летом — 2–3 ч после смерти от тех органов или тканей, где обнаружены патологические изменения, а также из главнейших паренхиматозных органов. Из разных участков патологически измененных органов, тканей вырезают небольшие тонкие (не более 1–2 см толщиной) кусочки. Вместе с пораженными участками ткани захватывают и граничащую с ней сохранившуюся ткань. При иссечении кусочка учитывают микроскопические строение (структуру) того или иного органа или ткани.
Так, кусочки из почки, надпочечников, лимфатического узла берут с таким расчетом, чтобы попадали оба слоя — корковый и мозговой; из головного мозга — серое и белое вещество; из селезенки — белую и красную пульпу; из легкого — части органа с бронхами и плеврой. Из сердца берут несколько кусочков: из мышцы правого и левого желудочков, правого и левого предсердий, папиллярных мышц и области
клапанов. Из всех органов при иссечении захватывают и их капсулу. Из разных отделов желудочно-кишечного тракта вырезают небольшие кусочки размером 2×3 см и перед погружением в фиксирующую жидкость их растягивают на картон и прошивают белыми нитками.
При опухолях, очаговых некрозах, инфекционных гранулемах материал берут с измененного участка, причем вырезают более свежие очажки поражений с окружающей их здоровой тканью. При подборе материала необходимо учитывать особенности развития и локализации патологических процессов, свойственные исследуемому заболеванию.
Так, например, при чуме свиней следует брать кусочки из различных отделов головного мозга, где развиваются характерные для чумы периваскулярные клеточные лимфоидные скопления. При сальмонеллезе свиней важное диагностическое значение имеют очаговые некрозы и гранулемы в печени. Если материал не может быть быстро доставлен в лабораторию, тогда его посылают в консервированном или фиксированном виде.
Взятый для гистоисследований патматериал следует беречь от высыхания, его тотчас же следует опускать в заранее подготовленную фиксирующую жидкость. Выбор фиксатора зависит от целей и метода исследования материала. При этом объем фиксирующей жидкости должен в 10 раз превышать объем патологического материала. Если кусочки органа плавают на поверхности фиксирующей жидкости, то их покрывают одним слоем марли.
Самой доступной и простой фиксирующей жидкостью является 10%-ный раствор нейтрального формалина (1 часть продажного формалина на 9 частей водопроводной воды). Раствор формалина хорошо диффундирует в ткани. Через сутки с начала фиксации жидкость заменяют свежей, и в дальнейшем в ней материал может храниться годами. В холодное время года во избежание промерзания при пересылке материал, профиксированный в формалине, перекладывают в 30–50%-ный раствор глицерина (приготовленный на 10%-ном растворе формалина), в 70%-ный спирт или в насыщенный раствор натрия хлорида. При отсутствии формалина в качестве фиксирующей жидкости используют 96%-ный этиловый спирт или ацетон. При применении спирта толщина кусочков не должна превышать 0,5 см.
Для гистохимических исследований патологический материал можно фиксировать также в жидкости Карнуа (спирт абсолютный — 60 мл, хлороформ — 30 мл и ледяная уксусная кислота — 10 мл) или жидкость Буэна (концентрированная пикриновая кислота — 15 мл, формалин — 5 мл, ледяная уксусная кислота — 1 мл). Фиксирующую
жидкость меняют каждые сутки до тех пор, пока она не станет прозрачной. Оптимальная температура фиксации 37°С.
Патологический материал фиксируют в стеклянной посуде. На банку с кусочками органов и тканей наклеивают этикетку, на которой указывают номер или кличку животного, кому принадлежит, а внутрь нее опускают кусочек плотной бумаги или картона с написанным на нем простым (не химическим) карандашом номером животного. Если в одну посуду помещать несколько объектов исследования от разных животных, то каждый из них завязывают в марлю вместе с отдельной этикеткой.
При проведении судебно-ветеринарной экспертизы рекомендуется осуществлять патогистологические исследования органов пищеварения, дыхания, нейрогормональной, сердечно-сосудистой, мочеполовой, иммунной (включая тимус) систем, где в первую очередь и наиболее демонстративно развиваются изменения. Однако в каждом конкретном случае материал берут от тех органов, где обнаружены патологические изменения.
Результаты комплексных исследований, включая анамнез, клинические, патологоанатомические и лабораторные данные, используют при составлении экспертного заключения.
3.3. Взятие и пересылка патологического материала для бактериологического и вирусологического исследований
Поверхность органа (ткани), от которого будут брать патологический материал, на месте разреза обжигают над пламенем или прижигают нагретой металлической пластинкой. Патологический материал берут стерильными инструментами в стерильную посуду с резиновыми или притертыми пробками.
Патологический материал следует брать как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. При начавшемся разложении материал для исследования непригоден. В лабораторию патматериал отправляют в неконсервированном виде.
Если доставить патматериал в лабораторию в течение суток невозможно, то его консервируют в 30%-ном водном растворе химически чистого глицерина на физиологическом растворе, который предварительно стерилизуют в автоклаве при 120°С в течение 30 мин. В качестве консерванта можно применять также стерильное вазелиновое масло. Материал заливают консервирующей жидкостью в количестве, в 4–5 раз превышающем его объем.
