телок. Процент извлечения зародышей от числа овуляций составил 56,4, или в среднем по 6,5 эмбриона на каждого донора.
Биотехнический метод бескровного получения эмбрионов должен быть простым и надежным, позволяющим с высоким результатом получать эмбрионы в условиях ферм. Был предложен каучуковый 2-канальный катетер длиной 52 см с отверстиями для введения и выведения жидкости. Катетер имеет металлический наконечник с четырьмя отверстиями и шаровидным окончанием, что обеспечивает более легкое прохождение канала шейки матки и уменьшает травмирование её слизистой. Для придания жесткости в полость катетера вставляют металлический упругий стилет. Такая конструкция прибора дает возможность получать до 7 эмбрионов на донора с хорошей суперовуляцией, или 63% от числа овуляций.
По мнению большинства исследователей и практиков, наиболее удобны резиновые катетеры. Они дают возможность получать от 4 до 6 эмбрионов, пригодных к пересадке. Однако такие катетеры иногда трудно проходят через цервикальный канал. Даже после прохождения шейки матки встречаются затруднения в проведении его глубоко в рог матки и контролировании состояния баллончика. Тем не менее, у резиновых катетеров имеются определенные преимущества по сравнению с жесткими металлическими. При их использовании снижается вероятность повреждения эндометрия. Жесткий катетер сравнительно легко проникает в канал шейки матки, но и может повредить эндометрий. При этом в промывную среду попадает кровь, что затрудняет поиск эмбрионов.
В 1980 г. был модифицирован металлический жесткий катетер, который стал представлять из себя трубку из нержавеющей стали и съемного гибкого наконечника из пластика с несколькими отверстиями. Жесткая трубка имеет два пуговчатых утолщения для фиксации трубки в канале шейки матки. Для придания жесткости съемному пластиковому наконечнику вовнутрь трубки вводят упругий стальной стилет.
Такая конструкция катетера обеспечивает удаление введенной среды из рогов матки на 93…96%, а извлечение
эмбрионов – на 56,6% от числа овуляций и получение в среднем 6,2 зародыша на донора. Недостаток катетера – отсутствие надувного баллончика, предотвращающего вытекание промывной среды через канал шейки матки. Поэтому оператору приходится постоянно пережимать рукой основание рога матки во время промывания. а это не всегда удается, особенно у коров с высокой ригидностью ректального канала.
Наиболее подходящий по конструкции оказался прибор, состоящий из металлического цилиндра диаметром 5 мм и длиной 49,5 см. Вовнутрь цилиндра с помощью специального крючка проводят катетер Фоллея, в конце которого сделано 2 отверстия. В верхушку катетера вставляют открытую металлическую упругую спираль диаметром 2,5 мм и длиной 5,5…6 см. К наружному концу катетера Фоллея прикрепляют три конца пластиковых трубок с двумя двухходовыми краниками для регулирования введения и оттока промывной жидкости. Для придания верхушке катетера упругости вставляют жесткий металлический стилет. Упругая спираль предохраняет от проникновения стилета через боковые отверстия верхушки катетера и стабилизирует рабочую часть верхушки после удаления стилета. Общая длина прибора – 60 см.
После расположения катетера в роге матки стилет удаляют и в баллон нагнетают воздух, к катетеру присоединяют систему шлангов с двумя 60-миллиметровыми шприцами. Один из них предназначен для нагнетания, второй – для отсасывания промывной жидкости.
Сбор промывной жидкости с помощью этого прибора составляет 92%, извлечение эмбрионов и яйцеклеток – до 69% от общего числа овуляций. Лучшие результаты получены при извлечении эмбрионов на 8-й день с начала охоты (76%) и несколько хуже – на 6-й и 10-й день (54 и 43% соответственно). В среднем этим прибором извлекают по 6,3 эмбриона на донора с вариациями от 0 до 29. Такая вариабельность связана, прежде всего, с навыком оператора и днем извлечения эмбрионов после первого осеменения. Так, на 6-й день извлекают 54% эмбрионов,
на 7-й – 74, на 8-й – 76 и на 10-й – 43% от общего числа овуляций. Нагнетание и удаление промывной жидкости с помощью шприца облегчают процедуру промывания. Фракционное промывание рогов матки обеспечивает извлечение около 69% эмбрионов от числа овуляций. Процедуру фракционного промывания рогов матки повторяют до 10…15 раз. Процент извлечения после первых пяти вымываний составляет 57, после восьми – 62. Выяснено, что уровень извлечения эмбрионов не зависит от числа предыдущих вымываний. Основная масса зародышей находится в первых трех фракциях промывной среды, но это при условии четкого выполнения всей процедуры промывания рогов матки. Даже при малых затруднениях возникает необходимость повторять процедуру.
В настоящее время для вымывання эмбрионов из рогов матки широко используют 2-канальные катетеры из резины или эластичной полихлорвиниловой пластмассы. Эффективность некоторых из них мы и попытались определить в своих исследованиях (табл. 36).
Как видно из таблицы достоверной разницы в эффективности использования катетеров Нойштадт (Германия), Кассу (Франция) и конструкции ВИЖ не установлено. Хотя при использовании последнего и наблюдается некоторое снижение количества эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток 77,7% против 85,5 и 87,7% при использовании катетеров Кассу и Нойштадт соответственно. Данное заключение подтверждает и повторное промывание рогов матки. Процент извлеченных эмбрионов в этом случае колебался от 2,3% при использовании катетера конструкции ВИЖ до 3,6% при использовании катетера Кассу. При этом необходимо отметить, что эта разница недостоверна. То же самое можно сказать и о потерях промывной жидкости.
Эффективность извлечения эмбрионов в зависимости от количества промывной жидкости показана в таблице 34.
