8.1. Влияние различных способов криоконсервирования и деконсервации эмбрионов на их сохранность
Согласно таблице 44 эмбрионы отличного качества при их заморозке с использованием этиленгликоля и оттаивании в растворе сахарозы. сохранили свою жизнеспособность в 100% случаев.
Таблица 45 - Сохранность эмбрионов в зависимости от криопротектора, способа оттаивания и качества эмбрионов
| Качество эмбрионов | Криопротектор | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| этиленгликоль | глицерин | |||||||
| Способ оттаивания | ||||||||
| стандартный | с сахарозой | стандартный | с сахарозой | |||||
| оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n- % | |
| Отличные | 357 | 327-91,6 | 97 | 97-100 | 341 | 312-91,5 | 102 | 92-90,2 |
| Хорошие | 108 | 97-89,8 | 53 | 51-96.2 | 150 | 135-90,0 | 41 | 37-90,2 |
| Удовл. | 36 | 16-44,4 | 33 | 23-69,7 | 29 | 11-37,9 | 20 | 15-75,0 |
Практически такие же результаты были получены в случае с эмбрионами хорошего качества (96,2%), что касается эмбрионов удовлетворительного качества, то наименьший уровень сохранности отмечен при использовании в процессе заморозки глицерина и этиленгликоля – при стандартном методе оттаивания – 37,9 и 44,4% соответственно. В целом же, как при криоконсервации зародышей в этиленгликоле так и при их криоконсервации в глицерине отмечена тенденция снижения сохранности при оттаивании клеток с использованием стандартного метода по сравнению с использованием сахарозы по всем уровням качества эмбрионов.
В таблице 46 приведены результаты исследования по изучению влияния на сохранность эмбрионов криопротектора при замораживании, способа оттаивания и стадии развития эмбрионов.
Анализ полученных данных показывает, что независимо от используемого при замораживании криопротектора и способа оттаивания наибольная выживаемость отмечена у ранних бластоцист по сравнению с морулами и поздними бластоцистами.
Следует отметить и тот факт, что сохранность эмбрионов при использовании стандартного метода оттаивания несколько снижалась по сравнению со способом оттаивания с применением сахарозы 88,4-89,0% против 92,1-92,5% при применении этиленгликоля и глицерина, соответственно, что еще раз подтверждает положительное влияние данного криопротектора на жизнеспособность эмбрионов при их замораживании и оттаивании.
Таблица 46 - Сохранность эмбрионов в зависимости от способа замораживания, оттаивания и стадии развития
| Стадия | Криопротектор | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| этиленгликоль | этиленгликоль | ||||||||
| Способ оттаивания | |||||||||
| стандартный | стандартный | стандартный | стандартный | ||||||
| оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | ||
| Мо | 362 | 320-88,4 | 90 | 83-92,2 | 279 | 236-84,6 | 77 | 68-88,3 | |
| Бл I | 104 | 93-89,4 | 60 | 57-95,0 | 185 | 173-93,5 | 59 | 53-89,8 | |
| Бл II | 35 | 97-77,1 | 33 | 31-93,9 | 56 | 49-87,5 | 27 | 23-85,2 | |
В таблице 47 представлены результаты сохранности эмбрионов в зависимости от их качества, стадии развития и криопротектора. Наивысшую сохранность (96,8%) показали ранние бластоцисты отличного качества, замороженные в этиленгликоле. Несколько ниже (95,3%) при заморозке в глицерине. А самую низкую – поздние бластоцисты удовлетворительного качества, замороженные в глицерине (50,0%). Достаточно высокую сохранность показали также морулы и бластоцисты хорошего качества: от 94,0% (ранние бластоцисты) до 92,8% – морулы.
Таблица 47 - Сохранность эмбрионов в зависимости от криопротектора, стадии развития и их качества
| Качество эмбрион ов | Криопротектор | ||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| этиленгликоль | глицерин | ||||||||||||
| Стадия развития | |||||||||||||
| Мо | Бл I | Бл II | Мо | Бл I | Бл II | ||||||||
| оттаяно, n | пригодных, n-% | оттаяно, n | пригодных, n-% | оттаяно, n | пригодных, n-% | оттаяно, n | пригодных, n-% | оттаяно, n | пригод-ных,n-% | оттаяно, n | пригод-ных,n-% | ||
| Отл. | 326 | 302-93 | 95 | 92-97 | 33 | 30-90,9 | 204 | 181-89 | 170 | 162-95 | 69 | 61-88 | |
| Хор. | 83 | 77-92,8 | 50 | 47-94 | 28 | 24-85,7 | 117 | 105-90 | 62 | 57-92 | 12 | 10-83 | |
| Удовл. | 43 | 24-55,8 | 19 | 11-58 | 7 | 4-57,1 | 35 | 18-51,4 | 12 | 7-58 | 2 | 1-50 | |
8.2. Влияние некоторых факторов при криоконсервировании эмбрионов на их приживляемость
Одним из решающих критериев жизнеспособности как свежих, так и замороженно-оттаянных эмбрионов является их приживляемость.
В таблице 48 представлены результаты пересадки зародышей с учетом одного из факторов, влияющим на его приживляемость после оттаивания и пересадки. Из таблицы видно, что приживляемость свежих эмбрионов достоверно выше замороженно-оттаянных: 69,8% против 55,9 и 57,8% при использовании глицерина и этиленгликоля, соответственно.
