in vitro экстракорпоральным оплодотворением ооцитов и эмбриональным развитием млекопитающих, появилась возможность существенно усовершенствовать метод оплодотворения вне организма.
11.1. Факторы, влияющие на эффективность технологии in vitro
11.1.1. Взаимосвязь морфофункционального состояния яичников и способа выделения ооцитов с эффективностью получения эмбрионов in vitro
| Как показали наши исследования, созревания ооцитов и выход | эффективность эмбрионов | на |
|---|---|---|
| предимплантационных стадиях морфофункциональным состоянием физиологическим состоянием доноров. | взаимосвязана яичников | с и |
Данные по морфологическим показателям яичников, использованных в процессе получения эмбрионов в культуре in vitro (табл. 84) показали, что длина яичников находилась в прямой зависимости от их объема и колебалась от 26,5±1,44 мм (объемом до 4,0 см ) до 39,4±1,6 мм (объемом более 8,0 см ). Аналогичная картина наблюдалась и при анализе данных о ширине яичников, которая колебалась от 15,4±0,97 (объемом до 4,0 до 25,5±1,23 (объемом более 8,0 см).
Таблица 84 - Морфологические показатели яичников, использованных для получения эмбрионов in vitro
| Объем яичника, см3 | Длина яичника, мм | Ширина яичника, мм |
|---|---|---|
| До 4.0 (п=13) | 26,5±1,44 | 15,4±0,97 |
| 4,1-6,0 (п=20) | 29,4+1,35 | 18,9+0,78** |
| 6,1-8,0 (п=20) | 32,5+1,58** | 21,1+0,96*** |
| Более 8,0 (п=16) | 39,4+2,05*** | 25,5±1,23*** |
Таким образом, средние параметры, использованных нами
яичников выглядели следующим образом: объем - 6,9±0,28 см3, длина яичников -31,9±1,61 мм, ширина яичников 20,2+0,99 мм.
При анализе функциональной характеристики яичников мы учитывали такие показатели как количество, качество и размер фолликулов, наличие циклического желтого тела, персистентного желтого тела, наличие кист, желтого тела беременности, гипофункцию яичников.
Взаимосвязь объема яичников с количеством фолликулов и их размерами, а также количеством и качеством ооцитов представлены в таблице 85. Количество антральных фолликулов в зависимости от объема яичников колебалось от 20,2±1,5 при объеме яичника до 4,0 см3 до 29,0±1,2 при объеме яичника 6,18,0 см3. Среднее количество антральных фолликулов на яичник составило 25,7±1,8. Что касается диаметра фолликулов, то здесь складывается следующая картина. Так, при объеме яичника до 4,0 см3 количество антральных фолликулов диаметром до 4 мм составляло 13,6±1,35, свыше 4,0 - 7,6±0,92. При объеме яичника 4,1-6,0 см3 данные показатели выглядели следующим образом: количество антральных фолликулов диаметром до 4,0 мм составляло 17,3+1,14, диаметром свыше 4,0 мм – 8,5±1,0. При объеме яичников 6,1-8,0 см3 и свыше 8,0 мм3 19,8+1,61; 9,7±1,13 и 22,4+2,83; 7,5+1,3, соответственно. Среднее количество фолликулов диаметром до 4,0 мм составляло 18,3+1,73, свыше 4,0 мм 8,3±1,1. В целом количество антральных фолликулов на один яичник составило 13,3±1,4.
Анализ приведенных данных по установлению взаимосвязи количества и размеров фолликулов с количеством и качеством полученных ооцитов показывает, что уровень выхода клеток колебался от 19,3 - 19,6 до 34,0. Причем отмечена достоверная разница по выходу ооцитов между яичниками объемом до 4,0 - 4,1-6,0 см3 по сравнению с яичниками объем, которых составил 6,1-8,0 см3 . В среднем количество ооцитов составило 26,7±3,86. Аналогичная тенденция наблюдалась и по выходу качественных ооцитов. Так, выход клеток у яичников объемом 4,1-6,0 см3 превышал аналогичный показатель яичников диаметром до 4,0; 6,1-8,0 и выше 8,0 см3 на 3,9;8,7 и
8,4%, соответственно.
Таблица 85 - Мофофункциональные показатели яичников
| Показатели | Количество антральных фолликулов | Получено ОКК | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| n | в т.ч. | всего | В т.ч. качественных | |||
| диаметром, мм | n | |||||
| Объем яичника, см³ | ≤4 | 20,2±1,5 | ≤4 | 13,6±1,3 | 19,3±3,1 | 11,3±1,9 |
| ≥4 | 7,6±0,9 | |||||
| 4-6 | 25,3±1,0 | ≤4 | 17,3±1,4 | 34,0±4,53 | 20,0±2,9 | |
| ≥4 | 8,5±1,0 | |||||
| 6-8 | 29,0±1,9 | ≤4 | 19,8±1,6 | 34,0±5,2 | 16,1±2,9 | |
| ≥4 | 9,7±1,1 | |||||
| ≥8 | 28,5±2,8 | ≤4 | 22,4±2,8 | 19,6±2,6 | 11,6±1,7 | |
| ≥4 | 7,5±1,3 | |||||
| в среднем | 25,7±1,8 | ≤4 | 18,3±1,7 | 26,7±3,9 | 14,7±2,4 | |
| ≥4 | 8,3±1,1 | |||||
Таким образом, оптимальными параметрами яичников для аффективного получения достаточного по качеству и количеству ооцитов являются следующие: длина яичника - 29,4 мм, ширина - 18,9 мм, объем -4,1-6,0 см3. При этом общий выход ооцитов составляет 34, в том числе 20 качественных.
При изучении эффективности различных способов выделения ооцитов (надрез лезвием бритвы стенки фолликула, рассечение ткани яичника, аспирация) установлено, что при рассечении ткани яичника общее количество яйцеклеток колебалось от 19 до 121 при среднем показателе 54,5±8,85, и на 58,4 и 56,9% оказалось выше по сравнению с надрезом фолликула и аспирацией, соответственно (табл. 86). Аналогичная картина наблюдалась и по выходу качественных клеток. При рассечении ткани яичника выход качественных ооцитов превышал аналогичный показатель при использовании метода надреза фолликула и аспирации более чем в два раза.
