концентрацией СО2 в атмосфере культуральной системы является 5%, позволяющей получать до 22,4% бластоцист от числа дробящихся зародышей.Снижение концентрации углекислого газа по мере роста и развития клеток повышает выход бластоцист (эмбрионов) по сравнению с контролем на 6,9%.Использование среды Менезо показало более высокую эффективность по сравнению с ТС-199 по мере снижения концентрации СО2 в окружающем воздухе. При 4%-ной концентрации СО2 выход бластоцист увеличился на 20,8%, при 3%-ной концентрации в случае использования среды ТС-199 развитие морул до следующей стадии не произошло.

11.2.4. Влияние плотности ооцитов на единицу объема и площади при получении эмбрионов in vitro

Среди хорошо известных факторов, влияющих на созревание, оплодотворение и развитие ранних зародышей in vitro в первую очередь, после средовых, называется плотность или количество ооцитов на единицу объема. Установлено многими исследованиями, значительно более высокие результаты получаются в том случае, когда ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) культивируются в группах и объясняется это тем, что в процессе группового созревания в экстрацеллюлярной среде аккумулируются ростообразующие факторы, выделяемые ОКК и способствующие созреванию и развитию клеток.Так, Ward F. et. al. сообщает, что в том случае, когда ооциты созревали и оплодотворялись по одному, выход бластоцист значительно снижался по сравнению с культивированием ооцитов в группах по 5, 10, 15 или 25 шт. Аналогичные данные получены и по результатам исследований Nago Y., в которых был установлен не только более высокий выход бластоцист в том случае, когда ооциты культивировались в группах, но и отмечена более высокая внутриклеточная масса эмбрионов и их жизнеспособность. Polasz А. отмечает, что если по уровню созревания и оплодотворения между различными группами ооцитов существенной разницы не отмечено, то выход

бластоцист был достоверно выше при плотности ооцитов 2:1 по сравнению с группами с плотностью 0,5:1 и 1:1.

Особенно остро вопрос оптимизации питательных сред применительно к условиям культивирования ограниченного количества ооцитов встал с разработкой и широким внедрением в практику получения эмбрионов в системе in vitro путем трансцервикальной пункции фолликулов с использованием ультразвукового зонда, когда получают единичные клетки и их ограниченное количество.

Целью наших исследований являлось изучение влияния соотношения ооцит/объем, ооцит/площадь культивирования на эффективность получения эмбрионов в культуре in vitro.

Таблица 102 - Влияние соотношения ооцит/объем на эффективность получения эмбрионов в системе in vitro при площади культуральной поверхности 3.14 см²

Культивирование ооцитов проводилось в культуральной чашке площадью 3,14 см² в объеме среды 100, 200, 300 и 400 мкл (табл.104), а также в чашке Петри диаметром 40 мм и площадью культуральной поверхности 12,6 см² (табл.105) в объеме среды 1,5; 2,5; 3,0 и 3,5 мл. Как показывает анализ представленных данных, более высокие результаты были получены при соотношении ооцит/объем 1:15-1:35 (при площади культуральной поверхности 12,6 см² и 1:4-1:12 (при площади культуральной поверхности 3,14 см²). При этом выход бластоцист колебался на уровне 10-15%, а уровень дробления составлял 43,0-53,0% и 40-56%, соответственно. В среднем данный показатель составлял 12 и 12,4% и 48,5-48,4%. При всех других соотношениях уровень дробления снижался на 9,5-12,8%, а выходбластоцист на 8,5-9,9%.

Таблица 103 - Влияние соотношения ооцит/объем на эффективность получения эмбрионов в системе in vitro при площади культуральной поверхности 12,6 см²