гипертонических нагрузок. Деформация возникает при измененном внутреннем давлении клеток, или в результате дефектов в клеточных мембранах. По результатам оценки делается заключение о качестве эмбриона и принимается решение о его дальнейшем использовании.
7.2. Временные параметры развития эмбрионов
Овуляция у нормально циклирующих коров происходит через 30-32 ч после начала течки. Оплодотворение ооцита полноценным спермием наступает уже через 3-4 ч после овуляции. Слияние пронуклеусов происходит через 15 ч. после оплодотворения. Оплодотворенные in vitro яйцеклетки коров достигают 2, 4 и 8-клеточной фазы в период между 15-24 ч, 3540 ч и через 45-50 ч после оплодотворения. Ранние и поздние морулы, а также ранние бластоцисты появляются через 120 часов. Через 8 суток в среде обнаруживаются поздние и экспандированные бластоцисты, через 264 часа (11 суток) – вышедшие из зоны пеллюцида.
7.3. Морфологическая оценка качества ооцитов in vitro
Использование технологии in vitro с достаточной эффективностью невозможно без определения способности половых клеток к полноценному созреванию и оплодотворению. Одним из классических способов определения жизнеспособности ооцитов считается оценка их морфологического состояния с использованием прижизненной микроскопии.
Популяция выделенных фолликулярных ооцитов является весьма неоднородной как по морфологии, так и по функциональному состоянию. У 30% всех яйцеклеток выявляются видимые признаки дегенерации: сжатие или фрагментация ооплазмы, увеличение перивителинового пространства, отслоение или полное отсутствие кумулюса;
деформированная, неравномерная по толщине прозрачная оболочка и др. Остальные клетки можно считать пригодными для культивирования, однако при цитогенетическом анализе ооцитов после 24 часов культивирования обнаруживается около 80% зрелых, пригодных к оплодотворению яйцеклеток.
В организме самки ооциты созревают в фолликуле. Тесная связь ооцита и окружающих его кумулюсных клеток обеспечивает его нормальное развитие и созревание.
По состоянию кумулюса яйцеклетки можно подразделить на следующие группы:
-
Ооциты с компактным, многослойным, плотно прилегающим к ооциту, кумулюсом.
-
Ооциты с разрыхленным многослойным кумулюсом.
-
Ооциты с разрыхленным, частично отслоившимся кумулюсом или в виде разрозненных участков, покрывающих ооцит.
Ооплазму у ооцита можно охарактеризовать по следующим признакам:
-
Мелкозернистая, равномерно заполняющая пространство под прозрачной оболочкой.
-
Ооплазма с участками гранулярной конденсации, равномерно заполняющая пространство под прозрачной оболочкой.
Прозрачная оболочка, обеспечивающая связь внутренних структур ооцита с внешней средой, характеризуется следующими данными: опалесцирующая, равномерная по ширине, округлой формы.
Из морфологической оценки качества вышеперечисленных структур слагается общая оценка качества ооцит кумулюсных комплексов и его способности к дальнейшему развитию и созреванию (табл. 40). Популяцию полученных ооцит–кумулюсных комплексов рекомендуется разделять на группы по следующим морфологическим признакам:
1-я группа – компактный, многослойный, плотно прилегающий к ооциту кумулюс; ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняющая прозрачную оболочку;
2-я группа - компактный, многослойный, плотно прилегающий к ооциту кумулюс; ооплазма мелкозернистая, имеет участки гранулярной конденсации;
3-я группа – разрыхленный многослойный кумулюс, плотно прилегающий к ооциту; ооплазма имеет участки гранулярной конденсации;
4-я группа – частично отслоившийсярыхлый кумулюс; ооплазма с гранулярной конденсацией;
5-я группа – ооциты без кумулюса с мелкозернистой ооплазмой равномерно или фрагментарно заполняющуе оболочку.
Таблица 40 - Классификация ооцит-кумулюсных комплексов
| № п/п | Морфологические признаки | Оценка |
|---|---|---|
| 1 | Многослойный компактный кумулюс (не менее 3-х слоев) плотно прилегающий к зоне пеллюцида, ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняет пространство под прозрачной оболочкой, которая равномерная по толщине, опалесцирует, не имеет никаких нарушений, округлая по форме | 5 |
| 2 | Многослойный компактный или разрыхленный кумулюс, плотно прилегающий к зоне пеллюцида, ооплазма имеет участки гранулярной конденсации, прозрачная оболочка округлая, опалесцирует, не имеет дефектов, равномерная по толщине | 4 |
| 3 | Частично отслоившийся кумулюс, ооплазма имеет участки гранулярной конденсации, прозрачная оболочка равномерная по толщине, округлая по форме | 3 |
| 4 | Ооцит без кумулюса, ооплазма мелкозернистая, равномерно заполняет зону пеллюцида, прозрачная оболочка округлая, равномерная по толщине | 2 |
