зародышей до предимплантационной стадии (табл. 101) показали, что количество клеток, вступивших в дробление, во II и III группах находилось практически на одном уровне: 62,3% при 7%-ной концентрации СО2 и 67,0% при 5,0%-ной концентрации СО2. Несколько ниже (54,7%) был получен результат при наличии в воздухе 3%-ной концентрацией СО2. Общее количество эмбрионов, достигших стадии развития морула - бластоциста (от количества дробящихся), колебалось от 22,2% при наличии в воздухе 7%-ной концентрации СО2 до 35,3% при 3%-ной, что свидетельствует о менее благоприятном влиянии повышенных концентраций углекислого газа на благополучное развитие зародышей до более поздних стадий и тем самым способствует их дальнейшему культивированию. Так, из 82 дробящихся зародышей при условии 3%-ной концентрации СО2 до стадии бластоциста развилось только 12 (14,6%), при 7%-ной концентрации СО2 данный показатель находился на уровне 3,7%, в то время как при 5%-ной концентрации газа уровень трансплантации дробящихся клеток в бластоцисты составил 22,4% , из которых 86,7% зародыши отличного качества.
Таблица 99 - Влияние концентрации СО2 в воздухе на эффективность получения эмбрионов в культуре in vitro
| Количество | Количество | зародышей, | п- % | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Концентрация СО2 ,% | в том | числе | |||
| опытов | ооцитов | дробящихся | Мо+Бл | из них | |
| Бл | |||||
| 3 | 5 | 150 | 82-54,7 | 29 -35,3 | 12-14,6 |
| 5 | 5 | 200 | 134 -67,0 | 42-31,3 | 30 -22,4 |
| 7 | 5 | 130 | 81 -62,3 | 18- 22,2 | 3-3,7 |
По мере своего развития клетки монослоя так же, как и сами эмбрионы, выделяют в окружающую среду в качестве продукта своей жизнедеятельности углекислый газ и тем самым повышают его концентрацию в воздухе. Влияние снижения
концентрации СО2 в атмосфере по мере роста и развития эмбрионов и клеток кумулюса на уровень эффективности культивирования представлено в таблице 99.
Таблица 100 - Влияние снижения концентрации СО2 в воздухе по мере роста и развития за р одышей
| Количество | Количество | зародышей, | п -% | ||
|---|---|---|---|---|---|
| Группы ооцитов | в том | числе | |||
| опытов | ооцитов | дробящихся | Мо+Бл | Бл | |
| Контрольная | 5 | 150 | 95 -63,3 | 20-21,0 | 7 -7,4 |
| опытная | 5 | 170 | 98-57,6 | 29 -29,6 | 14 -14,3 |
Так, при культивировании ооцитов опытной группы концентрация СО2 снижалась с момента оплодотворения до окончания опыта с 5,0 до 3,8%, в то время как в контрольной группе содержание углекислого газа в воздухе оставалось постоянным - 5,0%.
Как показывает анализ данных, представленных уровень дробящихся зародышей был несколько выше в контрольной группе на 5,7%. Выход бластоцист в опытной группе превышал контрольную на 6,9%, что свидетельствует о положительном эффекте снижения концентрации СО2 в воздухе по мере роста и развития ранних зародышей.
Питательная среда представляет собой раствор определенного состава, к которому добавляются компоненты различного биологического происхождения (добавки плазмы, сыворотки крови, тканевые экстракты и т.д.). Минеральные компоненты в этих растворах подбираются так, чтобы они выполняли буферную функцию, поддерживая постоянный кислотно-щелочной баланс среды в процессе культивирования. Постоянство рН является одним из основных условий культивирования. В связи с чем вопрос взаимодействия углекислого газа с различными по составу средами вызывает
определенный интерес. В нашем случае это среда ТС-199 и среда Менезо (табл. 101).
Таблиц 101 - Влияние концентрации СО2 на эффективность получения эмбрионов в культуре in vitro в зависимости от используемых сред
| среда | Концен трация СО2, % | Количество | количество зародышей, n -% | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| опытов | ооцитов | дробящихс я, | в том числе | |||
| Мо+Бл | из них | |||||
| Бл | ||||||
| ТС-199 | 3 | 5 | 150 | 48 -32,0 | 4 -8,3 | - |
| 4 | 5 | 120 | 42 -35,0 | 6 -14,3 | 1-16,7 | |
| 5 | 5 | 95 | 56 -58,9 | 12-21,4 | 5 -41,7 | |
| Менез о | 3 | 5 | 120 | 49-40,8 | 5 -10,2 | 1 -20,0 |
| 4 | 5 | 120 | 45 -37,5 | 8-17,8 | 3 -37,5 | |
| 5 | 5 | 135 | 79 -58,5 | 17 -21,5 | 7 -41,2 | |
Анализ данных показывает, что уровень дробления зародышей колебался от 32 до 58,9% при использовании ТС-199 и от 37,5 до 58,5% в присутствии среды Менезо при концентрации СО2 от 3,0 до 5,0%. При этом наиболее высокие результаты, как и в предыдущих опытах, получены при 5,0%ной концентрации СО2 (58,9 и 58,5% соответственно). Что касается выхода бластоцист, то среда Менезо показала более высокую эффективность по сравнению с ТС-199 по мере снижения концентрации СО2 в воздухе. Так, если при 5,0%-ной концентрации СO2 выход бластоцист практически не различался (41,7 и 41,2%), то при концентрации углекислого газа 4% эта разница увеличилась до 20,8%. К сожалению небольшая выборка эмбрионов не позволяет судить о достоверности полученных результатов, однако тенденция увеличения выхода бластоцист очевидна, причем если при 3%-ной концентрации СО2 с использованием ТС-199 не получено ни одной бластоцисты, то в случае со средой Менезо получена одна бластоциста из 5 морул (20%). Таким образом, оптимальной
