сыворотки в процессе культивирования ранних зародышей является интервал в 96 часов. Выход морул-бластоцист от числа дробящихся клеток увеличивался на 11,2 и 29,7% по сравнению с интервалом времени в 72 и 120 часов при достоверной разнице Р<0,001. Использова ние сыворотки крови коров в стимулированный половой цикл снижало выход бластоцист на 1,9 - 3,5%; в период гормональной обработки на 11,9 - 21,7% при достоверной разнице - Р<0,001.
11.2.3. Оценка эффективности получения эмбрионов в системе in vitro в условиях разной концентрации СО2 в атмосфере
Состав газавой фазы, используемой при культивировании клеток ооцитов in vitro, определяется тремя факторама: типом среды, использованием открытых или закрытых емкостей, а так же необходимой буферной емкостью. Некоторые параметры культивирования могур варьироваться, но должно соблюдаться одно непременное условие – концентрация бикабоната и углекислого газа должны находиться в равновесии. Этот бкфер был выбран главным образом потому, что он соответствует физиологической буферной системе крови, а парционное давление СО2 в легких составляет 40 мм рт.ст., что соответсвует 5%.
Целью исследований являлось изучение влияния различных концентраций углекислого газа в атмосфере на процессы созревания и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота.
Известно, что концентрации углекислого газа в воздухе, окружающем созревающие ооциты и развивающиеся ранние зародыши, оказывает непосредственное влияние на кислотность среды, в которой находятся половые клетки, а значит жизненно важна для создания оптимальных условий культивирования.
Данные о влиянии концентрации углекислого газа в инкубаторе на эффективность созревания и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота, а также развитие ранних
зародышей до предимплантационной стадии (табл. 101) показали, что количество клеток, вступивших в дробление, во II и III группах находилось практически на одном уровне: 62,3% при 7%-ной концентрации СО2 и 67,0% при 5,0%-ной концентрации СО2. Несколько ниже (54,7%) был получен результат при наличии в воздухе 3%-ной концентрацией СО2. Общее количество эмбрионов, достигших стадии развития морула - бластоциста (от количества дробящихся), колебалось от 22,2% при наличии в воздухе 7%-ной концентрации СО2 до 35,3% при 3%-ной, что свидетельствует о менее благоприятном влиянии повышенных концентраций углекислого газа на благополучное развитие зародышей до более поздних стадий и тем самым способствует их дальнейшему культивированию. Так, из 82 дробящихся зародышей при условии 3%-ной концентрации СО2 до стадии бластоциста развилось только 12 (14,6%), при 7%-ной концентрации СО2 данный показатель находился на уровне 3,7%, в то время как при 5%-ной концентрации газа уровень трансплантации дробящихся клеток в бластоцисты составил 22,4% , из которых 86,7% зародыши отличного качества.
Таблица 99 - Влияние концентрации СО2 в воздухе на эффективность получения эмбрионов в культуре in vitro
| Количество | Количество | зародышей, | п- % | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Концентрация СО2 ,% | в том | числе | |||
| опытов | ооцитов | дробящихся | Мо+Бл | из них | |
| Бл | |||||
| 3 | 5 | 150 | 82-54,7 | 29 -35,3 | 12-14,6 |
| 5 | 5 | 200 | 134 -67,0 | 42-31,3 | 30 -22,4 |
| 7 | 5 | 130 | 81 -62,3 | 18- 22,2 | 3-3,7 |
По мере своего развития клетки монослоя так же, как и сами эмбрионы, выделяют в окружающую среду в качестве продукта своей жизнедеятельности углекислый газ и тем самым повышают его концентрацию в воздухе. Влияние снижения
концентрации СО2 в атмосфере по мере роста и развития эмбрионов и клеток кумулюса на уровень эффективности культивирования представлено в таблице 99.
Таблица 100 - Влияние снижения концентрации СО2 в воздухе по мере роста и развития за р одышей
| Количество | Количество | зародышей, | п -% | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Группы ооцитов | в том | числе | |||
| опытов | ооцитов | дробящихся | Мо+Бл | Бл | |
| Контрольная | 5 | 150 | 95 -63,3 | 20-21,0 | 7 -7,4 |
| опытная | 5 | 170 | 98-57,6 | 29 -29,6 | 14 -14,3 |
Так, при культивировании ооцитов опытной группы концентрация СО2 снижалась с момента оплодотворения до окончания опыта с 5,0 до 3,8%, в то время как в контрольной группе содержание углекислого газа в воздухе оставалось постоянным - 5,0%.
Как показывает анализ данных, представленных уровень дробящихся зародышей был несколько выше в контрольной группе на 5,7%. Выход бластоцист в опытной группе превышал контрольную на 6,9%, что свидетельствует о положительном эффекте снижения концентрации СО2 в воздухе по мере роста и развития ранних зародышей.
Питательная среда представляет собой раствор определенного состава, к которому добавляются компоненты различного биологического происхождения (добавки плазмы, сыворотки крови, тканевые экстракты и т.д.). Минеральные компоненты в этих растворах подбираются так, чтобы они выполняли буферную функцию, поддерживая постоянный кислотно-щелочной баланс среды в процессе культивирования. Постоянство рН является одним из основных условий культивирования. В связи с чем вопрос взаимодействия углекислого газа с различными по составу средами вызывает
