Таблица 83 - Влияние возраста эмбрионов при их дисекции на приживляемость

По результатов исследования установлено, что наиболее высокую приживляемость после деления показали поздние бластоцисты уровень приживляемости половинок которых составил 45,0%.

Анализ полученных данных позволяет заключить, что в результате деления эмбрионов без микроманипулятора в производственных условиях можно получить дополнительно до 40% телят. Приживляемость половинок при этом методе достигала 31,2%.

ГЛАВА 11. БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ЭМБРИОНОВ IN VITRO

Исследования в области экспериментальной эмбриологии привели к выдающимся результатам, особенно в области медицины, где в 1981 году получили потомство после оплодотворения женской яйцеклетки в культуре in vitro.

В настоящее время все шире развертываются исследования и на сельскохозяйственных животных. Хорошо известно, что репродуктивный материал самок крупного рогатого скота определяется десятком тысяч потенциальных яйцеклеток, подавляющая часть из которых атрезирует и в воспроизводстве не участвует.

Развитие трансплантации как биотехнологического метода позволило более эффективно использовать репродуктивный потенциал высокопродуктивных животных, резко увеличить коэффициент размножения высококлассных особей. Однако

разработанные методы стимуляции не позволяют в полной мере использовать потенциальный воспроизводительный фонд, заложенный в яичниках.

При этом индуцирование высокой степени множественной овуляции отрицательно сказывается на выходе полноценных эмбрионов. Высокая вариабельность и непредсказуемость реакции яичников на гонадотропин делает известные методы ненадежными. Одна из основных ролей в решении данного вопроса отводится биотехнологии in vitro, которая в большей мере могла бы удовлетворить потребности как в производстве эмбрионов на определенных стадиях развития, так и в развитии приоритетных направлений в биотехнологии.

Получение полноценных эмбрионов крупного рогатого скота в условиях in vitro зависит от множества факторов, которые обуславливают нормальное ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов, их оплодотворение и развитие эмбрионов до предтрансплантационных стадий. Строгое соблюдение технологических параметров, стандартизация условий культивирования стабилизируют результативность опытов.

Начальным этапом всех работ по технологии in vitro является получение в достаточном количестве исходного материала и его кратковременное или длительное хранение. Как отмечает Гузеватый О.Е. и др. [20] нерегулярность поступления яичников с мясокомбината является сдерживающим фактором по проведению экспериментов по оплодотворению ооцитов коров вне организма. Разработка методов краткосрочного хранения ооцитов позволила бы планомерно проводить опыты, добиваясь наиболее оптимальных сроков культивирования и оплодотворения.

Кратковременное хранение ооцитов можно проводить как в яичниках, так и в синтетических питательных средах. Однако хранение в яичниках до 12-15 часов не отличается высокой эффективностью. До метафазы 2 созревают только около 5-10% клеток из-за закисления фолликулярной жидкости [19]. Поэтому большинство исследователей склоняется к тому, чтобы снизить

до минимума затраты времени от убоя до постановки эксперимента и, что для максимального эффекта это время не должно превышать 1,5-2 часов [35, 98]. Однако для успешного проведения работ важно не только время доставки яичников в лабораторию, но и состав, и температура питательной среды, в которую они помещаются после вазоэктомирования. Так по данным Старостки В.В. [98] наиболее оптимальный режим для транспортировки яичников в лабораторию в течение 1,5-2 часов – +31-+370С. Индекс дробления в этих условиях на 21,7 и 13,7% выше по сравнению с доставкой яичников при температуре 0-6 и 18-230С соответственно. Аналогичные результаты получены в исследованиях Байбекова Ф.Р. [5], который отмечает, что наивысшая степень экспансии кумулюса (84,7%) наблюдалась в опытной группе, яичники которой транспортировались при температуре 370С. В группе, которая доставлялась в лабораторию при 40С экспансия кумулюсных клеток снижалась на 11% (при Р<0,05).

В исследованиях Martino A. et al. [210] вреда для созревания, оплодотворения и получения эмбрионов. Кратковременное воздействие температуры (100 и ниже) также особо отрицательного влияния не оказывает. Однако длительное воздействие таких температур негативно отражается на жизнеспособности клеток.

Как отмечалось выше, при более длительном хранении яичников (10-15 часов) основная часть ооцитов, сохраняемых таким образом, вообще не инициирует мейоз, поэтому в течение такого срока лучше сохранять изолированные ооциты с созданием для них соответствующих условий (5%СО2 в воздухе, максимальная влажность, а также присутствие необходимых энергетических и гормональных добавок).

Значительна вариабельность результатов культивирования и оплодотворения яйцеклеток вне организма в зависимости от индивидуальных особенностей доноров и в первую очередь – от возраста [47]. В отдельных исследованиях по этому вопросу отмечается, что если процент инициации мейоза и оплодотворяемость ооцитов у коров 5-6 лактаций, животных в