предимплантационныхстадиях. Так, общий выход морулбластоцист в контрольной группе превысил опытные на 17,7 - 23,3%, в том числе бластоцист на 11,9 -21,7%.
Такое снижение эффективности получения эмбрионов в культуре in vitro при использовании сыворотки крови, полученной в процессе инъекции гонадотропньгх гормонов можно объяснить стрессовым состоянием животного в этот период, когда в кровь вырабатывается большое количество кортизола.
Таблица 97 - Эффективность использования сыворотки крови коров-доноров, полученной в период гормональной обработки
| Группа | День обработки(взя тие крови) | Кол-во овул. | Кол-во ооцитов | Количество зародышей, n-% | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| В том числе | ||||||
| Дробящихс я, всего | в том числе | |||||
| Мо+Бл | Бл | |||||
| 1 | контроль | - | 285 | 197-69,1** | 106-37,2 | 27-25,5 |
| 2 | 1 | 10-13 | 154 | 73-47,4 | 30-19,5 | 2-6,7 |
| 3-6 | 149 | 76-51,0 | 23-15,4 | 2-8,7 | ||
| 0-2 | 136 | 62-45,6 | 23-16,9 | 2-8,7 | ||
| 3 | 2 | 10-13 | 143 | 55-38,5 | 24-16,8 | 3-12,5 |
| 3-6 | 129 | 52-4,3 | 18-13,9 | 2-11,1 | ||
| 0-2 | 151 | 63-41,7 | 29-19,2 | 3-10,3 | ||
| 4 | 3 | 10-13 | 137 | 71-51,8 | 22-16,0 | 2-9,1 |
| 3-6 | 155 | 77-49,7 | 22-14,2 | 3-13,6 | ||
| 0-2 | 152 | 75-49,3 | 24-15,8 | 2-8,3 | ||
| 5 | 4 | 10-13 | 136 | 53-38,9 | 26-19,1 | 1-3,8 |
| 3-6 | 148 | 70-47,3 | 26-17,6 | 2-7,7 | ||
| 0-2 | 143 | 70-48,9 | 20-14,0 | 1-5,0 | ||
Как было установлено предыдущими исследованиями, наиболее оптимальной является эстральная сыворотка крупного рогатого скота в концентрации от 5% при созревании ооцитов до 15% по мере роста и развития зародыша. В какие периоды
увеличение концентрации сыворотки является наиболее эффективным, мы попытались установить в одном из своих опытов, результаты которого представлены в таблице 98.
Таблица 98 - Эффективность получения ранних зародышей в культуре in vitro в зависимости от времени добавления эстральной сыворотки
| № п/п | Интервал времени, ч | Конц-я сыв-ки,% | Количество, n Количество зародышей, п - % | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| опытов | ооциит ов | дробящ ихся | в том числе | ||||
| Мо+Бл | Бл | ||||||
| 1 | 24 | 15 | 3 | 115 | 55-47,8 | 33-60 | 10-18,2 |
| 20 | 3 | 115 | 62-53,9 | 35-56,4 | 8-12,9 | ||
| 2 | 48 | 15 | 3 | 125 | 71-56,8 | 36-50,7 | 14-19,7 |
| 20 | 3 | 120 | 60-50 | 27-45,0 | 8-13,3 | ||
| 3 | 72 | 15 | 3 | 97 | 52-53,6 | 36-69,2 | 12-23,1 |
| 20 | 3 | 85 | 52-61,2 | 35-67,3 | 10-19,2 | ||
| 4 | 96 | 15 | 3 | 111 | 70-63,1 | 58-82,8** | 24-34,3 |
| 20 | 3 | 120 | 65-54,2 | 49-75,4** | 18-27,7 | ||
| 5 | 120 | 15 | 3 | 131 | 65-9,6 | 35-53,8 | 12-18,5 |
| 20 | 3 | 113 | 52-46,0 | 23^4,2 | 6-11,5 | ||
Как и в предыдущих наших исследованиях колебания уровня дробления во всех случаях не отличалось какой-либо закономерностью и составляло от 46,0 до 63,1%, чего нельзя сказать о выходе морул и бластоцист, наиболее высокий уровень которых наблюдался при добавлении сыворотки через 96 часов после оплодотворения и составлял 75,4% (при концентрации сыворотки 20%) и 82,8% (при концентрации сыворотки 15%) от числа дробящихся зародышей. В среднем - 79,2%, что на 11,2% и 29,7% превышал средний показатель выход зародышей на данной стадии развития при добавлении сыворотки через 72 и 120 часов, соответственно. При этом во втором случае разница высоко достоверна(Р<0,001). Таким образом использование в в культурных системах сыворотки крови коров, находящихся на разных стадиях полового цикла, позволяет увеличить выход бластоцист на 9,8% по сравнению с контролем. Наиболее оптимальным периодом времени увеличения концентрации
сыворотки в процессе культивирования ранних зародышей является интервал в 96 часов. Выход морул-бластоцист от числа дробящихся клеток увеличивался на 11,2 и 29,7% по сравнению с интервалом времени в 72 и 120 часов при достоверной разнице Р<0,001. Использова ние сыворотки крови коров в стимулированный половой цикл снижало выход бластоцист на 1,9 - 3,5%; в период гормональной обработки на 11,9 - 21,7% при достоверной разнице - Р<0,001.
11.2.3. Оценка эффективности получения эмбрионов в системе in vitro в условиях разной концентрации СО2 в атмосфере
Состав газавой фазы, используемой при культивировании клеток ооцитов in vitro, определяется тремя факторама: типом среды, использованием открытых или закрытых емкостей, а так же необходимой буферной емкостью. Некоторые параметры культивирования могур варьироваться, но должно соблюдаться одно непременное условие – концентрация бикабоната и углекислого газа должны находиться в равновесии. Этот бкфер был выбран главным образом потому, что он соответствует физиологической буферной системе крови, а парционное давление СО2 в легких составляет 40 мм рт.ст., что соответсвует 5%.
Целью исследований являлось изучение влияния различных концентраций углекислого газа в атмосфере на процессы созревания и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота.
Известно, что концентрации углекислого газа в воздухе, окружающем созревающие ооциты и развивающиеся ранние зародыши, оказывает непосредственное влияние на кислотность среды, в которой находятся половые клетки, а значит жизненно важна для создания оптимальных условий культивирования.
Данные о влиянии концентрации углекислого газа в инкубаторе на эффективность созревания и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота, а также развитие ранних
