извлечению эмбрионов (стимулированный половой цикл) и седьмой день - это день извлечения эмбрионов.
Установлено что уровень дробления ранних зародышей в опытной группе (стимулированный половой цикл) хотя и не достоверно, но был выше по сравнению с контрольной группой (спонтанный половой цикл) на 11,7; 7,8 и 8,8% при использовании сыворотки крови, полученной на нулевой, шестой и седьмой дни полового цикла, то разница по выходу эмбрионов на стадии морула-бластоциста была уже в пользу контрольной группы при использовании сыворотки нулевого дня на 5,3%, шестого дня на 1,6% и седьмого дня на 6,3%. В том числе, по выходу бластоцист данный показатель составил 1,9; 2,9 и 3,5%, соответственно.
При этом следует отметить, что использование сыворотки нулевого дня как в контрольной, так и в опытной группе оказалось более эффективной по сравнению с сывороткой шестого и седьмого дня в контрольной группе на 10,1% и 8,2% и в опытной на 6,1 и 9,2%. В том числе, по выходу бластоцист превышение составляло 6,6 и 8,0%; 7,6 и 9,6%, соответственно. Снижение результативности получения эмбрионов на предимплантационнои стадии при использовании сыворотки крови коров, полученной в стимулированный половой цикл, скорее всего можно объяснить повышенной гормональной нагрузкой на организм животного и определенным изменением гормонального фона по сравнению со спонтанным половым циклом.
Помимо изучения эффективности использования сыворотки, полученной в стимулированный половой цикл, нами изучалась эффективность в системе in vitro сыворотки, полученной в период непосредственно гормональной обработки (табл. 97). Кровь у доноров брали в течение четырех дней обработки спустя 3 часа после утренней инъекции гонадотропина. Из полученных данных, что уровень дробления в контрольной группе достоверно превышал уровень дробления в остальных группах (Р<0,001). Аналогичные показатели получены и по выходу эмбрионов на
предимплантационныхстадиях. Так, общий выход морулбластоцист в контрольной группе превысил опытные на 17,7 - 23,3%, в том числе бластоцист на 11,9 -21,7%.
Такое снижение эффективности получения эмбрионов в культуре in vitro при использовании сыворотки крови, полученной в процессе инъекции гонадотропньгх гормонов можно объяснить стрессовым состоянием животного в этот период, когда в кровь вырабатывается большое количество кортизола.
Таблица 97 - Эффективность использования сыворотки крови коров-доноров, полученной в период гормональной обработки
| Группа | День обработки(взя тие крови) | Кол-во овул. | Кол-во ооцитов | Количество зародышей, n-% | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| В том числе | ||||||
| Дробящихс я, всего | в том числе | |||||
| Мо+Бл | Бл | |||||
| 1 | контроль | - | 285 | 197-69,1** | 106-37,2 | 27-25,5 |
| 2 | 1 | 10-13 | 154 | 73-47,4 | 30-19,5 | 2-6,7 |
| 3-6 | 149 | 76-51,0 | 23-15,4 | 2-8,7 | ||
| 0-2 | 136 | 62-45,6 | 23-16,9 | 2-8,7 | ||
| 3 | 2 | 10-13 | 143 | 55-38,5 | 24-16,8 | 3-12,5 |
| 3-6 | 129 | 52-4,3 | 18-13,9 | 2-11,1 | ||
| 0-2 | 151 | 63-41,7 | 29-19,2 | 3-10,3 | ||
| 4 | 3 | 10-13 | 137 | 71-51,8 | 22-16,0 | 2-9,1 |
| 3-6 | 155 | 77-49,7 | 22-14,2 | 3-13,6 | ||
| 0-2 | 152 | 75-49,3 | 24-15,8 | 2-8,3 | ||
| 5 | 4 | 10-13 | 136 | 53-38,9 | 26-19,1 | 1-3,8 |
| 3-6 | 148 | 70-47,3 | 26-17,6 | 2-7,7 | ||
| 0-2 | 143 | 70-48,9 | 20-14,0 | 1-5,0 | ||
Как было установлено предыдущими исследованиями, наиболее оптимальной является эстральная сыворотка крупного рогатого скота в концентрации от 5% при созревании ооцитов до 15% по мере роста и развития зародыша. В какие периоды
увеличение концентрации сыворотки является наиболее эффективным, мы попытались установить в одном из своих опытов, результаты которого представлены в таблице 98.
Таблица 98 - Эффективность получения ранних зародышей в культуре in vitro в зависимости от времени добавления эстральной сыворотки
| № п/п | Интервал времени, ч | Конц-я сыв-ки,% | Количество, n Количество зародышей, п - % | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| опытов | ооциит ов | дробящ ихся | в том числе | ||||
| Мо+Бл | Бл | ||||||
| 1 | 24 | 15 | 3 | 115 | 55-47,8 | 33-60 | 10-18,2 |
| 20 | 3 | 115 | 62-53,9 | 35-56,4 | 8-12,9 | ||
| 2 | 48 | 15 | 3 | 125 | 71-56,8 | 36-50,7 | 14-19,7 |
| 20 | 3 | 120 | 60-50 | 27-45,0 | 8-13,3 | ||
| 3 | 72 | 15 | 3 | 97 | 52-53,6 | 36-69,2 | 12-23,1 |
| 20 | 3 | 85 | 52-61,2 | 35-67,3 | 10-19,2 | ||
| 4 | 96 | 15 | 3 | 111 | 70-63,1 | 58-82,8** | 24-34,3 |
| 20 | 3 | 120 | 65-54,2 | 49-75,4** | 18-27,7 | ||
| 5 | 120 | 15 | 3 | 131 | 65-9,6 | 35-53,8 | 12-18,5 |
| 20 | 3 | 113 | 52-46,0 | 23^4,2 | 6-11,5 | ||
Как и в предыдущих наших исследованиях колебания уровня дробления во всех случаях не отличалось какой-либо закономерностью и составляло от 46,0 до 63,1%, чего нельзя сказать о выходе морул и бластоцист, наиболее высокий уровень которых наблюдался при добавлении сыворотки через 96 часов после оплодотворения и составлял 75,4% (при концентрации сыворотки 20%) и 82,8% (при концентрации сыворотки 15%) от числа дробящихся зародышей. В среднем - 79,2%, что на 11,2% и 29,7% превышал средний показатель выход зародышей на данной стадии развития при добавлении сыворотки через 72 и 120 часов, соответственно. При этом во втором случае разница высоко достоверна(Р<0,001). Таким образом использование в в культурных системах сыворотки крови коров, находящихся на разных стадиях полового цикла, позволяет увеличить выход бластоцист на 9,8% по сравнению с контролем. Наиболее оптимальным периодом времени увеличения концентрации
